運豬車輛消毒效果的檢測分析

章杭建，倪柏鋒，虞一聰，謝榮輝，趙靈燕，徐 輝

(浙江省動物疫病預(yù)防控制中心，浙江 杭州 311199)

自2018年8月3日遼寧沈陽發(fā)生我國第一起非洲豬瘟疫情起到2019年4月7日，我國內(nèi)地30個省份均已全部遭遇非洲豬瘟疫情“侵襲”，造成巨大經(jīng)濟損失[1]。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明，被污染的車輛和人員是非洲豬瘟病毒傳播、擴散的主要方式之一，加強運輸車輛洗消中心建設(shè)和管理，做好運輸車輛、人員和物品的清洗消毒，是切斷非洲豬瘟病毒傳播途徑的重要手段[2]。我國現(xiàn)已查明的111起家豬疫情中，病毒來自于人員、車輛攜帶的非洲豬瘟病毒傳播占比達到了41.5%[3]。為了解浙江省運豬車輛洗消中心車輛消毒效果狀況，作者于2019年10月，對2家運豬車輛洗消中心的10輛運豬車進行了采樣檢測。本文就這次檢測的方法和結(jié)果分析作了介紹。

1 材料

1.1試劑 滅菌0.9%生理鹽水(實驗室自制)、胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基(TSA)(批號：8297692)、二氯異氰脲酸鈉(批號：2019041011)碘酸混合溶液(批號：90874)。

1.2試驗耗材 無菌50 mL和15 mL離心管，無菌10 mL和1 mL吸管，無菌90 mm培養(yǎng)皿。

1.3設(shè)備 培養(yǎng)箱(BINDER KB115)、渦旋震蕩器(kylin-Bell VORTEX-5)、搖床(Thermo MAXQ 4000)、生物安全柜(Thermo 1300 SERIES A2)、高壓滅菌器(TOMY SX-700)。

2 方法

2.1洗消中心消毒程序

2.1.1洗消中心A 運豬車去豬場運豬前需經(jīng)過洗消中心消毒并取得消毒證明，憑消毒證明才能到豬場運豬。運豬車進入洗消中心時，洗消中心工作人員先檢查車輛是否干凈，如果發(fā)現(xiàn)運豬車存在豬糞、豬毛等污染物，該車輛不得進入消毒程序。經(jīng)檢查符合要求的車輛方可駛?cè)胂痉?，?%碘酸混合溶液噴霧2 min以上。

車輛駛出消毒房后用高壓水槍對車輛噴灑3%碘酸混合溶液，使運豬車車廂等表面均噴濕為止。駕駛室內(nèi)座位、門、腳墊等則用手動噴霧器噴灑消毒。

2.1.2洗消中心B 運豬車入場前的要求及檢查同洗消中心A。檢查后運豬車駛?cè)牒?.2%二氯異氰脲酸鈉的消毒池內(nèi)，使車輪完全被消毒液浸泡，浸泡約5 min。輪胎消毒后駛出消毒池，用高壓水槍以0.2%二氯異氰脲酸鈉溶液噴灑沖洗車輛，使車輛各部位都沖洗到位。駕駛室內(nèi)座位、門、腳墊等則用手動噴霧器噴灑消毒。

2.2樣品采集

2.2.1采樣 消毒前后分別采樣。用5 cm×5 cm滅菌規(guī)格板放在被檢物體表面，用浸有生理鹽水的無菌棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返各涂抹5次，并隨之轉(zhuǎn)動棉拭子。將棉拭子剪去手接觸部分后，放入含10 mL無菌生理鹽水的50 mL一次性無菌離心管中。小型物體采樣則用浸有生理鹽水的無菌棉拭子直接涂抹物體表面約25 cm2面積。采樣后，將樣品置于2-8 ℃條件下保存、運輸。

2.2.2采樣部位 車輪(輪胎、輪轂)內(nèi)外側(cè)各1個點、每個擋泥板各1個點、車底盤4個點、車廂外表面和車頭4個點、車廂內(nèi)表面4個點，上車踏板、腳踏板、腳墊、方向盤、檔把、內(nèi)外門把手各1個點，用棉拭子直接涂抹表面采樣，每個點采集面積均為100 cm2。

2.3細菌總數(shù)測定

2.3.1樣品前處理 將樣品管置于搖床，450 r/min震蕩10 min后，再置于漩渦震蕩器1500 r/min震蕩1 min。

2.3.2樣品稀釋 用1 mL一次性無菌吸管吸取1.0 mL樣品，置于含9.0 mL無菌生理鹽水的15 mL一次性無菌離心管作10倍系列稀釋，每個稀釋度換1支吸管。

2.3.3稀釋度選擇 消毒前的樣品一般選擇10-1或10-2稀釋度；消毒后的樣品，一般選擇原液或10-1稀釋度。

2.3.4樣品接種、培養(yǎng) 吸取樣品液0.1 mL接種于TSA平板，每個樣品接種3個平板，37 ℃培養(yǎng)18～24 h。

2.3.5菌落計數(shù) 參照《食品微生物學(xué)檢驗 菌落總數(shù)測定》(GB4789.2-2016)介紹的方法，計算每個樣品細菌總數(shù)[4]。

2.4消毒效果評價

2.4.1比較每個采樣部位消毒前后細菌總數(shù)，計算殺滅率，殺滅率≥90%表示消毒有效[5-8]。

2.4.2若某一部位消毒前菌落≤10 CFU/cm2，表明該部位本身含菌量很低難以區(qū)分消毒效果，則表示消毒效果不確定。在計算消毒有效率時不計入樣品總數(shù)。

2.4.3計算公式：

3 結(jié)果

洗消中心A和B車輛各采樣部位消毒前和消毒后細菌總數(shù)如下(表1～2)。

表1 洗消中心A細菌總數(shù)測定結(jié)果

4 結(jié)果分析

根據(jù)細菌總數(shù)測定結(jié)果，A洗消中心5輛運豬車共35個采樣部位中，消毒有效部位6個，消毒無效部位20個，消毒效果不確定部位9個，按照消毒有效率公式計算，消毒有效率為23.08%。B洗消中心35個采樣部位中，消毒有效、消毒無效和消毒不確定數(shù)分別為17個、9個和9個，消毒有效率為65.38%(表3-4)。

表3 洗消中心A消毒有效率

表4 洗消中心B消毒有效率

5 討論

本次檢測中A洗消中心5輛被檢測運豬車消毒有效率為23.08%。按不同采樣部位測算，車輪消毒有效率為20.00%，檔泥板、底盤、車廂內(nèi)表面和上車踏腳板等的消毒有效率分別為0、25.00%、40.00%和40.00%，車廂外表面和方向盤等消毒效果無效或不確定。B洗消中心5輛運豬車消毒有效率為65.38%。按不同采樣部位計算，車輪、擋泥板、底盤、車廂外表面、車廂內(nèi)表面、上車踏腳板等和方向盤等消毒有效率分別為50.00%、80.00%、60.00%、20.00%、50.00%、80.00%和20.00%。從檢測的結(jié)果來看，B洗消中心車輛消毒效果優(yōu)于A洗消中心，可能與所采用的消毒劑和消毒程序不同有關(guān)。從A、B兩個洗消中心車輛不同采樣部位的檢測結(jié)果來看，車廂外表面和方向盤等消毒效果不確定的結(jié)果頻率較高，主要原因是消毒前細菌含量≤10 CFU/cm2，對于這一類情況如何界定其消毒效果，在方法學(xué)上如何改進尚待研究。

目前洗消中心車輛消毒效果評價缺乏行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，作者主要參考國家衛(wèi)生健康委員會《消毒與滅菌效果的評價方法與標(biāo)準(zhǔn)》(GB15981—1995)、《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定》(GB4789.2—2016)、《醫(yī)療機構(gòu)消毒技術(shù)規(guī)范》(WS/T367—2012)等標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范設(shè)計檢測實驗和評價方法。在采樣點選擇、細菌殺滅率、菌落數(shù)限值等方面仍值得進一步探索。運豬車消毒效果評價方法的建立有助于開展我國現(xiàn)階段不同區(qū)域環(huán)境條件下屠宰場衛(wèi)生狀況的調(diào)查、各類消毒方法比較、有效消毒劑選擇等活動，為制定屠宰場消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)提供基礎(chǔ)性數(shù)據(jù)。本文提出的消毒有效率概念僅適用于特定區(qū)域特定場所特定物體表面的消毒效果評價，如何進一步標(biāo)準(zhǔn)化擴大其適用范圍尚待更深入的研究。