揭陽地區兒童珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測結果分析

巫 娟，陳宋欽，倪仰鵬，鐘喬華△

廣東省揭陽市人民醫院：1.檢驗科；2.病理科，廣東揭陽 522000

珠蛋白生成障礙性貧血(簡稱地貧)是單基因遺傳病中發病率較高的一種，重型患者臨床癥狀嚴重，其發病原因通常為患者體內發生珠蛋白合成基因的點突變或缺失，最終導致機體內構成血紅蛋白的珠蛋白肽鏈無法正常合成，根據不同的表型可分為α-地貧和β-地貧。研究顯示，在全球地貧基因攜帶者中約0.1%可發生重型地貧[1]，針對此類患者，除了造血干細胞移植，目前尚未發現其他更有效的治療方法，而造血干細胞移植治療費用較高，給重型地貧患者的家庭和社會帶來了沉重的經濟負擔,因此預防地貧的發生顯得十分重要。地貧在我國廣西、廣東及海南等地發病率依然較高[2]。研究顯示，不同地區不同基因類型的地貧發病率存在一定差別，而種族、地理位置不同及研究篩選策略的差異均可能導致這一結論的產生[3]。根據地區的發病特點選擇合適的地貧篩查方案，進行個性化篩查和防治，可避免不必要的資源浪費[4]。潮汕地區人口基數大，地貧基因類型非常豐富[5]。本研究旨在了解揭陽地區兒童地貧基因型及其攜帶情況，以期為該病的防治提供一定的參考依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年7月至2021年7月就診于本院的疑似地貧患兒218例為研究對象，其中男129例，女89例；年齡1～15歲，中位年齡6歲。納入標準：年齡<18歲；平均紅細胞體積(MCV)<82 fL和(或)紅細胞脆性<60%；進行了地貧基因檢測。排除標準：臨床基本資料不齊全。本研究經本院醫學倫理委員會批準。

1.2儀器與試劑 深圳亞能生物技術有限公司生產的全血DNA快速提取試劑盒和地貧基因檢測試劑盒。杭州安杰思醫學科技有限公司生產的AGS 9600 PCR擴增儀及深圳亞能生物技術有限公司生產的恒溫雜交儀。

1.3方法 抽取疑似地貧患兒2 mL靜脈血于乙二胺四乙酸抗凝無菌真空采血管中，混勻，按照試劑盒說明書及時提取DNA進行基因擴增。利用反向點雜交技術(RDB) 檢測地貧基因。

1.4統計學處理 采用Excel 2010軟件進行數據分析。

2 結 果

2.1地貧發病情況 納入的218例疑似地貧患兒中，檢出地貧基因攜帶者共143例，檢出率為65.60%(143/218)，其中α-地貧基因攜帶者81例，檢出率為37.16%(81/218)，β-地貧基因攜帶者59例，檢出率為27.06%(59/218)，αβ復合型地貧基因攜帶者3例，檢出率為1.38%(3/218)。男性地貧基因攜帶者84例，占所有地貧基因攜帶者的58.74%(84/143)，占本研究納入的所有男性疑似地貧患兒的65.12%(84/129)；女性地貧基因攜帶者59例，占所有地貧基因攜帶者的41.26%(59/143)，占本研究納入的所有女性疑似地貧患兒的66.29%(59/89)。

2.2不同類型地貧基因檢測結果

2.2.1α-地貧基因型檢測結果 共檢出α-地貧基因型8種，缺失型多于點突變型，其中最常見的基因型為缺失型--SEA/αα，其次依次為-α3.7/αα和--SEA/-α3.7、αCSα/αα和--SEA/-α4.2。其中靜止型10例(12.35%)，標準型62例(76.54%)，Hb H病9例(11.11%)，見表1。

表1 α-地貧基因型分布情況(n=81)

2.2.2β-地貧基因型檢測結果 共檢出β-地貧基因型9種，最常見的4種基因型依次為CD41-42/N、IVS-Ⅱ-654/N、CD17/N、-28/N。其中輕型55例(93.22%)，中間型1例(1.69%)，重型2例(3.39%)，見表2。

表2 β-地貧基因型分布情況(n=59)

2.2.3αβ復合型地貧基因型檢測結果 共檢出αβ復合型地貧基因攜帶者3例，分別為3種不同的αβ復合型地貧基因型：αwSα/αα CD41-42/N、--SEA/-α4.2βE/N、--SEA/αα CD41-42/N。

3 討 論

本研究以紅細胞脆性<60%和(或)MCV<82 fL作為地貧病例初篩陽性的實驗室指標，共納入疑似病例218例，地貧基因檢出率為65.60%，其中α-地貧基因檢出率為37.16%，β-地貧基因檢出率為27.06%，αβ復合型地貧基因檢出率為1.38%。共檢出標準型--SEA/αα 62例，占檢出的α-地貧基因的76.54%，臨床上表現為無癥狀或者癥狀輕微；檢出Hb H病9例(11.11%)，此型臨床表現差異較大，出現貧血的時間和貧血程度輕重不一；檢出靜止型10例(12.35%)，該型通常無臨床癥狀，僅少部分患者可見MCV<79 fL、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)<27 pg、紅細胞滲透脆性試驗陽性。另外，本研究檢出β0/β+地貧2例(CD17/βE、CD41-42/βE)，占3.38%，攜帶該基因型的患兒臨床表型通常為重型地貧，此類患兒需要長期進行規范輸血和去鐵治療，目前除了造血干細胞移植外無其他根治方法。檢出輕型β-地貧55例(93.22%，β0/βN或β+/βN)，臨床癥狀通常較輕或僅表現為輕度貧血；檢出β+/β+地貧1例(1.69%，-28純合)，通常表現為中間型地貧，癥狀介于輕型和重型之間。αβ復合型地貧患者不僅有β-地貧基因，又有α-地貧基因，這可能使αβ珠蛋白肽鏈不平衡的狀態有所改善，使臨床表現較輕。值得一提的是，輕型地貧基因攜帶者本身的臨床癥狀并不明顯，血常規、紅細胞滲透脆性試驗、血紅蛋白電泳等初篩手段并不一定能夠發現這一類型的潛在基因攜帶者。另外，αβ復合型地貧患者的實驗室檢查結果多顯示出β-地貧的特征，很容易造成α-地貧漏診，αβ復合型地貧患者無論與任何一種輕型地貧患者婚配，均有1/4的概率生出重型地貧患兒，因此必須重視對這類患者的篩查、診斷[6]。對于初篩試驗陽性，但是RBD檢測結果為陰性的病例，考慮其可能攜帶罕見突變的地貧基因型，若臨床表現明顯、病因未明確，應當通過地貧基因測序進一步驗證，本研究的不足之處在于未研究這部分患兒的數據，后續將進行相關研究。

揭陽地區屬于地貧基因攜帶的高發區[5-6]，其中α-地貧基因型以標準型--SEA/αα為主，β-地貧基因型以輕型雜合子多見。不同地區兒童的地貧基因型分布情況不完全一致，揭陽地區α-地貧基因型位于前3位的分別為--SEA/αα、-α3.7/αα和--SEA/-α3.7，與湛江[7]、深圳[8]、陽江[9]地區的檢測結果相似，但其發病構成比間存在一定差異。本研究中的揭陽、湛江[7]、深圳[8]、陽江[9]、順德[10]、 湖北[11]、成都[12]地區β-地貧基因型位于前4位的均為CD41-42/N、IVS-Ⅱ-654/N、CD17/N、-28/N。考慮不同地區地貧基因型構成比有所差異可能與基因型存在一定的區域分布特點，以及各研究納入樣本的選擇差異和樣本量不同有關。

地貧作為一種常染色體隱性遺傳病，其男女發病率理論上應不存在差別，然而本研究地貧基因攜帶者男性明顯多于女性，出現該結果可能與本研究納入樣本量較少有關。廣東地區是地貧的高發區之一[2]，根據《廣東省第七次全國人口普查公報》[13]數據顯示，潮汕地區(汕頭、揭陽、潮州)人口約為全省人口的10.83%，其中揭陽地區占潮汕地區人口總數的40.87%，在未進行婚檢或產檢的條件下，假如夫妻雙方均攜帶地貧基因，重型地貧患兒的出生率可達25%，因此，做好地貧早期篩查工作仍然十分重要，臨床應引起足夠重視。