基于HS-SPME-GC-MS快速分析毛橘紅和光橘紅揮發性成分

周偉明，劉浩，鄭海

廣東食品藥品職業學院(廣東 廣州 510520)

化橘紅CitriGrandisExocarpium即化州橘紅，是蕓香科植物化州柚Citrusgrandis‘Tomentosa’的或柚Citrusgrandis(L.)Osbeck的未成熟或近成熟的干燥外層果皮[1]。前者習稱“毛橘紅”，后者習稱“光七爪”“光五爪”[2]或“光橘紅”。其主要種植于丘陵地帶，主產于廣東、廣西、四川、湖南、湖北、浙江等地，具有散寒、利氣、消痰的功能[3]。在《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第七版)》中，化橘紅被列入新冠肺炎診療組方用藥[4]。2016年4月，化橘紅入選廣東嶺南中藥材第一批立法保護品種，被評為為“中國四大南藥”和“十大廣藥”之一[5]。目前藥典把“毛橘紅”和“光橘紅”均稱為化橘紅，毛橘紅屬于道地藥材，光橘紅不是道地藥材，所以現有關于化橘紅的研究主要集中在毛橘紅[6-8]，而對光橘紅的研究較少。化州柚和柚不屬于同一種植物，其揮發性成分可能存在差異。

頂空固相微萃取(HS-SPME)[9-10]可以避免復雜繁瑣的提取過程，GC-MS[11]可快速準確的檢測目標物(毛橘紅和光橘紅)的揮發性成分，為化橘紅的研究利用提供實驗依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

GCMS-QP2010 Ultra氣相-質譜儀；手動固相微萃取裝置、萃取纖維頭50/30μm DVB/CAR/PDMS、10mL頂空瓶；A11基本型分析研磨機。

1.2 試藥

毛橘紅和光橘紅購自化州市正源堂化橘紅實業有限公司，為蕓香科植物化州柚Citrusgrandis‘Tomentosa’的和柚Citrusgrandis(L.)Osbeck的未成熟干果；切成片再粉碎，過80目篩，備用。

2 方法與結果

2.1 樣品制備

將兩種0.5g粉末狀樣品裝于頂空瓶中，密封，80℃，平衡30min，將萃取纖維頭(50/30μm DVB/CAR/PDMS)插入瓶中，萃取30min，取出立即插入GC-MS進樣口中，解吸附，分離，鑒定。

2.2 GC-MS實驗條件

石英毛細管柱(Rxi-5Sil MS，30m，0.25mm，0.25μm)；99.999%高純度氦氣作為流動相；流速為1.0mL/min；進樣方式為不分流，進樣時間設為1min；進樣口溫度和接口溫度均為250℃；程序升溫：50℃保持1min，3℃/min升到150℃保持1min，5℃/min升到200℃，保持0min，10℃/min升到250℃保持5min，總程序時間55.33min。溶劑延遲時間為2min，電離源：EI；離子源溫度：220℃；掃描范圍：m/z 35～500，質譜記錄時間：2.5～55.0min。

2.3 數據分析

使用NIST.17標準譜庫檢索得到的質譜數據，結合標準質譜圖和相關文獻報道鑒別相應的化學成分。

2.4 樣品的測定

取樣品，按2.1項下方法進行固相微萃取，按2.2項下GC-MS條件進樣測定，記錄圖譜(圖1)。并采用峰面積歸一化法進行分析，得出各化學成分在揮發性組分中的相對質量分數，結果見表1。

圖1 總離子流圖(1為毛橘紅，2為光橘紅)

表1 揮發性成分

續表1

3 討論與結論

本實驗通過HS-SPME-GC-MS對兩種化橘紅的揮發性成分進行快速鑒別。光橘紅鑒定出52種揮發性成分(表1)，占總揮發性成分的87.15%。其中含量較高(5%以上)的是D-檸檬烯(10.28%)、β-石竹烯(8.47%)、大牛兒烯D(6.11%)、β-杜松烯(5.62%)。毛橘紅鑒定出55種揮發性成分(表1)，占總揮發性成分的90.15%。其中含量較高(5%)的是反式-橙花叔醇(10.61%)、大牛兒烯D(9.34%)、γ-摩勒烯(6.42%)、β-杜松烯(5.73%)。圖1和表1的結果提示兩種化橘紅的揮發性物質大體相似，但兩者屬于不同的植物果實，揮發性物質還是存在差異，相較于光橘紅，毛橘紅有異大香葉烯-D、4(15),5,10(14)-大根香葉三烯-1-醇等10種揮發性物質獨有的，光橘紅也有D-樟腦、芳樟醇等7種揮發性物質是獨有的。

采用HS-SPME-GC-MS技術可以避免繁雜的提取過程，快速準確分析兩種化橘紅的揮發性成分，為化橘紅的研究提供實驗依據。