miR-146a、TLR-4、sTREM-1在肺癌術后肺部感染患者中的表達及預測價值*

張鳳志，賈海生，徐春蘭，張景旭

承德市中醫院腫瘤科，河北承德 067000

肺癌是發病率較高的惡性腫瘤，目前對肺癌的臨床治療中，手術仍是最佳治療方案，肺癌患者術后發生肺部感染的風險較大，嚴重者甚至危及生命[1]。術后感染是肺癌患者圍手術期的主要死亡原因之一，因此，對肺癌術后感染早期預測十分重要[2]。近年來，微小RNA(microRNA)作為一種基因調控分子已廣泛應用于多種疾病預測中，有研究證實，microRNA-146a(miR-146a)在氣道、血管局部炎性反應中發揮關鍵作用，可能參與炎性疾病的病理、生理過程[3]。可溶性人髓系細胞觸發受體1(sTREM-1)可通過抑制T淋巴細胞功能造成機體的免疫功能損傷，同時與炎性反應的發生密切相關[4]。Toll樣受體-4(TLR-4)是最早發現且研究最多的TLR亞型之一，參與免疫功能調節，與感染密切相關[5]。本研究對miR-146a、TLR-4、sTREM-1在肺癌患者術后肺部感染中的表達情況及其預測價值進行分析，以期提高肺癌患者生存質量。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年6月至2020年12月在本院行肺癌手術治療的124例肺癌患者作為研究對象。納入標準：(1)經病理學檢查確診為肺癌；(2)臨床資料完整。排除標準：(1)術前肺部感染及存在其他感染性疾病；(2)合并自身免疫性疾病；(3)接受過放化療；(4)合并多種腫瘤；(5)術前接受過抗菌藥物治療及生物免疫治療；(6)合并肝、腎功能障礙。納入研究的124例患者中，男72例，女52例；年齡40～77歲；體重48～75 kg，腫瘤分期：Ⅰ期33例，Ⅱ期59例，Ⅲ期20例，Ⅳ期12例；病理類型：小細胞癌15例，非小細胞癌60例，中央型肺癌25例，周圍型肺癌24例。參考《醫院感染診斷標準(試行)》[6]中肺部感染相關診斷標準，根據患者術后是否發生肺部感染分為感染組和未感染組，各62例。兩組一般資料比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。本研究獲得所有受試者知情同意，并經本院倫理委員會批準通過。

表1 兩組一般資料比較

1.2方法 觀察并比較兩組miR-146a、TLR-4、sTREM-1水平及肺部感染評分(CPIS)、急性生理學及慢性健康狀況評分(APACHEⅡ評分)，以及感染組患者術前、術后1 d、術后3 d miR-146a、TLR-4、sTREM-1水平。

1.2.1miR-146a檢測 采集受試者術前、術后1 d、術后3 d清晨空腹抗凝靜脈血2 mL，采用實時熒光定量PCR檢測miR-146a表達水平，試劑盒購自上海通蔚實業有限公司，具體步驟參照試劑盒說明書進行操作。

1.2.2TLR-4檢測 采集受試者術前、術后1 d、術后3 d清晨空腹靜脈血2 mL并進行抗凝處理，3 000 r/min離心15 min(離心半徑為5 cm)，取上清液，-20 ℃保存。采用流式細胞儀(上海北諾生物科技有限公司)測定血清TLR-4水平。操作均嚴格按照說明書進行。

1.2.3sTREM-1檢測 采集受試者術前、術后1 d、術后3 d清晨空腹靜脈血，3 000 r/min離心10 min(離心半徑為5 cm)，分離血清，-20 ℃保存。采用酶聯免疫吸附試驗檢測血清sTREM-1水平，試劑盒購自美國R&D公司，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.2.4APACHEⅡ評分[7]和CPIS[8]APACHEⅡ評分包含年齡評分、慢性健康評分、急性生理評分，總分71分，分數越高表示健康與生理水平越低。CPIS包括白細胞計數、體溫、氣管分泌物、氧合情況、肺部浸潤影進展、X線胸片、氣管吸取物培養，共7項，總分12分，分數越高表示感染狀況越嚴重。

2 結 果

2.1兩組miR-146a、TLR-4、sTREM-1水平比較 感染組miR-146a、TLR-4、sTREM-1水平高于未感染組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組miR-146a、TLR-4、sTREM-1水平比較

2.2感染組患者手術前后miR-146a、TLR-4、sTREM-1水平比較 術后1 d、術后3 d miR-146a、TLR-4、sTREM-1水平均高于術前(P<0.05)，術后3 d miR-146a、TLR-4、sTREM-1水平均低于術后1 d(P<0.05)。見表3。

表3 感染組患者手術前后miR-146a、TLR-4、sTREM-1水平比較

2.3兩組CPIS、APACHEⅡ評分比較 感染組CPIS、APACHEⅡ評分均高于未感染組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 兩組CPIS、APACHEⅡ評分比較分)

2.4miR-146a、TLR-4、sTREM-1與CPIS、APACHEⅡ評分的相關性 miR-146a、TLR-4、sTREM-1與CPIS、APACHEⅡ評分呈正相關(P<0.05)。見表5。

表5 miR-146a、TLR-4、sTREM-1與CPIS、APACHEⅡ評分的相關性分析

2.5miR-146a、TLR-4、sTREM-1對肺癌患者術后肺部感染的預測價值 ROC曲線分析顯示，miR-146a、TLR-4、sTREM-1單項及三項聯合預測肺癌患者術后肺部感染的曲線下面積(AUC)分別為0.634、0.713、0.918、0.959，三項聯合預測肺癌患者術后肺部感染的效能高于單獨檢測(P<0.05)。見表6和圖1。

表6 miR-146a、TLR-4、sTREM-1對肺癌患者術后肺部感染的預測價值

圖1 miR-146a、TLR-4、sTREM-1預測肺癌患者術后肺部感染的ROC曲線

3 討 論

肺癌作為一種惡性腫瘤，主要發生于支氣管黏膜上皮。肺癌的發生與長期大量吸煙、物理化學致癌因素、大氣污染、肺部慢性炎癥、癌基因變異及遺傳因素有關，肺癌患者術后極易并發感染，對患者生命健康產生嚴重威脅，因此，早期預測肺癌患者術后感染，對患者具有重要臨床意義[9-10]。

miRNA是診斷多種腫瘤的標志物，有研究發現，肺部感染的發生、發展與miR-146a的表達具有相關性，miR-146a可作為潛在指標研究其發病機制[11]。miR-146a是具有內源性免疫應答調節作用的基因調控分子，可參與炎性反應的發生、發展，通過調控TLR-4等炎癥因子，且miR-146a對免疫功能具有一定負向調控作用，影響抗感染治療效果[12]。紀迎潔等[13]研究顯示，臨床檢測miR-146a表達有助于顱腦損傷患者繼發肺部感染的診斷,其可作為顱腦損傷繼發肺部感染臨床診療評估中的重要指標。本研究發現，miR-146a表達在術后肺部感染患者中呈現上升，且在術后1 d表達最高，與CPIS、APACHEⅡ評分呈正相關。提示miR-146a與肺癌術后患者肺部感染具有一定相關性，術后肺部感染會激活miR-146a高表達，以加強巨噬細胞對致病菌吞噬能力，限制感染病情進展。分析其作用機制：miR-146a主要調控TLR4通路，進而誘導信號通路活化，促進炎癥因子及促炎信號通路的激活。這提示miR-146a可作為預測肺癌術后肺部感染的一項臨床指標。

患者發生肺部感染主要原因之一是炎性反應[14]。各種免疫細胞及凝血酶等導致一系列的炎性反應，使機體內環境穩態被破壞，造成血管內皮損傷，使患者病情惡化[15]。TLR-4為分布在巨噬細胞可識別細菌的模式受體，介導免疫反應，促進釋放炎癥因子及細胞因子，進而加重組織和細胞的損傷[16]。本研究結果顯示，術后TLR-4表達在肺部感染患者呈現上升趨勢，且在術后1 d表達最高，與CPIS、APACHEⅡ評分呈正相關。分析其作用及機制：TLR-4作為病原分子識別受體，與配體結合后被激活，活化TLR-4/核因子-κB(NF-κB)/白細胞介素(IL)-6信號通路，最終進入細胞核內，啟動相關基因，轉導出相應的信使RNA(mRNA)，合成并釋放IL-6、IL-8等細胞因子，引起炎性反應，發揮早期免疫應答[17]。這一結果提示術后早期檢測TLR-4可預測肺癌患者術后肺部感染發生風險。

sTREM-1與炎性疾病的發生、發展密切相關，有研究顯示，在先天免疫反應和感染中細菌脂多糖可以刺激sTREM-1的表達，sTREM-1在細菌和真菌感染病例中表達上調[18]。本研究結果顯示，術后sTREM-1表達在肺部感染患者中呈現上升趨勢，且在術后1 d表達最高，與CPIS、APACHEⅡ評分呈正相關。提示sTREM-1與肺癌術后患者肺部感染存在一定關系。分析其原因：肺部感染導致活化炎癥信號通路，具有促進炎性反應的作用，sTREM-1的表達具有特異性，在受到各類病原體，如細菌、病毒的刺激下，其表達會明顯升高[19]。同時，sTREM-1水平升高會抑制機體的免疫功能，導致機體抵抗力下降，使得患者感染情況惡化，由此推測，sTREM-1是預測肺癌術后肺部感染的重要指標[20]。

CPIS、APACHEⅡ評分系統是臨床評價肺部感染病情程度及預后的常用工具，可以及時客觀地評價患者感染情況及健康生理狀態[21]。本研究中，肺癌術后肺部感染患者CPIS、APACHEⅡ評分均高于未感染患者(P<0.05)。ROC曲線分析顯示，miR-146a、TLR-4、sTREM-1三者聯合預測肺癌患者術后感染的效能要優于單一指標檢測。這一結果提示早期檢測肺癌術后患者血清miR-146a、TLR-4、sTREM-1水平對于評估術后肺部感染具有重要意義。

綜上所述，miR-146a、TLR-4、sTREM-1三者聯合檢測對肺癌患者術后肺部感染的發生具有較高的預測價值，肺癌患者術后早期監測miR-146a、TLR-4、sTREM-1的表達，有助于及時采取措施，減少肺癌患者術后感染風險，對改善預后有重要作用。但本研究為小樣本研究，結果可能存在一定局限性，今后仍需要大樣本量、多中心的研究進行證實。