ADPN、MCP-1、miRNA-103在老年反復發作性尿路感染患者中的表達及臨床意義*

侯桂平，鄭雪君，李潤奇，崔 利，杜 玄，李 華，孫建宇

張家口市第二醫院：1.檢驗科；2.骨外科；3.泌尿外科，河北張家口 075000

尿路感染屬于一種較為常見的泌尿系統疾病，多見于老年人，尿路感染的發生與尿道內大量微生物繁殖相關，而反復發作性尿路感染的發生通常與首診不及時、首診療程不足等因素相關，在治療時較為棘手[1-2]。反復發作性尿路感染的發生與多種細胞因子表達異常相關，有研究發現，感染性疾病發生后，患者機體內會出現不同程度的炎性反應，脂聯素(ADPN)、單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)在臨床上多用于感染性疾病的診斷，可明確反映患者機體炎性反應程度，有助于疾病的診斷[3]。有研究證實，尿路感染患者ADPN、MCP-1表達異常[4]，但二者是否參與此病的進展尚不明確。miRNA-103可通過參與調控炎癥相關信號通路，誘發炎癥，與感染性疾病相關[5]。因此，本研究分析ADPN、MCP-1、miRNA-103在反復發作性尿路感染的表達情況，并分析其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年1月至2020年12月本院收治的112例首發老年尿路感染患者作為首發組，134例反復發作性尿路感染患者作為反復發作組，同期選取80例于本院體檢的健康者作為對照組。首發組、反復發作組均符合《尿路感染診斷與治療中國專家共識(2015版)》[6]《內科學》[7]中對尿路感染及感染程度的診斷標準，伴隨發熱、尿不盡、腰痛、小腹痛等癥狀，尿白細胞陽性、尿細菌培養陽性。反復發作組在6個月內發作≥2次或者1年內發作≥3次。排除標準：因尿路畸形、結石、惡性腫瘤等器質性疾病所致的尿路感染者；合并心、肝、腎等重要器官功能不全者；精神障礙、溝通障礙者；合并敗血癥等其他感染性疾病者。對照組無泌尿系統疾病史，身體健康。3組研究對象均自愿參與本研究，并簽署知情同意書，本研究經本院倫理委員會審核批準。3組研究對象一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。

表1 3組一般資料比較[n(%)或

1.2方法

1.2.1血清ADPN、MCP-1檢測 采集在首發組、反復發作組患者入組后次日及對照組體檢時清晨空腹靜脈血3 mL，以離心半徑5 cm、轉速3 000 r/min離心處理10 min，分離上層血清，-80 ℃保存待檢。采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)測定血清ADPN、MCP-1表達水平。ADPN ELISA試劑盒(貨號：SND-H851)由滁州仕諾達生物科技有限公司提供，MCP-1 ELISA試劑盒(貨號：IB-E10079)由江西艾博因生物科技有限公司提供。

1.2.2外周血單個核細胞miRNA-103檢測 采集首發組、反復發作組患者入組后次日及對照組體檢時清晨空腹靜脈血2 mL，分離外周血單個核細胞，采用實時熒光定量PCR法測定外周血單個核細胞miRNA-103表達水平。使用TRIzol試劑提取總RNA，同時使用Thermo NanoDrop2000超微量紫外分光光度計測定標本RNA濃度，A260/A280比值范圍在1.8～2.0為純度較好。將RNA逆轉錄為cDNA后行PCR，測定miRNA-103的相對表達水平。miR-103上游引物為5′-AGAGCCTGTGGTGTCCG-3′，下游引物為5′-CATCTTCAAAGCACTTCCCT-3′；內參β-Actin上游引物為5′-GCGAGAAGATGACCCACCACC-3′，下游引物為5′-ATGTCACGCACGATTTCCTATTA-3′。采用Veriti7500實時熒光定量PCR儀行PCR。反應體系：上、下游引物各0.2 μL，cDNA模板1.0 μL，SYBR Green 10.0 μL，加蒸餾水至20.0 μL。反應條件：95 ℃預變性30 s，95 ℃ 5 s，60 ℃ 31 s，共進行40個循環。采用2-ΔΔCt方法計算需要檢測的miRNA-103相對表達水平，每組數據各測3次，取平均值。

1.2.3預后隨訪 對反復發作組在本院接受疾病針對性抗菌藥物治療結束后行為期6個月的預后隨訪，其中6個月內復發為預后不良，6個月內疾病控制良好無復發為預后良好，分析ADPN、MCP-1、miRNA-103在不同預后反復發作組患者中的表達差異。

1.3觀察指標 (1)比較3組ADPN、MCP-1、miRNA-103水平。(2)比較不同疾病嚴重程度反復發作組患者ADPN、MCP-1、miRNA-103水平。輕度感染標準：臨床癥狀較輕，偶有膿尿、氣尿、血尿、細菌尿。中度感染標準：腰痛、尿急、尿頻、尿不盡、尿痛等臨床癥狀明顯，伴有少量膿尿、氣尿、血尿、細菌尿。重度感染標準：腰痛和尿痛嚴重，膿尿、氣尿、血尿和細菌尿量多。(3)比較不同預后反復發作組患者ADPN、MCP-1、miRNA-103水平。(4)分析ADPN、MCP-1、miRNA-103三者之間的相關性。

2 結 果

2.13組ADPN、MCP-1、miRNA-103表達水平比較 與對照組相比，首發組、反復發作組ADPN表達降低，MCP-1、miRNA-103表達升高，差異均有統計學意義(P<0.05)；與首發組相比，反復發作組ADPN表達降低，MCP-1、miRNA-103表達升高，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 3組ADPN、MCP-1、miRNA-103表達水平比較

2.2不同疾病嚴重程度反復發作組患者ADPN、MCP-1、miRNA-103表達水平比較 反復發作組患者中，隨著患者疾病嚴重程度加重，ADPN表達水平逐漸降低，MCP-1、miRNA-103表達水平逐漸升高，輕度、中度、重度感染反復發作組患者ADPN、MCP-1、miRNA-103表達水平比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 不同疾病嚴重程度反復發作組患者ADPN、MCP-1、miRNA-103表達水平比較

2.3不同預后反復發作組患者ADPN、MCP-1、miRNA-103表達水平比較 與預后良好患者相比，預后不良患者ADPN表達水平降低，MCP-1、miRNA-103表達水平升高，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 不同預后反復發作組患者ADPN、MCP-1、miRNA-103表達水平比較

2.4ADPN、MCP-1、miRNA-103的相關性分析 Pearson相關性分析顯示，ADPN與MCP-1呈負相關(r=-0.543,P=0.001)，ADPN與miRNA-103呈負相關(r=-0.552,P=0.001)，MCP-1與miRNA-103呈正相關(r=0.649,P=0.001)。

2.5ADPN、MCP-1、miRNA-103對反復發作性尿路感染的診斷價值 ROC曲線顯示，ADPN、MCP-1、miRNA-103三項聯合對反復發作性尿路感染的診斷價值較高，AUC為0.907(95%CI：0.797～0.989，P<0.05)。見表5、圖1。

表5 ADPN、MCP-1、miRNA-103對反復發作性尿路感染的診斷價值

圖1 ADPN、MCP-1、miRNA-103診斷反復發作性尿路感染的ROC曲線

3 討 論

在細菌感染性疾病中，以尿路感染最為常見。有研究認為，尿路感染為由病原微生物引起的尿路炎癥性疾病，目前臨床上多采用尿細菌培養作為尿路感染的重要標準，但該方法耗時較長，敏感性差，因此尋找診斷靈敏度高、方便快捷的檢測指標對改善患者預后具有重要意義[8-9]。

尿路感染多伴隨著局部炎性反應表現，ADPN屬于一種由脂肪細胞特異性分泌的生物活性蛋白，其在炎性反應、血糖代謝異常、機體氧化應激反應及動脈粥樣硬化過程中發揮重要作用[10]。有研究顯示，在感染性疾病中，ADPN一方面抑制腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、γ-干擾素(IFN-γ)的合成和釋放，另一方面促進樹突狀細胞、單核-巨噬細胞、單核細胞的抗炎因子白細胞介素-10(IL-10)、IL-1R拮抗劑(IL-1RA)表達，修復內皮損傷，發揮抗炎作用[11-13]。MCP-1屬于一種趨化因子，具有激活和趨化單核細胞等炎癥細胞的作用，在機體處于正常狀態下使其不表達或者表達較低，但在機體發生炎性反應時表達異常升高[14-15]。有研究發現，TNF-α、IFN-γ等細胞因子均會誘導MCP-1的表達，在多種感染性疾病中均發現了MCP-1的存在，其水平與機體炎性反應相關[16-17]。臨床上關于ADPN、MCP-1與尿路感染的關系的研究較少。本研究結果顯示，在反復發作性尿路感染中ADPN表達降低，MCP-1升高，且與患者疾病嚴重程度、預后密切相關。當機體受到外界病原菌侵襲后，ADPN、MCP-1可能經介導單核-巨噬細胞等炎癥細胞合成分泌炎癥相關因子，誘發機體局部的炎癥級聯反應，導致尿路感染的發生。本研究結果與樓一峰等[4]的研究結果一致。

miRNA屬于一類大小約22 個核苷酸的非編碼單鏈小分子，參與多個生理過程，包括細胞增殖、凋亡、器官發育形成等，近年來研究發現，miRNA在多種疾病中呈特異性表達，具有較高的特異性，屬于一種潛在的新型生物標志物[18]。有研究發現，miRNA-103廣泛存在于多種組織中，經過與靶基因3′非翻譯區(3′-UTR)特異性結合，在轉錄水平上調控靶基因的表達，在感染性疾病中表達升高[19]。LI等[20]研究認為，miRNA-103可能經調控PI3K/AKT信號通路而介導機體炎性反應最終誘發骨關節炎的發生。有研究顯示，前列腺增生癥術后尿路感染患者miRNA-103表達升高，但并未明確其具體機制[21]。鑒于此，本研究分析miRNA-103與老年反復發作性尿路感染的關系，結果顯示，老年反復發作性尿路感染患者的miRNA-103表達升高，且miRNA-103水平與患者疾病嚴重程度、預后密切相關。miRNA-103可能促進炎癥因子的合成和分泌，介導炎性反應，參與反復發作性尿路感染的發生、發展。

本研究中，經ROC曲線分析發現，ADPN≥10.00 μg/mL、MCP-1≥65.98 pg/mL、miRNA-103≥0.82的老年患者更容易發生反復發作性尿路感染。另外，本研究結果顯示，ADPN與MCP-1呈負相關(r=-0.543,P=0.001)，ADPN與miRNA-103呈負相關(r=-0.552,P=0.001)，MCP-1與miRNA-103呈正相關(r=0.649,P=0.001)。

綜上所述，老年反復發作性尿路感染患者ADPN表達降低，MCP-1、miRNA-103表達升高，且ADPN、MCP-1、miRNA-103水平與患者疾病嚴重程度、預后關系密切，三者聯合檢測對反復發作性尿路感染有較高的診斷價值。