散發性甲狀腺髓樣癌組織中Asporin蛋白的臨床價值

占少華，矯禎浩，葛 微，王天笑

(1.北京大學第三醫院 檢驗科，北京 100191；2.中國醫學科學院基礎醫學研究所 北京協和醫學院基礎學院 免疫學系,北京 100005; 3.北京大學腫瘤醫院 頭頸外科，北京 100142)

甲狀腺髓樣癌(medullary thyroid cancer，MTC)是一種惡性的神經內分泌腫瘤，由甲狀腺C細胞惡性增殖產生，約占所有甲狀腺癌的2%～3%[1]。根據疾病的遺傳特性，MTC可分為遺傳性和散發性兩大類。盡管局限性不伴有遠處轉移的散發性MTC具有良好的預后，10年生存率能夠達到70%～80%，但是MTC細胞侵襲性高，很多患者初診時已是晚期，傳統的“手術+放化療模式”獲益有限，10年生存率降到僅有10%[2]。因此，臨床上迫切需要找到新的腫瘤標志物，用來早期診斷和監測散發性MTC的惡性發展。本研究旨在探討Asporin作為早期診斷和監測散發性MTC新的潛在腫瘤標志物的價值。

1 材料與方法

1.1 材料：主要試劑：兔二步法檢測試劑盒(中杉金橋)；Anti-Asporin 抗體 (Abcam公司)；TMTsixplexTM標簽試劑盒(Thermo Fisher Scientific公司)。

1.2 方法

1.2.1 串聯質譜標簽(tandem mass tag，TMT)定量標記的蛋白質組學實驗：收集北京大學腫瘤醫院頭頸外科2016年1月至2016年10月手術的3例散發性MTC癌和癌旁患者組織，并進行TMT定量標記的蛋白質組學實驗，所得的組學數據已上傳到蛋白質鑒定數據庫(proteomics identification database，PRIDE)網站(編號：PXD005898)。

1.2.2 免疫組織化學：收集北京大學腫瘤醫院頭頸外科2008年1月至2015年12月手術的42例散發性MTC患者石蠟切片，免疫組化實驗按照說明書操作。

1.3 統計學分析:運用SPSS 19.0軟件。單因素的計數資料和單因素的定量資料使用非參數秩和Mann-WhitneyU檢驗。接受者操作特性曲線(receiver operating characteristic curve，ROC)通過靈敏度和1-特異性進行繪制。

2 結果

2.1 蛋白質組學的生物信息學分析:Funrich 3.1.3軟件對鑒定的388個差異表達蛋白進行基因本體富集分析(Gene Ontology，GO)，發現這些差異表達蛋白主要富集于與腫瘤密切相關的生物學過程(圖1A～D)。

2.2 Asporin在散發性MTC癌組織中高表達:Asporin蛋白在MTC癌組織中表達高于癌旁組織，且主要表達于癌細胞的細胞質、細胞膜和細胞外基質中(圖2A～C)。ROC曲線分析發現Asporin在鑒別散發性MTC癌和癌旁組織準確度為0.935，特異性為0.74，敏感性為0.929(圖2D)。

2.3 Asporin與腫瘤的淋巴結轉移正相關:MTC癌組織中高表達的Asporin與淋巴結轉移正相關(P<0.05)，而與年齡、性別、腺外侵犯、多灶性、結節性甲狀腺腫、腫瘤直徑、腫瘤大小分類和AJCC分期不相關(表1)。

表1 Asporin蛋白表達水平和臨床病例資料的相關性分析Table 1 Correlations of Asporin expression with clinicopathological characteristics

續表1

3 討論

Asporin(基因名：ASPN)最早發現于2001年[3]，研究發現Asporin在結直腸癌、胃癌、胰腺導管腺癌、晚期結直腸癌和乳腺癌癌組織或血清中高表達[3]，具體分子機制研究發現，Asporin可通過TGF-β信號通路抑制三陰性乳腺癌(ER、PR和HER2)均為陰性的發生發展[3]。在結直腸中，Asporin可分別通過TGF-β或EGFR信號通路抑制或促進癌細胞的侵襲和轉移[3]。此外，Asporin還可直接與CD44結合促進硬化性胃癌和胰腺癌的惡性發展[3]，但Asporin在散發性MTC中的作用及分子機制尚未見報道。

本研究發現散發性MTC癌組織中高表達Asporin，且癌組織中高表達的Asporin與腫瘤的淋巴結轉移正相關，可望作為早期診斷和監測散發性MTC新的潛在腫瘤標志物。但是，Asporin作用的具體分子機制仍有待進一步研究。

A.cellular component enrichment analysis；B.biological process enrichment analysis；C.biological pathway enrichment analysis；D.molecular function enrichment analysis圖1 差異表達蛋白的GO分析Fig 1 Gene Ontology analysis of differentially expressed proteins

A.protein-protein interaction network analysis, and upregulated or downregulated proteins are shown in red and green, respectively；B.immunohistochemical image of Asporin；C.histopathological scoring of Asporin, P<0.01；D.ROC analysis圖2 Asporin蛋白在散發性MTC癌組織中高表達Fig 2 Asporin up-regulated in sporadic MTC tumorous tissue