非小細胞肺癌中ALK、KRAS蛋白表達及其臨床意義

桑 梓 劉曉會 黃曉宇 耿明飛

肺癌是常見的惡性腫瘤，在全球發病率與死亡率均居于首位，且呈快速增長趨勢[1]。非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)是常見的肺癌類型，占所有肺癌的80%～85%，具有預后差、早期診斷難等特點[2-3]。NSCLC大多數在發現時已為晚期，主要采用常規化療治療，但化療易導致NSCLC患者免疫功能低下以及不良反應發生[4-5]。間變性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase，ALK)是一種跨膜受體酪氨酸激酶，屬于胰島素受體超家族。ALK融合突變也是治療 NSCLC 新的分子靶點，但是部分患者會出現耐藥性，不適合分子靶向治療[6]。鼠類肉瘤病毒癌基因(KRAS)在許多不同病理類型的肺癌中的表達明顯增高[7]。KRAS的基因突變多見于有吸煙史的腺癌及鱗癌患者[8]。本文通過對ALK和KRAS在非小細胞肺癌組織中的表達及與臨床預后的關系分析，為非小細胞肺癌病情的進一步研究提供數據參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年5月至2019年5月本院收治的非小細胞肺癌患者60例，年齡31～74歲，平均(58.76±8.74)歲。納入標準：①根據《2018年美國國家綜合癌癥網(NCCN)非小細胞肺癌臨床指南》[9]，經組織病理學或細胞學確診為局部晚期非小細胞癌；②患者簽署自愿受試同意書以及知情同意書。排除標準：①合并其他惡性腫瘤；②合并其他器官嚴重性病變；③臨床資料未收集完整。

1.2 資料收集

記錄患者的臨床資料，包括年齡、性別、吸煙史、TNM分期等，其中腫瘤臨床分期(TNM)根據國際抗癌聯盟(Union for International Cancer Control，UICC)/美國癌癥聯合會(American Joint Committee on Cancer，AJCC)第8版肺癌TNM分期標準[10]進行分期。

1.3 ALK和KRAS檢測

所有患者手術切除病灶并按常規固定制作石蠟標本，切成厚約4 μm薄片，采取SP法來進行免疫組化學染色(試劑盒購自美國Santa Cruz公司)，所有步驟均參考說明書進行操作。染色判讀[11]：若ALK和KRAS胞核或胞質出現棕黃色顆粒即為陽性細胞。結果均由兩位病理科醫師在雙盲條件下獨立判斷，其中(-) 和( + )為陰性，( ++)為弱陽性，( +++)為強陽性，弱陽性和強陽性均為陽性。

1.4 隨訪

對入組對象在治療結束后開始，每3個月隨訪一次，隨訪時間為2年，最后隨訪日期是2021年5月12日。隨訪方式包括電話隨訪、短信隨訪及回院復查等，觀察疾病預后情況。

1.5 統計學分析

2 結果

2.1 ALK和KRAS表達與NSCLC患者的臨床資料的關系

ALK、KRAS在NSCLC組織中的陽性表達分別為9例(15.0%)、23例(38.3%)。不同TNM分期患者ALK和KRAS陽性表達差異有統計學意義(P<0.05)，而不同性別、年齡、吸煙狀態和腫瘤直徑患者ALK和KRAS表達差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 ALK和KRAS表達與NSCLC患者的臨床資料的關系/例

2.2 影響非小細胞癌患者預后的單因素分析

所有患者隨訪2年，生存22例，死亡38例。對預后生存影響因素進行分析，結果表明，腫瘤直徑、TNM 分期、ALK和KRAS表達情況是影響非小細胞癌患者預后的相關因素(P<0.05)，見表2。

表2 影響NSCLC患者預后的單因素分析/例

2.3 影響NSCLC患者預后的多因素Logistic分析

多因素Logistic回歸分析顯示，TNM分期Ⅲ ～ Ⅳ期、腫瘤直徑>3 cm、ALK和KRAS表達陽性為影響NSCLC患者預后的獨立危險因素(P<0.05)，見表 3。

表3 影響NSCLC患者預后的多因素Logistic分析

3 討論

根據2018年WHO統計數據顯示，全球新發肺癌病例超過200萬人，因肺癌導致的死亡人數超過170萬[12]。根據國家癌癥中心的統計數據，2013年肺癌新發病例數約為73.28萬例，死亡例數約為53.07萬例[13]。在我國肺癌的發病率位列所有惡性腫瘤第一位，且近年來患病人數呈現上升和年輕化的趨勢[14]，因其預后差等原因，患者5年內的生存率極低，僅為7%～14%[15]。超過85%診斷為非小細胞肺癌的患者的5年生存率低至15.9%[16]。NSCLC的主要治療方法包括手術、放療、化療、靶向治療等[17]。盡管這些常規療法取得了一定的成功，但NSCLC患者的預后并沒有明顯改善，患者術后易出現復發轉移，以至于療效不佳，預后不良[18]。

人類ALK基因位于2p23染色體區段，編碼1620個氨基酸的多肽，經過翻譯后修飾產生200～220 kDa的成熟ALK蛋白[19]。ALK成熟蛋白是一種經典的受體酪氨酸激酶，包括1個由1030個氨基酸組成的細胞外配體結合域(aa)、1個跨膜域(28 aa)和1個細胞內酪氨酸激酶域(561 aa)[20-21]。多數ALK突變位于激酶結構域內，具有致癌作用。KRAS是人類RAS基因家族的一員，編碼1個小的GTPase膜結合蛋白，RAS蛋白充當細胞開關，由細胞外刺激打開，導致RAS的活性GTP結合形式的瞬時形成，從而激活調節基本細胞過程的不同信號通路[22-23]。RAS家族3個成員在細胞中的突變廣泛發生在多種人類癌癥中，其中KRAS的突變是RAS家族成員中最常見的[24]。RAS家族中大約在30%的人類癌癥中發現了突變，這其中也包括肺癌[25]。本研究結果顯示在不同TNM分期，ALK和KRAS陽性表達差異有統計學意義，腫瘤直徑、TNM分期、ALK和KRAS表達情況是影響非小細胞癌患者預后的相關因素。與目前研究相比，本研究進一步將ALK和KRAS表達對非小細胞癌患者的預后評估進行分析，多因素Logistic回歸分析顯示，TNM分期Ⅲ ～ Ⅳ期、腫瘤直徑>3 cm、ALK和KRAS表達陽性為影響NSCLC患者預后的獨立危險因素，該結果為進一步開發關于NSCLC預后的檢測指標提供了實驗數據。

綜上所述，本研究結果證實了ALK和KRAS在非小細胞肺癌患者中的表達及其與臨床預后的關系，為未來關于非小細胞肺癌的研究提供了一定的數據參考。但是本研究存在一定的局限性，比如納入樣本量較少，且為單中心研究，易對研究結果產生偏移，因此需要進一步擴大樣本量、多中心研究來驗證結果。