CTC檢測聯(lián)合CA199、IGFBP2檢測對胰腺癌的診斷價值

盧熹微,劉 嬌,曹軍麗

(秦皇島市第一醫(yī)院 腫瘤科,河北 秦皇島066000)

胰腺癌患者早期臨床癥狀不明顯，大部分患者一旦確診已經(jīng)錯過根治性切除治療的時機，胰腺解剖結(jié)構(gòu)相對復(fù)雜，導(dǎo)致穿刺活檢難度增加，并且受胰腺癌侵襲性較強的影響，臨床診斷難度增加，因此選擇有效的診斷方式對胰腺癌早期診斷具有重要意義[1-2]。研究指出，胰腺癌發(fā)病與癌細胞增殖過程中調(diào)控細胞因子的濃度有關(guān)，胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2(Insulin-like growth factor binding protein 2，IGFBP2)濃度增加，會將上游轉(zhuǎn)錄因子激活，導(dǎo)致癌細胞DNA擴增速度增加，腫瘤細胞不斷增殖[3]。IGFBP2為一種致癌基因，在胰腺癌患者血清中顯示高表達，可作為胰腺癌腫瘤標(biāo)志物，對患者預(yù)后具有重要意義[4]。CA199屬于一種臨床常見的腫瘤標(biāo)志物，在胰腺癌患者中顯示高表達，但是敏感性、特異性不理想[5]。循環(huán)腫瘤細胞(circulating tumor cell，CTC)存在于乳腺癌、大腸癌等多種惡性腫瘤中，外周血循環(huán)腫瘤細胞(CTCs)受外界因素的影響，被釋放到血液中，導(dǎo)致腫瘤患者預(yù)后不良[6]。鑒于此，本研究回顧性分析胰腺癌患者臨床資料，探討CTC、CA199、IGFBP2水平與胰腺癌發(fā)病的關(guān)系。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2019年12月-2020年12月在秦皇島市第一醫(yī)院就診的胰腺癌80例，為胰腺癌組，男35例，女45例，年齡40-70歲，吸煙32例，飲酒30例。選取同期就診的胰腺良性疾病患者60例，為胰腺良性疾病組，男32例，女28例，年齡38-70歲，吸煙28例，飲酒21例。選取同時期行健康體檢的志愿者30例，為對照組，男15例，女15例，年齡35-75歲，吸煙12例，飲酒10例。三組研究對象在性別比例、年齡、吸煙、飲酒基線資料比較，無統(tǒng)計差異(P>0.05)，具有可比性。

納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均符合中華醫(yī)學(xué)會腫瘤學(xué)分會制定的關(guān)于胰腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；所有患者均經(jīng)過手術(shù)、病理學(xué)、CT、MRI確診；所有患者均未進行放療、化療治療；本文研究患者及其家屬均知情，簽署知情同意書，經(jīng)過我院倫理委員會的批準(zhǔn)。胰腺良性疾病均經(jīng)過手術(shù)、病理確診為慢性胰腺炎、胰腺假性囊腫、胰腺素瘤等。

排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他腫瘤患者；合并精神異常患者；進行放療、化療治療患者；胰腺轉(zhuǎn)移腫瘤患者；合并傳染性疾病患者。

1.2 指標(biāo)檢測

采集三組研究對象入院當(dāng)天空腹肘部靜脈血3 ml，轉(zhuǎn)速為2 000 r/min離心干預(yù)5 min，-20℃保持。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測CA199、IGFBP2水平：將提前稀釋好的血液標(biāo)本100 μl加入相應(yīng)的微孔板反應(yīng)孔中，第1孔只加樣品稀釋液為零孔，混合均勻，在37 ℃下處理90 min，甩去孔內(nèi)液體，吸干水分；將準(zhǔn)備好的抗體加入到每孔中0.1 ml，在37 ℃下處理60 min，底物四甲基聯(lián)苯胺(TMS)空白孔不加；甩去孔內(nèi)液體，每孔中加滿0.01 M PBS，浸泡1-2 min，甩去孔內(nèi)液體，吸干水分；每孔中加入90 μl TMS，避光處理15-20 min；每孔中加入90 μl TMS終止液，即藍色變?yōu)辄S色。在波長450 mm處分析CA199、IGFBP2水平。CTC檢測：將采集到的血液標(biāo)本進行單核細胞懸濁液制備，進行免疫磁性標(biāo)記、磁性分選后免疫細胞化學(xué)染色，由我院經(jīng)驗豐富的腫瘤科閱片人員統(tǒng)計CTC計數(shù)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 各組CTC、CA199、IGFBP2檢測水平比較

如表1所示，胰腺癌組CA199、IGFBP2水平均高于胰腺良性疾病組和對照組，胰腺癌組CTC水平高于胰腺良性疾病組(P<0.05)。胰腺良性疾病組CA199、IGFBP2水平高于對照組(P<0.05)。

表1 各組CTC、CA199、IGFBP2檢測水平比較

2.2 CTC、CA199、IGFBP2水平與胰腺癌患者臨床特征的關(guān)系

如表2所示，CTC、CA199、IGFBP2水平與胰腺癌患者性別、年齡無關(guān)(P>0.05)。CTC、CA199、IGFBP2水平與胰腺癌患者疾病分期、分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移狀況有關(guān)，患者疾病分期Ⅳ期，低分化、淋巴轉(zhuǎn)移CTC、CA199、IGFBP2水平高于Ⅰ-Ⅲ期、高中分化、無淋巴轉(zhuǎn)移(P<0.05)。

表2 CTC、CA199、IGFBP2水平與胰腺癌患者臨床特征的關(guān)系

2.3 胰腺癌患者發(fā)病的因素分析

如表3所示，以胰腺癌患者是否發(fā)病為因變量(0=否，1=是)，CTC、CA199、IGFBP2為自變量，建立Logistic回歸模型，并校正患者性別、年齡、吸煙、飲酒、TG、HDL-C、LDL-C、TC等混雜因素影響，最終CTC、CA199、IGFBP2是胰腺癌患者發(fā)病的危險因素。

表3 胰腺癌患者發(fā)病的Logistic回歸分析

2.4 CTC、CA199、IGFBP2對胰腺癌的預(yù)測價值

如表4所示，與CTC、CA199、IGFBP2單一診斷相比，聯(lián)合診斷對胰腺癌的診斷效能較高。

表4 CTC、CA199、IGFBP2對胰腺癌的預(yù)測價值

3 討論

研究認為，腫瘤細胞表面存在著大量的糖蛋白、脂蛋白以及細胞分泌物等，其濃度的高低與腫瘤的發(fā)展有關(guān)[8]。CTC主要是通過原發(fā)腫瘤細胞自行脫落產(chǎn)生，進入人體外周血，以粘附、聚集等方式形成血管簇，浸入血管基底膜導(dǎo)致微轉(zhuǎn)移灶，臨床中檢測CTCs對胰腺癌早期診斷具有重要的指導(dǎo)作用[9-11]。本研究顯示，在胰腺癌患者中，CTC水平高于對照組，且CTC水平與胰腺癌發(fā)病存在密切關(guān)系，提示血清CTC水平升高是導(dǎo)致胰腺癌的危險因素。分析原因：CTC在胰腺癌細胞中主要通過播散的方式在外周血中大量存在，導(dǎo)致患者循環(huán)血中CTC水平增加[12]。本研究ROC分析顯示CTC預(yù)測胰腺癌的AUC達0.741，提示CTC是胰腺癌發(fā)病的警示指標(biāo)。

CA199是一種黏蛋白型糖類抗體，在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中升高比較明顯，在胰腺癌中起著生物標(biāo)志物的作用，在胰腺癌診斷中具有較高的敏感性[13]。作為一種生物標(biāo)志物，其面臨的主要挑戰(zhàn)在于炎癥和非胰腺癌所造成的假陽性個體原因的假陰性。有研究指出，CA199特異性缺乏，在肝膽疾病以及良性胰腺疾病中30%的患者血漿中CA199表達未增高[14]。楊靜[15]研究指出，CTC聯(lián)合CA199檢測能評估胰腺癌患者病情。本研究中，CA199單獨檢測敏感度達76.25%，因此，CA199在預(yù)測患者胰腺癌發(fā)病風(fēng)險方面表現(xiàn)出較高的效能。

IGFBP2濃度增加會對癌癥細胞上游轉(zhuǎn)錄、增殖產(chǎn)生影響，研究顯示IGFBP2在消化、生殖等惡性腫瘤中發(fā)揮著重要的參與作用，對癌細胞異型性有誘導(dǎo)作用，引起細胞分化成熟障礙產(chǎn)生[16-17]。本文研究結(jié)果顯示，IGFBP2在胰腺癌患者中高表達，其機制可能為IGFBP2能夠?qū)OTCH信號通路激活，導(dǎo)致MAPK信號交錯式激活風(fēng)險增加，胰腺癌患者腫瘤細胞特性也發(fā)生變化[18-19]。本研究顯示胰腺癌患者血清IGFBP2水平高于胰腺良性疾病患者，血清IGFBP2水平升高與胰腺癌發(fā)病密切相關(guān)，說明IGFBP2參與胰腺癌發(fā)病過程。