2例散發型神經纖維瘤病病人及其家系NF1基因突變的檢測

馬盼盼 劉芙蓉 張慶華 張 釧 郝勝菊 陳 雪 王 真 孫慶梅

Ⅰ型神經纖維瘤病（neurofibromatosis type 1，NF1）的典型特征是身體多處牛奶咖啡斑，腋下和腹股溝雀斑，多個離散的皮膚神經纖維瘤以及虹膜Lisch 結 節。NF1 以 常 染 色 體 顯 性 方 式 遺 傳。本文報道2例散發

NF1

基因檢測結果。

1 資料與方法

1.1 一般資料 病例1為33歲女性，眼睛周圍和上身分布咖啡斑，已懷孕6周，其丈夫未見明顯異常。病例2 為3 歲男孩，全身分布牛奶咖啡斑，背部皮下有一腫塊，雙側扁桃體腫大，父母及其姐姐未見異常。

1.2

NF1

基因檢測 抽取病例1及其丈夫、病例2及其父母外周血2～3 ml。取200 μl 外周血，采用全自動核酸提取儀提取DNA，然后使用核酸濃度測定儀NanoDrop2000 測定DNA 濃度。保證DNA 濃度在50 ng/μl 左右，OD260/280 在1.8～2.0。待測樣本送至邁基諾基因檢測公司進行高通量測序，平均測序深度為1 000×，所有區域達到20×以上的覆蓋度。

1.3 驗證

1.3.1 點突變驗證分析 根據GenBank

NF1

基因序列(NC_000017.11)，應用在線Primer 3.0（http://primer3.ut.ee）軟件設計相應突變位點引物。對相應致病突變位點所在基因組區域進行PCR 擴增，純化擴增產物，使用BigDye 測序反應試劑盒（美國Applied Biosysterms公司）進行測序，然后使用ABI 3500D Genetic Analyzer儀器（美國Applied Biosysterms 公司）進行檢測。最后，對測序結果與

NF1

基因參考序列（NM_000267）進行比對。1.3.2 外顯子雜合缺失分析 使用多重探針連接擴增技術檢測試劑盒（SALSA MLPA P081 及P082 探針，荷蘭MRC 公司），包括DNA 的變性、探針雜交、連接反應、擴增、及產物分析，檢測

NF1

基因拷貝數變化。

2 結果

2 例均檢測出

NF1

基因突變。病例1 為

NF1

基因整體雜合缺失突變（圖1A）；病例2 為

NF1

基因c.6408delA（圖1B），導致氨基酸改變p.L2137Yfs*42，為移碼突變，導致基因功能喪失。

圖1 2例NF1基因檢測結果

病例1已懷孕6周，其丈夫和胎兒進行MLPA檢測，未檢測到相同的致病基因突變（圖2）。

圖2 病例1 及其家系NF1基因檢測結果

3 討論

NF1是一種由

NF1

基因突變引起的常染色體顯性遺傳病。

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基因跨越約350 kb的基因組DNA，包含57 個組成性外顯子和3 個選擇性剪接的外顯子，最常見的轉錄本編碼2 818個氨基酸多肽——神經纖維蛋白。NF1 主要是

NF1

基因的突變導致編碼失活的神經纖維瘤蛋白。NF1 的診斷主要依據1988年美國國立衛生研究院制定的診斷標準，即皮膚存在牛奶咖啡斑，達到6個以上；腋窩或腹股溝雀斑；兩種以上神經纖維瘤或叢狀神經纖維瘤；視神經膠質瘤；虹膜錯構瘤；骨骼的病灶和家族史，這7 個特征中，達到2 條或以上，可以臨床診斷NF1。本文2 例均有不同程度的牛奶咖啡斑，診斷為NF1；高通量測序均檢測到

NF1

基因的突變。據統計，

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基因自發突變率為50%。Yao等對95 個NF1 家系進行基因檢測，發現77.9%為自發突變。本文2 例NF1 通過高通量測序以及Sanger 測序和MLPA 驗證，2 例均檢測到

NF1

基因突變，均為自發突變，自發突變率為100%；其中1 例為

NF1

基因整體外顯子缺失突變，1 例為移碼突變。這與現有報道的自發突變率相差較大，可能是本文樣本量過少所致，也可能是地域性差異造成的，這有待于進一步驗證。另外，病例1 已懷孕6 周，我們對其丈夫進行

NF1

基因全長檢測，未發現其丈夫

NF1

基因變異；隨后，我們在孕18周時，進行羊水穿刺取樣，通過提取羊水中胎兒DNA，進行NF1基因檢測，也未發現

NF1

基因外顯子缺失突變。因此，我們可以在父母明確診斷后，對胎兒進行

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基因突變位點的檢測，可有效避免NF1患兒出生。總之，我們進行高通量測序檢測

NF1

基因變異，發現1 個新發突變位點，擴充了

NF1

基因的致病性突變位點。對胎兒進行

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基因檢測，可能是避免NF1患兒出生的一個措施。