基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討女貞子治療動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制*

呂佳霖，王榮榮，賀明帥，姜苗苗

（天津中醫(yī)藥大學(xué)組分中藥國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 301617）

動(dòng)脈粥樣硬化（AS）是心血管疾病中常見的疾病，為缺血性心血管疾病的主要病理基礎(chǔ)。AS的主要表現(xiàn)為動(dòng)脈脂質(zhì)沉積、平滑肌細(xì)胞和纖維基質(zhì)增殖發(fā)展成AS斑塊，這些病變或斑塊引起動(dòng)脈管腔的狹窄和彈性變?nèi)酰瑢?dǎo)致相應(yīng)器官缺血性改變，AS斑塊保持穩(wěn)定數(shù)年，但可迅速變得不穩(wěn)定，導(dǎo)致血管破裂并引起血栓[1-5]。然而，AS斑塊的存在除對(duì)血管管腔有影響外，與急性心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)增加也有密切聯(lián)系，如心肌梗死和中風(fēng)[6]。隨著中國心血管病患病率持續(xù)上升，心血管疾病死亡率也在不斷提高，且患病逐漸年輕化[7]。現(xiàn)代研究表明AS的發(fā)生發(fā)展與血脂代謝異常、炎癥的形成以及血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷關(guān)系密切[8]。中醫(yī)理論認(rèn)為，AS的基本病理機(jī)制多為氣虛血瘀[9]，由于“脾病”運(yùn)化功能失調(diào)引起痰濁內(nèi)生，心氣血陰陽不足導(dǎo)致血液運(yùn)行無力，血瘀脈內(nèi)[10]。目前，中醫(yī)藥在抗AS方面的研究用藥主要包括滋補(bǔ)肝腎類、活血化瘀以及消痰降脂類，該類藥材具有多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)、多方向的抗AS的作用機(jī)制，而且毒副作用較小，對(duì)于AS這種發(fā)病機(jī)制復(fù)雜的疾病有其獨(dú)特的治療優(yōu)勢(shì)[7]。

女貞子為木犀科植物女貞（Ligustrum lucidum Ait.）成熟果實(shí)直接干燥所得，又可稱為冬青子，主要產(chǎn)于中國南方各省份。歸肝、腎經(jīng)，具有滋補(bǔ)肝腎之效[11]。常用的是其炮制品，酒女貞子。目前，從女貞子屬中分離到的化合物主要為三萜類，環(huán)烯醚萜類，苯乙醇類，黃酮類以及多糖類等化合物，具有廣泛的藥理活性，臨床常用于治療高血糖高血脂、冠心病、脫發(fā)、免疫低下等以及化療后的輔助治療[12]。研究表明，女貞子能夠通過調(diào)節(jié)膽固醇和心率使其均恢復(fù)正常，從而改善血脂指標(biāo)和心肌供血功能[13]。此外，女貞子還能抑制兔子主動(dòng)脈血管內(nèi)皮粥樣斑塊的形成，減少AS斑塊的面積[14]。AS發(fā)生發(fā)展過程十分復(fù)雜，女貞子在抗AS方面的研究還不夠全面，其對(duì)抗AS有效成分和作用機(jī)制的研究也不夠完善。

本文旨在通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析女貞子治療AS的主要活性成分、作用的核心靶點(diǎn)以及潛在復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系，為揭示女貞子作用機(jī)制提供科學(xué)的參考，為開發(fā)抗AS藥物提供可靠的理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 材料 酒女貞子藥材（批號(hào)201015）購于北京同仁堂藥店。特女貞苷（批號(hào)wkq20032004，純度≥98%）、芹菜素（批號(hào) 19112608，純度≥98%）、木犀草素（批號(hào)：C29N10Q104574，純度≥98%）、紅景天苷（批號(hào)wkq20021708，純度≥98%）、辛伐他汀（批號(hào)S24506，純度≥98%），購于上海源葉生物科技有限公司；毛蕊花糖苷（批號(hào)19082201，純度≥98%），購于天津眾合有限公司。

1.2 女貞子中化學(xué)成分的篩選及靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 基于TCMSP 數(shù)據(jù)庫（https：//tcmspw.com/tcmsp.php）和文獻(xiàn)整理女貞子中的主要化學(xué)成分[15]，將化學(xué)分子結(jié)構(gòu)以SDF的格式上傳至PharmMapper數(shù)據(jù)庫[16-18]（http：//www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/）。以對(duì)接結(jié)果Norm Fit≥0.9為篩選條件，通過Uniprot數(shù)據(jù)庫（https：//www.uniprot.org/）并對(duì)化合物靶點(diǎn)進(jìn)行校正。為了說明靶點(diǎn)蛋白在系統(tǒng)上的作用，將女貞子潛在靶點(diǎn)信息上傳數(shù)據(jù)庫 STRING 11.0（https：//string-db.org），限定研究物種為“Homo sapiens”（以下所有操作均默認(rèn)此條件），最低相互作用閾值取最高等“highest confidence（≥0.9）”，其余參數(shù)默認(rèn)，得到蛋白互作信息。將從STRING數(shù)據(jù)庫導(dǎo)出的文件，導(dǎo)入Cytoscape 3.6.1繪制蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)，利用Cytoscape中Network Analyzer功能，得到度值等重要參數(shù)。

1.3 AS疾病靶點(diǎn)與共有靶點(diǎn)以及GO分析與KEGG分析通過TTD[19]（https：//db.idrblab.org/ttd/）、DisGeNET[20]（http：//www.disgenet.org/）、Drugbank（https：//www.drugbank.com/）[21]數(shù)據(jù)庫分別以疾病名稱“atherosclerosis”進(jìn)行檢索，根據(jù)不同數(shù)據(jù)庫的篩選條件，將篩選結(jié)果匯總在一起，得到AS疾病靶點(diǎn)。通過標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù)庫Uniprot獲得靶點(diǎn)的uniprot ID和靶點(diǎn)基因名。且上傳化合物和疾病靶點(diǎn)至Venny 2.1.0 網(wǎng) 頁 版（https：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html）繪制韋恩圖，獲得化合物與疾病共有靶點(diǎn)，并對(duì)其通過STRING數(shù)據(jù)庫進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治觯玫降鞍紫嗷プ饔茫≒PI）關(guān)系，利用Cytoscape 3.6.1繪制蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)，使用“Network Analyzer”功能，得到度值等重要參數(shù)。同時(shí)，在STRING數(shù)據(jù)庫中對(duì)共有靶點(diǎn)進(jìn)行GO分析和KEGG通路分析。

1.4 化學(xué)成分液相色譜分析 酒女貞子粉粹，精密稱取0.60 g女貞子粉末，加入80%甲醇-水25 mL，超聲提取30 min，離心，取上清，4℃保存?zhèn)溆谩＞芊Q取特女貞苷、紅景天苷、毛蕊花糖苷、木樨草素、芹菜素標(biāo)準(zhǔn)品分溶于80%甲醇，濃度分別為1、1、0.04、0.01、0.04 mg/mL，離心，取上清，備用。使用UPLC液相（儀器型號(hào)：Waters H class plus）采集女貞子樣品和對(duì)照品混合圖譜。選用色譜柱CORTECS UPLC C18（2.1×100 mm，1.6 μm）；流動(dòng)相為乙腈（A）-0.1%甲酸水（B）溶液；液相洗脫梯度為0～2 min，2%～5%A；2～15 min，5%～18%A；15～30 min，18%～25%A；30～35 min，25%～65%A；進(jìn)樣量為 3 μL；流速為0.3 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)置為254 nm，柱溫為30℃。

1.5 巨噬細(xì)胞泡沫化及膽固醇含量的測(cè)定 將RAW264.7細(xì)胞復(fù)蘇后，用含有10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基，置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中恒溫孵育。觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況，及時(shí)更換培養(yǎng)液或進(jìn)行傳代。實(shí)驗(yàn)分為5組，模型組給予50 μg/mL ox-LDL（廣州奕源生物技術(shù)有限公司）誘導(dǎo)24 h；紅景天苷組（SA）給予 50 μg/mL ox-LDL 和 10 μmol/L 紅景天苷共培養(yǎng)24h；毛蕊花糖苷組（AC）給予50μg/mL ox-LDL和10 μmol/L毛蕊花糖苷共培養(yǎng)24 h；辛伐他汀組（SI）給予 50 μg/mL 和 10 μmol/L 辛伐他汀共培養(yǎng)24 h；空白對(duì)照組給予等量DMEM培養(yǎng)基24 h。

細(xì)胞經(jīng)上述處理后，棄去細(xì)胞培養(yǎng)基，PBS清洗后棄液，加入多聚甲醛固定液，固定20 min，棄去固定液；磷酸鹽緩沖溶液（PBS）清洗后棄液，加入60%異丙醇浸洗5 min，棄去60%異丙醇；加入油紅O試劑（油紅O染色試劑盒，索萊寶生物科技有限公司，批號(hào)20201126）進(jìn)行染色，棄去染色液，加入蒸餾水清洗數(shù)次，蒸餾水覆蓋細(xì)胞，在光學(xué)顯微鏡下觀察，拍照。采集圖像，用Image J pro Plus 6.0分析軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。

各組細(xì)胞棄去細(xì)胞培養(yǎng)基，PBS清洗后制備細(xì)胞裂解液，用于細(xì)胞內(nèi)總蛋白質(zhì)（蛋白濃度測(cè)定試劑盒，南京建成有限公司，批號(hào)20201228）和總膽固醇含量（總膽固醇測(cè)定試劑盒，南京建成有限公司，批號(hào)20201220）的測(cè)定。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用GraphPad Prism 8軟件分析數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示選擇單因素方差分析檢驗(yàn)組間是否具有顯著性差異，空白組與模型組之間比較采用#P<0.05，##P<0.01和###P<0.001表示，治療組與模型組之間采用*P<0.05，**P<0.01和***P<0.00表示。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)女貞子中主要化學(xué)成分進(jìn)行靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 通過TCMSP數(shù)據(jù)庫與文獻(xiàn)整理匯總得到女貞子的主要成分有28個(gè)，其中苯乙醇類8個(gè)，環(huán)烯萜類11個(gè)，黃酮類7個(gè)，三萜類2個(gè)。苯乙醇苷類化合物分別為紅景天苷、毛蕊花糖苷等；環(huán)烯醚萜類有特女貞苷、橄欖苦苷、新女貞苷等；黃酮類有木犀草素、芹菜素等；三萜類有齊墩果酸和熊果酸。根據(jù)PharmMapper數(shù)據(jù)庫以及經(jīng)過文獻(xiàn)檢索，最終獲得女貞子化合物的潛在靶點(diǎn)102個(gè)，對(duì)102個(gè)靶點(diǎn)蛋白利用STRING數(shù)據(jù)庫進(jìn)行相互作用分析，關(guān)系網(wǎng)絡(luò)中關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)信息，見表1。

表1 女貞子靶點(diǎn)蛋白互作拓?fù)鋵W(xué)分析（度值大于2倍中位數(shù)的靶點(diǎn)）

2.2 化合物-靶點(diǎn)互作網(wǎng)絡(luò) 女貞子化合物化學(xué)成分及對(duì)應(yīng)預(yù)測(cè)靶點(diǎn)上傳至Cytoscape構(gòu)建女貞子“成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖，見圖1。總共包括537條邊和138個(gè)節(jié)點(diǎn)，其中化合物節(jié)點(diǎn)28個(gè)，靶點(diǎn)110個(gè)。在網(wǎng)絡(luò)中，度值表示節(jié)點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中和節(jié)點(diǎn)相連路線的條數(shù)，該數(shù)值越大則表明該化合物發(fā)揮作用的可能性越大。根據(jù)網(wǎng)絡(luò)中度值大于等于2倍中位數(shù)進(jìn)行確定關(guān)節(jié)成分及靶點(diǎn)，共篩選得到14個(gè)核心化學(xué)成分，見表2，推測(cè)這些成分為女貞子抗AS的重要組成。通過與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品比對(duì)，從酒炙女貞子中發(fā)現(xiàn)4種化合物，見圖2。其中苯乙醇苷類化合物紅景天苷和毛蕊花糖苷為網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)和色譜分析中得到的共性成分，因此，本研究后續(xù)會(huì)對(duì)紅景天苷及毛蕊花糖苷抗AS進(jìn)行細(xì)胞活性評(píng)價(jià)。

圖1 化合物-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)

圖2 混合對(duì)照品UPLC圖譜（A）和酒炙女貞子樣品UPLC圖譜（B）

表2 核心化學(xué)成分

2.3 疾病靶點(diǎn)的篩選及共有靶點(diǎn) 利用TTD、DisGeNET、Drugbank 3個(gè)靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫分別以疾病名稱“atherosclerosis”進(jìn)行檢索，通過疾病靶點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù)庫Uniprot校正，共得到170個(gè)AS疾病相關(guān)疾病的靶點(diǎn)。將328個(gè)成分靶點(diǎn)與170個(gè)疾病靶點(diǎn)經(jīng)Venny 2.1映射后得到9個(gè)共有靶點(diǎn)。將9個(gè)共同靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫中擴(kuò)展靶點(diǎn)，構(gòu)建共有靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)，將結(jié)果以文本形式導(dǎo)出，然后導(dǎo)入Cytoscape3.6.1軟件中，利用網(wǎng)絡(luò)分析插件進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治鲎杂啥取?的靶點(diǎn)有9個(gè)，其在網(wǎng)絡(luò)中的具體參數(shù)信息詳見表2，相互作用關(guān)系，見圖3。

圖3 女貞子共有靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)

2.4 GO功能富集分析和KEGG通路富集分析將上述核心靶蛋白基因上傳至STRING數(shù)據(jù)庫進(jìn)行GO富集分析，設(shè)置條件P＜0.05，最終篩選得到352條GO條目。其中生物過程BP相關(guān)條目295條，主要涉及對(duì)外界刺激反應(yīng)的調(diào)節(jié)、免疫系統(tǒng)過程調(diào)節(jié)、對(duì)壓力的反應(yīng)、脂質(zhì)代謝過程的正調(diào)控等；分子功能相關(guān)條目有40條，主要涉及脂質(zhì)結(jié)合、信號(hào)受體結(jié)合、雌激素受體結(jié)合、高密度脂蛋白顆粒受體結(jié)合、載脂蛋白受體結(jié)合等；細(xì)胞組成相關(guān)條目有17條，主要涉及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)腔、胞外區(qū)、球形高密度脂蛋白顆粒、極低密度脂蛋白顆粒等。結(jié)果顯示，AS參與多個(gè)生物學(xué)過程，且參與脂質(zhì)代謝過程中，表明可能通過調(diào)節(jié)這些生物過程起到治療AS的作用。將上述得到的GO條目根據(jù)P值從小到大分別排序篩選得到前10個(gè)條目，將其以柱狀圖展示，見圖4（A）。

表4 網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治龊诵陌悬c(diǎn)信息

使用STRING數(shù)據(jù)庫對(duì)9個(gè)共有靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG通路分析，根據(jù)P值＜0.05并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行篩選，得到與AS相關(guān)通路14條，主要涉及到補(bǔ)體途徑、PPAR信號(hào)通路、膽固醇代謝等，將14條信號(hào)通路上傳至Sangerbox工具進(jìn)行可視化處理，氣泡圖，見圖 4（B）。

圖4 抗AS-GO富集分析（A）和女貞子成分-疾病靶點(diǎn)的KEGG通路分析（B）

2.5 “成分-靶點(diǎn)-通路”相關(guān)網(wǎng)絡(luò)圖 利用Cytoscape 3.6.1軟件得到“女貞子成分-靶點(diǎn)-KEGG信號(hào)通路”的多維網(wǎng)絡(luò)，見圖5。網(wǎng)絡(luò)圖譜顯示女貞子中的毛蕊花糖苷、紅景天苷等化學(xué)成分可能是間接通過APOAⅡ、SELP等靶點(diǎn)來調(diào)節(jié)AMPK、PPAR信號(hào)通路及膽固醇代謝通路起到治療AS的作用。

圖5 成分-靶點(diǎn)-相關(guān)網(wǎng)絡(luò)圖

2.6 毛蕊花糖苷和紅景天苷對(duì)RAW264.7細(xì)胞泡沫化及細(xì)胞內(nèi)總膽固醇的影響 油紅O染色結(jié)果顯示，細(xì)胞經(jīng)ox-LDL處理后呈現(xiàn)細(xì)胞體積增大，且胞漿內(nèi)有大量的紅色脂滴存在，呈現(xiàn)典型的細(xì)胞泡沫化形態(tài)特征，見圖6。空白對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)無明顯紅色脂滴，紅景天苷、毛蕊花糖苷與模型相比紅色脂滴明顯變小。分析結(jié)果顯示，紅景天苷和毛蕊花糖苷能抑制ox-LDL所致細(xì)胞內(nèi)脂滴的形成，改善細(xì)胞泡沫化。

圖6 （A）毛蕊花糖苷和紅景天苷對(duì)泡沫化細(xì)胞的影響（200×）和（B）油紅O染色脂滴面積百分比（n=3）以及（C）化合物對(duì)細(xì)胞內(nèi)膽固醇水平的影響（n=3）

與正常對(duì)照組相比，模型組細(xì)胞內(nèi)總膽固醇含量明顯升高（P<0.001），化合物處理組細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量顯著降低差異（P<0.001）。表明化合物降低膽固醇積累效果良好，能夠顯著調(diào)節(jié)ox-LDL誘導(dǎo)的RAW264.7泡沫化細(xì)胞脂質(zhì)代謝。見圖6 C。

3 討論

女貞子化學(xué)成分多樣，藥理作用廣泛。AS的基本病機(jī)為“本虛標(biāo)實(shí)”，氣陰兩虛為本，痰、瘀、毒為標(biāo)，治療上益氣養(yǎng)陰治其本，活血、化痰、解毒治其標(biāo)[22]。研究表明女貞子具有保肝作用、降血脂作用，降低主動(dòng)脈粥樣斑塊血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子表達(dá)，抑制血管內(nèi)斑塊的形成，減少AS斑塊的面積的作用[23-25]。網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果表明女貞子中的活性成分異毛蕊花糖苷、羥基毛蕊花糖苷、毛蕊花糖苷、紅景天苷、女貞酸等可能為女貞子抗AS的主要成分。毛蕊花糖苷是一種具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤等多種生理活性的水溶性苯乙醇類化合物，其作用機(jī)制廣泛[26]。AS的發(fā)生機(jī)制與多種并發(fā)癥相關(guān)，其中血小板聚集為AS的發(fā)病機(jī)制之一。有臨床研究表明，連續(xù)服用毛蕊花糖苷（100 mg/d）兩周能夠顯著降低有心血管疾病危險(xiǎn)因素的志愿者的血小板聚集，且?guī)缀鯖]有不良反應(yīng)，表明毛蕊花糖苷對(duì)心血管具有良好的保護(hù)作用[27]。此外，低密度脂蛋白膽固醇是心血管疾病的主要危險(xiǎn)因素，氧化修飾的低密度脂蛋白在AS的發(fā)生和進(jìn)展中具有重要作用[28-29]。Martin-Nizard等[30]研究發(fā)現(xiàn)毛蕊花糖苷能夠抑制氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性，而抑制脂質(zhì)過氧化可能是這些分子發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用的關(guān)鍵機(jī)制。而且，Martin-Nizard等[31]發(fā)現(xiàn)毛蕊花糖苷對(duì)Cu-LDL誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)皮素有促進(jìn)作用，該結(jié)果表明毛蕊花糖苷對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞起到良好的保護(hù)作用。以上研究均表明毛蕊花糖苷具有治療AS的潛在價(jià)值。大量研究表明紅景天苷對(duì)抗AS有顯著作用，具有保護(hù)內(nèi)皮功能，并從AS的發(fā)生、發(fā)展至惡化的整個(gè)過程進(jìn)行干預(yù)，有望成為治療AS的重要手段[32]。Sun等[33]研究發(fā)現(xiàn)紅景天苷可減少細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積，延緩內(nèi)皮細(xì)胞衰老進(jìn)程，抑制衰老相關(guān)分子的表達(dá)，并使視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白磷酸化。Zhu等[34]用ox-LDL誘導(dǎo)HUVECs細(xì)胞建立體外AS模型，不同濃度的紅景天苷處理HUVECs細(xì)胞，結(jié)果表明紅景天苷能夠顯著提高ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs細(xì)胞的活性，且紅景天苷減弱ox-LDL引起的HUVECs的氧化應(yīng)激，起到抗AS的作用。

蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)顯示女貞子中的有效成分可能是通過APOA Ⅱ（載脂蛋白）、ESR1（雌激素受體1）、F10（人源全長(zhǎng)重組蛋白）、SELP（重組蛋白）、PPARGγ（過氧化物酶體增生激活受體γ）、MAPK14（絲裂原活化蛋白激酶）等共有靶點(diǎn)起作用。APOAⅡ是高密度脂蛋白的主要蛋白質(zhì)成分，也是HDL代謝的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，能有效運(yùn)輸PON和PAF-AH等抗氧化酶，從而保護(hù)VLDL免受氧化，起到對(duì)心血管疾病多種保護(hù)作用[35]。SELP與AS早期的形成息息相關(guān)[36]。AS是一種炎癥性疾病，涉及循環(huán)白細(xì)胞向血管內(nèi)皮的募集和粘附，SELP是黏附分子選擇素家族的一員，它能啟動(dòng)白細(xì)胞的滾動(dòng)，并介導(dǎo)白細(xì)胞與內(nèi)皮、血小板與內(nèi)皮的相互作用[37]。

GO分析結(jié)果顯示，女貞子治療動(dòng)脈粥樣硬化途徑主要涉及到脂質(zhì)代謝、脂質(zhì)結(jié)合等過程。KEGG通路結(jié)果顯示女貞子可能通過調(diào)節(jié)PPAR信號(hào)通路、膽固醇代謝、AMPK信號(hào)通路等起到治療AS的作用。PPAR信號(hào)通路發(fā)揮脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)作用，加速膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)[38]。AMPK激活誘高密度脂蛋白介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞膽固醇外流，AMPK活化可通過增加AS血管壁中的膽固醇流出來改善血管功能[39]。

總膽固醇含量過高會(huì)引起粥樣斑塊的沉積，加劇AS病變進(jìn)程。因此，調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇和代謝的平衡，有助于抑制泡沫化細(xì)胞的形成，從而降低AS病變的發(fā)生。在細(xì)胞驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中，通過油紅O染色檢測(cè)化合物干預(yù)后的泡沫細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)沉積，證實(shí)了紅景天苷、毛蕊花糖苷能夠有效減少ox-LDL誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞泡沫化；通過細(xì)胞內(nèi)總膽固醇測(cè)定，證明了紅景天苷和毛蕊化糖苷能夠有效降低細(xì)胞內(nèi)總膽固醇水平。此結(jié)果與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)結(jié)果-紅景天苷和毛蕊花糖苷可能是女貞子中抗AS作用化學(xué)成分一致。

本研究借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)平臺(tái)，預(yù)測(cè)了女貞子的活性成分和作用靶點(diǎn)，分析了其抗AS的潛在分子機(jī)制。同時(shí)，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)初步驗(yàn)證了女貞子中苯乙醇苷類化學(xué)成分紅景天苷和毛蕊花糖苷能夠改善ox-LDL誘導(dǎo)的細(xì)胞泡沫化水平，降低細(xì)胞內(nèi)總膽固醇的含量。后續(xù)還需對(duì)其機(jī)制作進(jìn)一步深入研究。該研究從整體水平，預(yù)測(cè)和分析了女貞子治療AS的作用機(jī)制，為后續(xù)女貞子的開發(fā)和利用起到很好的指導(dǎo)作用。然而，AS的病因與多種因素相關(guān)且確切病因尚不明確，以及目前網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的還處于發(fā)展初期的局限性，后續(xù)有待進(jìn)一步探究。