兩種免疫增強劑對克氏原螯蝦生長、非特異性免疫性能的影響研究

傅純潔，葛紅星，趙士力，李前方

(1.東海縣水產技術推廣站，江蘇 東海 222300；2.江蘇海洋大學，江蘇 連云港 222005；3.東海縣黃川鎮農業技術推廣服務站，江蘇 東海 222322；4.江蘇瑞沃農業發展集團有限公司，江蘇 連云港 222300)

目前的研究已經證實，維生素、中草藥制劑能提高水產動物的免疫能力，但在克氏原螯蝦方面的研究相對較少。本研究通過篩選可能具有免疫強化性能的中草藥作為免疫增強劑，評估其不同添加比例對克氏原螯蝦非特異性免疫和生長性能的影響，以期篩選適宜克氏原螯蝦用免疫增強劑。

一、材料與方法

1.試驗材料

蝦苗在實驗室內暫養1周后選取健康、肢體健全、平均規格為(5.5±2)克/只的克氏原螯蝦開始試驗。

2.試驗設計

本試驗將維生素C、維生素E按1∶1的比例混合成維生素制劑后以0.01%、0.02%、0.04%的濃度，選取甘草、金銀花、黃芪為試驗原料，按1∶1∶1的比例混合成中草藥制劑后以1%、2%、4%的濃度添加至飼料中(N1、N2、N3、N4、N5、N6)，并設置對照組N0，每個處理3個平行。試驗分組以及兩種免疫增強劑添加濃度見表1。飼料配方參考徐維娜等(2011)，主要成分為1.50%的磷酸二氫鈣、0.30%的氯化膽堿、14.70%的玉米粉、20.00%的魚粉、40.00%的黃豆粉、2.00%的魚油，按照添加制劑的濃度不同添加21.50%、21.49%、21.48%、21.46%、20.50%、19.50%、17.50%的小麥粉。

表1 各組飼料成分 %

3.試驗管理

試驗場地選擇21 個1 米2的水池，在每個水池中放500 克的水草。每個水池中放入3 個氣石充氧，保證溶氧充足。每個水池中放入20 只蝦，分別投喂經不同處理的飼料，日投喂量為克氏原螯蝦體重的5%左右，每天投喂3 次，飼養40 天。水池的水位保持在15～20 厘米，確保在試驗期間溶氧≥6.0 毫克/升、pH (7.5±1.5)、氨氮＜0.5 毫克/升。試驗水溫為自然水溫，溫度保持10～20℃。每天觀察蝦死亡情況，及時撈出死蝦并進行數量記錄，同時檢查死亡原因。

4.生長指標測定

選取增重率、特定生長率、存活率和飼料系數4個指標用以評估生長性能，計算公式為：

增重率(%)＝(Wt-W0)/W0×100；

特定生長率(%/天)＝(lnWt-lnW0)/t×100；

存活率(%)＝X1/X0×100；

飼料系數＝F/(W1-W0)；

式中：W0為小龍蝦平均初始體質量(克)，Wt為小龍蝦的平均最終體質量(克)，t 為養殖天數，F表示投餌量(克)，X1為試驗結束時克氏原螯蝦的成活數量，X0為試驗開始時克氏原螯蝦的初始數量。飼養試驗結束，試驗蝦饑餓8小時后稱重。

采用Excel 和SPSS Statistics 26 對試驗數據進行分析。單因子方差分析(one-way ANOVA)分析差異，P＜0.05作為差異顯著水平。

5.非特異性免疫指標測定

試驗結束后，從每個試驗組中抽取3只克氏原螯蝦用于樣本的收集。用無菌注射器從蝦體圍心腔中取血，得到的血清用于堿性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)等測定。酶活采用南京建成生物研究所試劑盒進行測定，具體操作按說明書進行。

二、結果

1.飼料中添加不同免疫增強劑對克氏原螯蝦生長情況和餌料系數的影響

使用不同的飼料投喂40 天，克氏原螯蝦的生長情況見表2。各組特定生長率與對照組沒有顯著差異(P＞0.05)。N1、N3、N4組增重率與對照組有顯著 差 異(P＜0.05)， 其 中N3組 增 重 率 僅 為432.14%，相較其他各組增重率最低，N1、N4組的增重率分別為546.34%、552.62%，明顯高于對照組N0(P＜0.05)。同時存活率中N1、N4組與對照組差異顯著，N4組存活率在試驗各組中最高，達到95.00%，而N6組存活率最低，僅為73.33%。試驗各組的飼料系數均顯著低于對照組N0(P＜0.05)，其中N4組的飼料系數最低，為2.22。

表2 兩種免疫增強劑對克氏原螯蝦生長情況和餌料系數的影響

綜合試驗各組的生長情況，隨著兩種免疫增強劑的添加濃度上升，存活率都呈下降趨勢，N1、N4為同種添加制劑中存活率最高組別，同時兩種免疫增強劑添加濃度達最大時，存活率均小于對照組。對于增重率、特定生長率兩項生長指標，隨添加濃度的上升，呈下降趨勢。

2.飼料中添加不同免疫增強劑對克氏原螯蝦SOD、AKP和ACP酶活性的影響

飼料中添加不同免疫增強劑對克氏原螯蝦SOD、AKP 和ACP 酶活性的影響如圖1～圖3 所示，其中SOD 酶活性N1組最高、N6組最低，且N1組顯著高于N0組(P＜0.05)。在維生素制劑添加中N1組SOD酶活性最高，且高于中草藥制劑組中活性最高的N5組；N1、N2、N3組隨著維生素制劑添加濃度提高，SOD酶活性呈下降趨勢，而添加中草藥制劑的N4、N5、N6組則呈現先升高、再下降的趨勢。試驗各組AKP酶活性均隨著兩種免疫增強劑濃度的提高而上升，其中N6組AKP 酶活性最高，N4組活性最低，且試驗各組均與N0組有顯著性差異(P＜0.05)。而ACP 酶活性中N6組最高、N4組最低。N1、N2、N3組隨著維生素制劑添加濃度提高，ACP 酶活性呈現先升高、再下降的趨勢，而N4、N5、N6組則隨著中草藥制劑添加濃度的提高而呈上升趨勢。其 中ACP 酶活性中N6組≈N2組，且 顯 著高于N0組(P＜0.05)。

圖1 兩種免疫增強劑對克氏原螯蝦SOD酶活性的影響

圖2 兩種免疫增強劑對克氏原螯蝦AKP酶活性的影響

圖3 兩種免疫增強劑對克氏原螯蝦ACP酶活性的影響

三、討論

在飼料中加入維生素可以提高甲殼動物的抗應激能力，然而筆者研究中顯示在較低濃度維生素添加時，克氏原螯蝦的存活率、增重率較高，而過多的維生素添加會產生負面影響。對其他水產動物的研究中也發現類似的現象(吳桂玲等，2008)。這可能是維生素制劑中過多的維生素E 會抑制克氏原螯蝦對其他維生素如維生素A、維生素K的吸收導致。本試驗結果表明，飼料中添加兩種免疫增強劑相對于對照組，克氏原螯蝦的生長發育存在差異。

克氏原螯蝦飼料中添加免疫增強劑的研究還較少。在本研究中，與N0組相比，添加免疫增強劑的飼料可提高克氏原螯蝦的生長性能和存活率。飼料中添加維生素制劑和中草藥制劑可顯著提高南美白對蝦的生長率，同時降低死亡率(Linan-Cabello 等，2015)。本試驗中N1和N4組克氏原螯蝦的特定生長率較高，達到了4.24%和4.27%。同時本試驗顯示，兩種免疫增強劑在克氏原螯蝦的生長中起重要作用，存活率的提高與免疫增強劑的添加有實質性的關聯(王蕓等，2012)，可能是免疫增強劑提高了克氏原螯蝦的環境適應能力，減少機體消耗，從而促進了物質能量的積累導致(Wang 等，2012)。其中N4組的克氏原螯蝦存活率達到了最高，說明添加劑量過高或過低都可能影響克氏原螯蝦的存活率。本試驗中，隨著兩種免疫增強劑濃度的提高，AKP酶活性隨之上升，均在最高濃度組達到最高，而隨著維生素制劑濃度的提高，ACP酶活性呈現先上升、再下降的趨勢，并在0.02%添加濃度時達到最高；SOD 酶活性則在0.01%濃度的維生素制劑添加中達到最大值。研究表明，在N1組，0.01%濃度的維生素添加量是克氏原螯蝦生長和免疫的最佳條件。同時這一結果也表明，在免疫力強的條件下，特定生長率也最高。

四、小結

本研究表明，飼料中添加兩種免疫增強劑能夠促進克氏原螯蝦存活、生長，同時提高其免疫力。將克氏原螯蝦的存活率和特定生長率作為主要考慮因素，綜合考慮免疫能力，建議在本次試驗設計的條件中，選擇N1組作為免疫增強劑的最佳濃度，即維生素制劑添加量為0.01%。