高效液相色譜法測定蔬菜中4種農藥殘留

◎ 鄭碧秋

（茂名市食品藥品檢驗所，廣東 茂名 525000）

高效氯氟氰菊酯類農藥是一種廣譜性殺蟲劑，由于其具有殺蟲效果好、毒性較低以及殘留期短等優點，因此被廣泛應用于蔬菜、糧食以及水果等農產品的生產之中。雖說使用這類農藥能夠有效防治土壤之中的害蟲，但長期大量使用也會導致在蔬菜上面殘留部分農藥，為蔬菜帶來新的質量問題。而針對蔬菜中所殘留的氯氰菊酯、聯苯菊酯、噻蟲嗪、吡蟲啉等農藥檢測通常使用的方法有氣相色譜法、高效液相色譜法、高效液相色譜-質譜法等，這些方法都各具特點，針對不同的測定需求應合理選擇使用方法。本次研究選擇使用高效液相色譜法來檢測蔬菜中農藥殘留，主要因其具有選擇性較強、靈敏度較高、重現性較好的優點，能夠很好地滿足本次實驗針對農藥殘留的檢測需求。

1 材料與方法

1.1 儀器與設備

配二極管陣列檢測器的LC-2030C3D液相色譜儀，日本島津有限公司；色譜柱型號：ZORBA×SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），Aglient；電 子 天 平ME104E/02，梅特勒-托利多儀器有限公司；HZQ-Q恒溫振蕩器，上海達姆實業有限公司；SX2-2.5-10箱式電阻爐，上海昕儀儀器儀表有限公司；SK5210HP超聲波清洗器，上海科導有限公司；DHG-9023A型電熱恒溫鼓風干燥箱，深圳市標雅科技有限公司；SY-2000型旋轉濃縮蒸發儀，上海亞榮生化儀器有限公司；層析柱（玻璃，規格1.5 mm×300 mm），江陰市創通層析設備有限公司；二極管陣列檢測器，廣東晟澤科技有限公司。

1.2 材料與試劑

新鮮大白菜購買自茂名市的蔬菜農貿市場。

氯氰菊酯99.7%、聯苯菊99%、吡蟲啉98.5%、噻蟲嗪96%標準品，北京壇墨質檢科技有限公司；甲醇、乙腈為色譜純；純凈水；乙酸乙酯、正己烷、丙酮、乙腈、甲苯、弗羅里硅土、活性炭和無水硫酸鈉等，均為分析純。

1.3 實驗方法

1.3.1 色譜條件

本次實驗應用的流動相為乙腈∶水=70∶30（V/V）、乙腈∶水=85∶15（V/V）、甲醇∶水=20∶80（V/V）、甲醇∶水=40∶60（V/V）；流速為0.6 mL·min-1、1.0 mL·min-1、0.8 mL·min-1和0.5 mL·min-1；進樣量為10 μL；柱溫為35 ℃；外標法定量。

1.3.2 樣品處理

稱取50 g大白菜樣品，放入錐形瓶中待用，向錐形瓶中加入80 mL的水，浸泡樣品30～45 min，浸泡完成后，向其加入按照5∶1比例配制的正己烷和丙酮混合液30 mL[1]。混合均勻后，振蕩提取1 h，到時間后取下抽濾，剩下的濾液用乙酸乙酯萃取，合并有機相，然后放置在旋轉蒸發儀上，水浴真空模式下進行處理，在35 ℃下蒸發至樣品呈現近似干燥的狀態，然后將樣品取出待凈化。

1.3.3 樣品凈化

選取30 cm×15 mm規格的玻璃層析柱作為主要設備開展凈化，凈化前需先使用15 mL正己烷預淋洗濕潤玻璃層析柱，然后依次向玻璃層析柱中添加4 cm厚的無水硫酸鈉，4 g弗羅里硅土和0.8 g粉末活性炭混合物，4 cm厚的無水硫酸鈉[2]。然后用20 mL淋洗液（乙腈∶甲苯=3∶1，V/V）洗脫，收集洗脫液，將洗脫液用旋轉蒸發儀在35 ℃下水浴真空旋轉蒸發至近干，冷卻后用甲醇定容，待檢測。

2 結果與分析

2.1 檢測波長選擇

用PDA檢測器對供試4種農藥進行三維掃描，結果發現，氯氰菊酯在225 nm處有較大吸收，且基線噪音小，色譜峰的信噪比更為理想，因此選擇225 nm作為氯氰菊酯的檢測波長；聯苯菊酯在210 nm處有較大吸收，且基線噪音小，色譜峰的信噪比更為理想，因此選擇210 nm作為聯苯菊酯的檢測波長[3]。采用同樣方法對噻蟲嗪、吡蟲啉進行檢測，發現噻蟲嗪適宜以254 nm波長進行檢測，而吡蟲啉適宜在270 nm波長下進行檢測。

2.2 流動相選擇

本次實驗研究分別對乙腈+水、甲醇+水兩組流動相不同配比進行了研究，先用90%的乙腈（或甲醇）/水（或緩沖溶液）進行實驗，得到分離結果后根據出峰情況調整有機溶劑（乙腈或甲醇）的比例。研究結果表明，在甲醇+水流動相的體積比為4∶6時，具有較好的色譜分離效果，且此時的基線表現相對穩定、噪音較小，樣品中的雜質峰能夠與氯氰菊酯、聯苯菊酯、噻蟲嗪、吡蟲啉色譜峰完全分離；而采用乙腈+水作為本次實驗的流動相經過實驗驗證也可以很好地分離目標，但同時考慮到乙腈具有較強的毒性，因此本次實驗采用甲醇+水作為流動相。

2.3 線性范圍和相關性

分別配制0.02 mg·mL-1、0.15 mg·mL-1、0.45 mg·mL-1、1.00 mg·mL-1、2.20 mg·mL-1和3.00 mg·mL-1的系列質量濃度標準混合溶液，并按照對應的色譜條件對其進行分析，從而將殘留農藥質量濃度（x）與其對應的色譜峰面積（y）進行線性回歸，進而得出4種殘留農藥的標準曲線[4]。計算結果表明，氯氰菊酯、聯苯菊酯、噻蟲嗪、吡蟲啉在0.02～0.30 mg·mL-1呈現出良好的線性相關關系，而且其相關系數均維持在0.999 5以上，依據3倍信噪比來對各組樣品的最低檢出限進行計算，得出的結果如表1所示，說明該方法檢出限較小，靈敏度較高。

表1 4種農藥線性范圍、回歸方程以及檢出限表

2.4 回收率和精密度

選擇新鮮無雜質的大白菜作為空白樣，并向空白樣中分別添加0.2 mg·kg-1、0.5 mg·kg-1、1.0 mg·kg-1的氯氰菊酯、聯苯菊酯、噻蟲嗪、吡蟲啉標準混合溶液，并將添加水平設定為3個平行樣，依據回收率測定方法對加標回收率和RSD進行計算。結果表明，平均回收率為83.0%～105.8%，RSD為0.5%～3.4%，具體如表2所示。這足以說明4種殘留農藥的回收率均較高，且標準偏差值相對較小。由此可知，使用高效液相色譜法來對蔬菜農藥殘留進行測定具有很高的準確度和精密度[5]。大白菜樣品以及添加回收色譜圖如圖1、圖2所示。

表2 4種樣品的添加回收率和精密度表

3 結論

本文以大白菜為具體研究對象，通過對提取條件、凈化條件以及色譜條件的合理選擇和完善，構建了一種用于對蔬菜中氯氰菊酯、聯苯菊酯、噻蟲嗪、吡蟲啉4種農藥進行同時測定的高效液相色譜法。該種方法使用乙腈溶液作為提取溶劑，利用高效液相色譜儀進行測定，并采用外標法進行量化處理，從而獲得了較高的實驗靈敏度和精準度。綜合來講，該種方法具有高效簡便、上手容易等優點，因此十分適用于對蔬菜中氯氰菊酯、聯苯菊酯、噻蟲嗪、吡蟲啉農藥殘留的檢測。