乳腺癌組織中E-cadherin表達與CD44V6及N-cadherin表達相關性研究*

梁 塏 賈海全 王皓穎 劉 鵬 史 源

河南省安陽市腫瘤醫院 河南科技大學第四附屬醫院 455000

乳腺癌是常見的女性疾病，其發病率在全球女性所有惡性腫瘤中位于第一位并在逐年上升，也是女性癌癥死亡最主要原因，據統計每年全球超過60萬女性死于乳腺癌，占癌癥死亡人數6.6%，給女性生命健康和生活質量帶來了巨大威脅[1]。有研究報道[2]，腫瘤轉移是乳腺癌致死的一個重要因素，癌細胞能夠從淋巴轉移至其他臟器，導致病情惡化。癌細胞浸潤轉移涉及細胞與細胞、細胞與基質之間的相互作用，上皮—間質轉化(Epithelial-mesenchymal transition，EMT)、黏附因子、蛋白酶等均是參與其中的分子基礎，起到重要的作用。EMT過程中上皮性鈣粘蛋白(E-cadherin)、神經性鈣粘蛋白(N-cadherin)表達水平發生變化，進而通過信號通路調節CD44V6等黏附因子的表達，使癌細胞形態、腫瘤微環境發生變化，增強癌細胞轉移侵襲能力[3]。本研究通過檢測E-cadherin與N-cadherin及CD44V6的表達，探討E-cadherin、N-cadherin及CD44V6聯合檢測在乳腺癌發生發展中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月—2020年8月在我院確診為乳腺癌的105例女性患者，取癌組織及癌旁組織和正常乳腺組織30例制作病理切片，其中年齡30～75歲，平均年齡(54.42±13.86)歲；腫瘤直徑>2cm 57例，≤2cm 48例，平均腫瘤直徑(3.45±0.86)cm；浸潤性導管癌73例，非浸潤性導管癌32例；乳腺癌分級：Ⅰ級(低分化)29例、Ⅱ級(中度分化)37例、Ⅲ級(高度分化)39例；TNM分期：Ⅰ期21例、Ⅱ期43例、Ⅲ期41例；無淋巴結轉移44例，有淋巴結轉移61例；癌旁組織選取與癌組織相對應的距乳腺癌腫塊邊緣>5cm的乳腺組織，正常乳腺組織取自乳腺導管上皮增生病理確診為正常乳腺組織的樣本，均為女性，年齡25～48歲，平均年齡(35.12±6.34)歲。納入標準：(1)經病理或影像學證實診斷為乳腺癌，符合WHO腫瘤國際組織學分類；(2)符合美國癌癥聯合會(AJCC)、國際抗癌聯盟(UICC)指南中乳腺癌分級Ⅰ～Ⅲ級及TNM分期Ⅰ～Ⅲ期標準；(3)未見遠處腫瘤轉移；(4)首次患病，且術前未接受其他任何治療。排除標準：(1)合并其他惡性腫瘤；(2)合并其他系統性疾病；(3)男性乳腺癌患者。本研究所有病例均資料完備，且經醫院倫理委員會審核批準，病患及家屬簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 試劑：10%福爾馬林；E-cadherin兔抗人多抗、CD44V6兔抗人多抗、N-cadherin兔抗人多抗均購于美國Cell Signaling Technology公司；通用SP試劑盒(小鼠/兔鏈霉卵白素—生物素法檢測系統)購于北京中杉金橋生物技術公司。

1.2.2 標本常規取材：以10%福爾馬林溶液進行固定，石蠟包埋處理切片。免疫組化檢測E-cadherin、CD44V6及N-cadherin，嚴格按照SP試劑盒說明書操作。

1.3 判斷標準 E-cadherin、CD44V6及N-cadherin表達陽性物質均位于細胞膜和細胞質，陽性染色呈棕黃色顆粒。染色陽性細胞百分比評分：無細胞染色為0分，25%以下細胞染色為1分，25%～50%細胞染色為2分，50%以上細胞染色為3分；染色深淺評分：不顯色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；根據染色陽性細胞百分比評分和染色深淺評分乘積作為陽性評分結果：陰性為2分以下，弱陽性為2～3分，中度陽性為4～6分，強陽性為6分以上。

2 結果

2.1 E-cadherin、CD44V6及N-cadherin在乳腺癌、癌旁組織及正常乳腺組織中的表達陽性率比較 E-cadherin在乳腺癌組織、癌旁組織及正常乳腺組織中的表達陽性率分別為31.43%、88.57%、100.00%，癌組織陽性率明顯較低(P<0.05)；CD44V6在乳腺癌組織、癌旁組織及正常乳腺組織中的表達陽性率分別為56.19%、8.57%、0.00%，癌組織陽性率明顯較高(P<0.05)；N-cadherin在乳腺癌組織、癌旁組織及正常乳腺組織中的表達陽性率分別為78.10%、20.95%、0.00%，癌組織陽性率明顯較高(P<0.05)。見表1。

表1 E-cadherin、CD44V6及N-cadherin在乳腺癌、癌旁組織及正常乳腺組織中的表達[n(%)]

2.2 E-cadherin、CD44V6及N-cadherin表達與乳腺癌臨床病理特征的相關性 E-cadherin、CD44V6及N-cadherin表達均與乳腺癌腫瘤大小、分級、TNM分期、淋巴結轉移顯著相關(P<0.05)，乳腺癌腫瘤大小、分級、TNM分期、淋巴結轉移與E-cadherin表達呈負相關，與CD44V6及N-cadherin表達呈正相關，與乳腺癌組織學類別無相關性(P>0.05)。見表2。

表2 E-cadherin、CD44V6及N-cadherin表達與乳腺癌臨床病理特征的相關性[n(%)]

2.3 E-cadherin表達與CD44V6及N-cadherin表達相關性 相關分析結果顯示，乳腺癌組織中E-cadherin表達與CD44V6表達呈負相關(r=-0.137，P=0.034)，與N-cadherin表達呈負相關(r=-0.213，P=0.001)；CD44V6表達與N-cadherin表達呈正相關(r=0.329，P=0.000)。

3 討論

女性乳腺癌大約10%在確診時發生轉移，40%發展為轉移性乳腺癌，70%的淋巴結陽性乳腺癌患者預后發生復發，這些都是造成乳腺癌患者死亡的主要原因[4]。因此，對乳腺癌開展疾病監測意義重大。

研究發現[5]， EMT與乳腺癌、泌尿上皮腫瘤、口腔鱗狀上皮癌等多種上皮性惡性腫瘤的發生發展密切相關。EMT參與的過程中重要的標志為E-cadherin表達上調、N-cadherin表達下調，E-cadherin廣泛存在于成熟的上皮細胞中，可調節胚胎組織發育、形成，還參與了細胞之間的信號傳遞交流，促進細胞黏附、聚集、維持細胞形態。乳腺癌細胞會分泌Twist1、Snail1、Six1等多種轉錄因子，通過調控TGF-β、WNTs、NOTCH等信號通路抑制E-cadherin等編碼上皮細胞特異性蛋白的表達，促進黏附連接的降解，同時E-cadherin等蛋白被N-cadherin、波形蛋白、纖維連接蛋白等具有更大連接活性的蛋白取代，從而增強細胞運動型，導致細胞分離[6]。本研究結果顯示，在正常乳腺組織中E-cadherin所有樣本中都存在表達，N-cadherin幾乎都不表達，而在乳腺癌組織中相反，E-cadherin表達明顯下調，N-cadherin表達明顯上調，說明乳腺癌患者中存在EMT過程。通過對病理結果的分析發現，E-cadherin、N-cadherin表達與腫瘤大小、分級(分化程度)、分期、淋巴結轉移密切相關，表現為腫瘤直徑越大，E-cadherin陽性表達越低，N-cadherin陽性表達越高；乳腺癌分化程度越高、TNM分期越高，E-cadherin陽性表達越低，N-cadherin陽性表達越高；在淋巴結轉移患者中，E-cadherin陽性表達低，N-cadherin陽性表達高，提示E-cadherin、N-cadherin參與乳腺癌的發展和轉移，且有負相關性。

在乳腺癌細胞病變轉移過程中，細胞黏附因子起到重要作用。細胞黏附因子存在于細胞表面，作用于細胞與細胞之間、細胞與外基質之間，作為細胞骨架的功能。CD44V6是CD44的變異體，是高度異質性的單鏈跨膜糖蛋白，可作為透明質酸、纖維連接蛋白等受體，與細胞外基質的透明質酸、纖維連接蛋白等結合，改變細胞的形態和運動，使癌細胞逃避免疫系統的識別和殺傷，進入淋巴結生長分化形成轉移灶，促進腫瘤細胞的直接擴散，與乳腺癌的轉移和預后復發有密切聯系[7]。本研究結果顯示，在乳腺癌組織中的CD44V6表達要顯著高于癌旁組織及正常組織，而且CD44V6的陽性表達率與乳腺癌的腫瘤大小、乳腺癌分級、TNM分期、淋巴結轉移情況顯著相關，具體表現為腫瘤直徑越大、乳腺癌分化程度越高、TNM分期越高、癌細胞轉移，CD44V6的陽性表達率越高，提示CD44V6參與了乳腺癌發生發展及癌細胞淋巴結侵襲轉移過程，同時與E-cadherin、N-cadherin陽性表達率比較，CD44V6與E-cadherin陽性表達率呈負相關，與N-cadherin陽性表達率呈正相關，預示著CD44V6、E-cadherin、N-cadherin可能共同促進了乳腺癌的發展和轉移。

綜上所述，E-cadherin、N-cadherin、CD44V6在乳腺癌發生、發展及轉移中起到了重要的作用，且彼此之間密切相關，聯合檢測對乳腺癌的防治、診斷、預后有重要意義。