宮頸細胞學ASC-US高危HPV陽性患者宮頸病變的結果分析

袁 靜 陳 柳 黨穎慧 蔡浩昱 李 佳 楊 紅

宮頸癌目前仍是威脅女性健康的婦科惡性腫瘤之一，其發生率和病死率占全球女性癌癥第4位。據2020年國際癌癥研究機構的數據，全球新增宮頸癌約60萬例，死亡病例約34萬例[1]。與其他癌癥不同，宮頸癌從癌前病變到癌變一般需要20～30年的時間，患者可通過早期篩查及醫學干預達到預防和治療的目的[2]。目前，常規的宮頸癌篩查包括宮頸細胞學篩查和HPV 檢測。宮頸細胞學篩查主要是采用TBS分類法，在篩查結果中，以非典型鱗狀上皮細胞意義不明確(atypical squamous cells of undetermined significance，ASC-US)多見，但診斷具有一定主觀性，可重復性差，并且臨床醫生在ASC-US的處理上存在一定的分歧，易造成過度治療或漏診，是臨床醫生面臨的難題[3]。

HPV檢測具有高敏感度和陰性預測值[4]。將HPV檢測聯合細胞學進行宮頸篩查，對ASC-US患者采用HPV分流，可將有潛在高風險病變的患者分流出來轉診陰道鏡進一步檢查。因此，本研究對在筆者醫院婦科門診行宮頸篩查，宮頸細胞學ASC-US，hr-HPV陽性患者176例的HPV分型檢測結果及病理結果進行分析，探討不同hr-HPV亞型感染者的組織病理學結果及宮頸高級別鱗狀上皮內病變(high-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL) 及宮頸鱗癌(squamous cell carcinoma,SCC)檢出率之間的關系，旨在為ASC-US患者臨床處理方法的選擇提供更可靠依據。

對象與方法

1.研究對象：回顧性收集2020年6～11月來筆者醫院婦科就診，宮頸細胞學診斷為ASC-US，hr-HPV陽性，且在陰道鏡下行宮頸組織病理學檢查患者的臨床資料。入組女性176例，患者年齡為19～71歲，平均年齡為41.78±11.17歲，均有性生活史。

2.檢測方法：宮頸液基細胞檢查按薄層液基細胞學檢查要求取樣、固定、制片及巴氏染色。依據2014年版子宮頸細胞學Bethesda分類系統進行細胞學診斷，由兩位經驗豐富的細胞病理學專家采用雙盲法進行結果判定，兩位專家意見不一致時，由第3位專家進行判讀。HPV檢測采集患者宮頸脫落細胞，保存于細胞培養液中。采用通用引物多重PCR擴增，流式熒光雜交分型定性檢測27種HPV DNA(具體包括高危16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、82、26；低危6、11、40、42、43、44、55、61、81、83)。陰道鏡下多點活檢及病理學檢查 對ASC-US及hr-HPV陽性患者進一步行陰道鏡宮頸組織活檢。醫師借助電子陰道鏡并使用活檢鉗對無明顯異常者行常規 3、6、9、12點4處取材檢查，對異常者則行異常區域多點取材檢查。標本置于10%甲醛固定液中，送筆者醫院病理科進行檢查。組織石蠟切片經HE染色后由兩位經驗豐富的病理科醫師獨立閱片。診斷結果包括正常或炎癥，低級別鱗狀上皮內病變(low-grade squamous intraepithelial lesion, LSIL)，高級別鱗狀上皮內病變(HSIL)和宮頸鱗癌(SCC)。

3.統計學方法：采用SPSS 26.0統計學軟件對數據進行統計分析，進行χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

1.宮頸活檢結果分析：回顧性統計176例ASC-US合并hr-HPV陽性患者宮頸活檢結果，51例正常，125例異常，其中89例LSIL，30例HSIL，6例SCC，HSIL+檢出率為20.45%。

2.ASC-US患者感染hr-HPV亞型情況：ASC-US患者中，hr-HPV基因亞型檢出率為0.42%～22.92%，位于前6位的分別是HPV16 55例(22.92%)，HPV52 40例(16.67%)，HPV58 28例(11.67%)，HPV53 21例(8.75%)，HPV59 13例(5.42%)，HPV18 12例(5.00%)，詳見表1。

表1 ASC-US患者感染hr-HPV亞型情況[n(%)]

3.不同年齡段ASC-US患者感染hr-HPV亞型情況：將176例ASC-US合并hr-HPV陽性患者按年齡分為4組,分別為≤30歲，31～40歲，41～50歲，≥51歲，結果表明HPV16亞型在各年齡段感染率最高，其次為52、58亞型，詳見圖1。

圖1 不同年齡段ASC-US患者感染hr-HPV亞型情況

4.ASC-US患者感染hr-HPV亞型的組織學結果：ASC-US患者中，單一亞型感染116例，占65.91%，其中，HSIL 20例(17.24%)，SCC 5例(4.31%)；混合感染60例，占34.09 %，其中，HSIL 10例(16.67%)，SCC 1例(1.67%)。單一HPV16亞型感染患者的HSIL+檢出率占52.94%，HPV18亞型感染患者的HSIL+檢出率占16.67%，其他高危亞型HSIL+檢出率占7.89%(χ2=28.283，P<0.01)，三者差異有統計學意義，詳見表2。混合感染中，16/18+其他亞型的HSIL+檢出率分別為30%、20%(χ2=0.198,P=0.656)，差異無統計學意義。16、18+其他亞型與其他混合亞型感染的HSIL+檢出率比較，差異無統計學意義(χ2=2.504，P=0.114)。單一HPV16亞型感染與16亞型的混合感染比較，HSIL+檢出率比較，差異無統計學意義(χ2=2.684,P=0.101)。18亞型和18亞型混合感染的HSIL+檢出率比較，差異無統計學意義(χ2=0.020,P=0.887)，詳見表3。

表2 單一hr-HPV+/ASC-US患者的組織學結果[n(%)]

表3 多重hr-HPV+/ASC-US患者的組織學結果[n(%)]

討 論

目前預防宮頸癌的主要措施包括接種HPV疫苗，宮頸癌篩查等[5]。HPV疫苗在我國尚未完全普及并且尚未有適用于≥45歲婦女接種的疫苗，而且疫苗的預防效果也需要數年時間驗證[6]。因此，采取有效的宮頸癌篩查措施，有助于幫助患者預防及控制病情的發展和惡化[5]。

非典型鱗狀細胞意義不明確(ASC-US)涵概與HPV感染和與腫瘤無關的細胞病變，也包括提示有潛在的鱗狀上皮內病變(squamous intraepithelial lesion，SIL)甚至癌變，不能明確其分類[7]。ASC-US易發生診斷不足或過度診斷，一方面，診斷不足或造成患者病情延誤；另一方面，過度治療也會給患者帶來精神和物質上的負擔。近年來，hr-HPV分型檢測逐漸成為宮頸癌篩查中的重要分流指標[8]。美國預防服務工作組推薦將細胞學結合hr-HPV進行宮頸癌篩查[9]。HPV檢測操作簡便，敏感度重復性好，因此，對ASC-US采用hr-HPV分流，以期對潛在的CIN(cervical intraepithelial neoplasia)患者達到早發現、早診斷、早治療的目的。

本研究納入176例ASC-US/hr-HPV+患者中，HSIL+檢出率為20.45%，與Wang等[10]研究報道的35.65% HSIL+檢出率稍低，原因可能是本研究納入的人群涵蓋了術后以及接受HPV治療的患者。有研究表明，ASC-US可能是發現CIN的最早信號[11]。雖然大多數的ASC-US提示為LSIL，但仍有10%～20%被證實有潛在HSIL風險[7]。這也與本研究結果一致。因此，臨床上對ASC-US患者應高度重視，避免漏診。

本研究發現，ASC-US/hr-HPV+患者HPV亞型檢出率位于前6位的依次為HPV16、52、58、53、59、18。盡管在世界范圍內HPV亞型流行數據顯示，hr-HPV亞型排序是16、18、31、58、52，但由于地域不同，亞洲地區主要以16、52、58流行為主，高于18型感染[12]。我國一些調查研究發現，在北京市流行的HPV亞型依次是16、58、52，在四川省流行的HPV亞型依次為52、58、16[13，14]。一項在中國開展的170萬例一般人群參與的HPV流行病學調查發現，最常見的5種基因亞型為HPV 16、52、58、18 和33[15]。這與本研究結果不完全一致，可能與研究人群為ASC-US患者以及地域差異有關。另外，本研究不同年齡段ASC-US患者感染hr-HPV亞型情況，結果表明，HPV16亞型在各年齡段感染率均為最高，其次為52、58亞型，因此，除了重視HPV16亞型外，在ASC-US患者中52、58亞型應受到重視。

在納入研究的ASC-US/hr-HPV+患者中，通過分析HPV亞型及患者的病理結果表明，單一HPV16、18亞型的HSIL+檢出率高于其他亞型，驗證了HPV16、18在ASC-US患者中也是高致病性亞型。雖然前面結論表明HPV16、52、58亞型在ASC-US人群中檢出率較高，但不同hr-HPV亞型致癌風險不一。有研究表明，HPV31亞型CIN3+檢出率為14.3%[16]。在日本，HPV58亞型在HSIL+及浸潤癌中的檢出率中更為突出[17]。然而本研究未發現除16、18亞型外在HSIL+中檢出率更高的亞型。此外，在混合亞型感染中，未發現單一HPV16/18亞型與含16/18的多重亞型感染患者的HSIL+檢出率差異有統計學意義，這與一些研究結論不同。Lee等[18]研究認為，單一HPV亞型感染的女性患宮頸癌的風險增加19.9倍，而多重HPV亞型感染的女性患宮頸癌的風險增加 31.8 (P<0.001)。李小華等[19]研究顯示，多重hr-HPV感染患者HSIL+風險高于單一hr-HPV感染(P<0.001)，這表明hr-HPV亞型多重感染對宮頸病變的發生與發展有累積作用。筆者后續將繼續收集患者數據并進行研究驗證。

綜上所述，ASC-US是宮頸細胞學篩查常見的異常報告，在進行診斷時要嚴格質控，保證診斷質量，目前認為ASC∶SIL≤3∶1。同時，筆者研究發現，ASC-US患者中以16、52、58為主要感染型，而目前針對≤45歲婦女的二價、四價HPV疫苗主要是16/18亞型，6/11/16/18亞型，希望在今后疫苗的研發中能重視52、58等高危亞型。此外，本研究驗證了HPV16、18亞型在ASC-US患者中是導致HSIL+的高致病性亞型；在關注16、18亞型感染的同時，仍需要關注其他高危亞型，防止HSIL+患者漏診。