單純皰疹病毒型腦炎患者血清AchE、sOX40L水平與認知功能的相關性*

王 莎，賀 龍，李素婷，王東紅，王 靜

1.邯鄲市第一醫院神經內二科，河北邯鄲 056002；2.邯鄲市中心醫院神經外三科，河北邯鄲 056002； 3.邯鄲市中心醫院輸血科，河北邯鄲 056002；4.邯鄲市第一醫院CT室，河北邯鄲 056002

單純皰疹病毒型腦炎(HSE)是單純皰疹病毒(HSV)感染所誘發的一種中樞神經系統感染性疾病，此疾病進展快、病情危重、病死率高，且多數存活患者存在不同程度認知功能障礙[1]。頭顱CT、MRI技術是臨床診斷HSE的主要影像學技術，可通過觀察中樞神經系統解剖結構變化評估中樞神經系統損傷情況，但缺點是影像學表現相對滯后，而如何早期評估病情轉歸，指導臨床積極完善治療方案，強化針對性治療是亟待解決的問題之一[2]。乙酰膽堿作為腦重要神經遞質，是記憶學習的生化基礎，有研究證實，乙酰膽堿酯酶(AchE)可分解突觸間的乙酰膽堿繼而影響個體學習記憶活動，而有認知障礙的患者血清AchE水平升高[3-4]。可溶性OX40L(sOX40L)是共刺激因子家族主要成員之一，有研究已證實，其在病毒性心肌炎、原發性膽汁性膽管炎等疾病中水平異常，且異常程度與病情關系密切，但其與HSV病情轉歸的關系鮮見報道[5-6]。基于上述理論基礎，本研究探討HSE患者血清AchE、sOX40L水平及認知功能變化，旨在為臨床完善相關預警機制提供參考，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年3月至2020年12月就診于邯鄲市第一醫院(下稱本院)的63例HSE患者作為觀察組，另選取同期在本院體檢的63例健康者作為對照組。觀察組納入標準：(1)經腦脊液PCR反應確診為HSE，且病程<7 d；(2)入組前未經相關治療。對照組納入標準：經體檢身體健康，無可能影響本研究結果的疾病。排除標準：(1)伴其他神經系統感染及自身免疫性疾病患者；(2)其他傳染性疾病患者；(3)腦卒中等其他影響認知功能的疾病患者；(4)在治療過程中病死者。本研究經本院倫理委員會審批通過，受試者對本研究知情，并簽署知情同意書。兩組性別、年齡、體質量指數等比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組一般資料比較

1.2方法

1.2.1治療方法 觀察組患者均予以阿昔洛韋(石藥集團歐意藥業有限公司，國藥準字H20046529)抗病毒，酌情使用甘露醇(河北天致藥業有限公司，國藥準字H13021587)降顱壓，鼠神經生長因子(未名生物醫藥有限公司，國藥準字S20060052)提供營養，苯巴比妥(云南白藥集團大理藥業有限責任公司，國藥準字H53021324)抗癲癇等對癥治療。

1.2.2檢測方法 觀察組指標檢測均在疾病緩解期進行。生化指標檢測：采用非抗凝真空管采集肘靜脈血4 mL，3 500 r/min離心15 min(離心半徑為8 cm)，采集上層血清，采用酶聯免疫吸附試驗檢測sOX40L水平，試劑盒由上海仁捷生物科技有限公司提供；采用比色法檢測AchE水平，試劑盒由武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司提供。酶聯免疫吸附試驗操作步驟：取血清標本，用蒸餾水將原裝洗滌液30 mL稀釋至1 200 mL備用，各取標準品、血清25 μL于樣品孔，每孔加抵抗素試劑25 μL，混勻30 s，室溫孵育30 min；甩盡板內液體，每孔加350 μL洗滌液洗板，去水滴，反復洗3次；每孔加50 μL辣根過氧化物酶(HRP)，混勻30 s，室溫孵育30 min；甩盡板中液體，每孔加350 μL洗滌液洗板，去水滴，復洗3次；每孔加顯色液50 μL，混勻10 s，室溫孵育15 min；每孔加終止液50 μL，混勻30 s，30 min內在450 nm處讀取吸光度值，參照標準曲線讀取樣品水平。比色法操作步驟：取待測樣品20 μL至樣品孔，加緩沖液(GENMED試劑A)，混勻，室溫靜置1 min，加20 μL 誘導液(GENMED試劑B)，混勻，即刻放進540 nm分光光度儀獲得吸光度值，讀取樣品水平。

1.2.3認知功能評價[7]采用簡易精神狀態檢查量表(MMSE)評估認知功能，包括注意力及計算力、語言能力、回憶力、記憶力、定向力5個方面，總分范圍0～30分，得分為整數，以MMSE評分10～20分為認知功能不良組，21～30分為認知功能稍差組。質量控制：生化指標檢測由資深檢驗技師嚴格參照試劑盒說明書步驟規范操作，認知功能評價由經培訓合格的專業問卷調查人員進行，由患者本人自行完成問卷填寫，有不懂可進行解釋，但不給予任何引導性指導，調查中采用統一術語，數據統一處理，雙人錄入。

1.3觀察指標 (1)對比兩組血清AchE、sOX40L水平、MMSE評分。(2)對比觀察組不同MMSE評分患者血清AchE、sOX40L水平。(3)分析血清AchE、sOX40L水平與MMSE評分的關系。(4)分析認知功能損害的影響因素。

2 結 果

2.1兩組血清AchE、sOX40L水平及MMSE評分比較 觀察組血清AchE、sOX40L水平均高于對照組，MMSE評分低于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組血清AchE、sOX40L水平及MMSE評分比較

2.2觀察組不同MMSE評分患者血清AchE、sOX40L水平比較 觀察組患者經MMSE評分，其中10～20分18例，21～26分26例，27～30分19例。不同MMSE評分患者血清AchE、sOX40L水平比較，差異有統計學意義(P<0.05)；隨MMSE評分降低，血清AchE、sOX40L水平呈升高趨勢。見表3。

表3 觀察組不同MMSE評分患者血清AchE、sOX40L水平比較

2.3分析血清AchE、sOX40L水平與MMSE評分的關系 Pearson相關分析顯示，血清AchE、sOX40L水平與MMSE評分呈負相關(r=-0.675、-0.598，均P<0.001)，見圖1、2。

圖1 血清AchE水平與MMSE評分關系

圖2 血清sOX40L水平與MMSE評分關系

2.4認知功能損害的單因素分析 認知功能稍差組及認知功能不良組患者性別、年齡、最高學歷、發病至入院時間對比，差異均無統計學意義(P>0.05)；認知功能稍差組及認知功能不良組患者間確診時血清白細胞介素6、C反應蛋白、AchE、sOX40L水平及癲癇發作情況對比，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表4。

2.5認知功能損害的多因素分析 將表4有意義項目作為自變量，將MMSE評分作為因變量納入多元線性逐步回歸分析(賦值：MMSE評分、白細胞介素6、C反應蛋白、AchE、sOX40L為具體值，“癲癇未發作”=0，“癲癇發作”=1)，結果顯示，校正白細胞介素6、C反應蛋白水平后，AchE、sOX40L水平及癲癇發作仍是認知功能損害的影響因素(P<0.05)。見表5。

表4 認知功能損害的單因素分析

續表4 認知功能損害的單因素分析

表5 認知功能損害的多因素分析

3 討 論

HSE是中樞神經系統常見感染性疾病，占全部腦炎的5%～20%，病毒性腦炎的20%～68%[8]。盡管隨著阿昔洛韋等抗病毒藥物的廣泛應用，HSE患者病死率得到顯著控制，但中樞神經組織受病毒侵襲及病理生理效應影響出現不同程度損傷可致患者認知功能損害。本研究結果發現，HSE患者中出現認知功能損害占比接近71%，與相關研究近似[9]。因此，臨床急需加強HSE患者預后相關影響因素研究，積極完善治療方案，確保患者能最大化獲益。

sOX40L是機體免疫應答系統協同刺激分子家族主要成員之一，其主要參與T細胞活化、增殖、遷移等過程。有研究證實，sOX40L在炎性浸潤部位T細胞中表達明顯升高，而在非炎性部位幾乎無表達[10]。本研究對HSE患者外周血檢測發現，HSE患者sOX40L水平較健康人明顯升高(P<0.05)。分析原因可能是，sOX40L在啟動T細胞免疫效應后發揮正性調控作用，以維持并延續免疫應答，在HSV持續復制情況下，隨T細胞大量生成及凋亡可釋放sOX40L入血[11]。這提示血清sOX40L水平升高可能與HSE發生、發展有關。但也有研究對30例病毒性腦炎患兒血清sOX40L水平檢測，并未見其水平明顯升高[12]。本研究結論與此不符，可能與病例選取范圍及樣本量不同有關。本研究結果還發現，隨MMSE評分降低，血清sOX40L水平呈升高趨勢，這主要因為HSE發生、發展除與HSV對機體直接侵襲行為有關外，炎性細胞因子所誘發的炎性反應亦在其中發揮重要作用。RODRGUEZ等[13]研究顯示，機體受病毒侵襲后免疫功能異常可激活變態反應；同時病毒感染后，免疫系統對中樞神經系統的免疫性損害程度甚至超過病毒對機體的直接侵犯，而sOX40L過表達可致免疫防御過度，加重HSE患者認知功能損害。

膽堿能系統分布整個中樞神經系統，參與神經傳遞及氧化應激、免疫反應調節等多個生理過程。目前臨床已證實，抗膽堿能藥物可通過減輕氧化應激及延緩細胞凋亡而降低腦梗死后癡呆的發生風險[14]。AchE是膽堿能系統重要調節物質，其主要功能是終止神經遞質作用于突觸后膜，參與生物體內神經信號傳遞過程。一項基礎實驗證實，學習記憶障礙小鼠血清中AchE水平明顯升高，隨治療進行，血清AchE水平降低[15]。本研究結果顯示，觀察組血清AchE水平高于對照組(P<0.05)，且血清AchE水平越高的患者，認知功能損害越嚴重。分析此機制可能是AchE可作為一種特異性神經分泌蛋白，調節神經元增殖及突起長出，而HSE發病后隨HSV復制及機體免疫異常激活，中樞神經細胞損傷加劇，AchE代償性生成以促進損傷組織修復，但其主要功能是降解乙酰膽堿，終止神經遞質傳導過程，當其過度生成時可直接造成膽堿能神經末梢所釋放的乙酰膽堿被破壞，血清AchE水平越高，可能提示神經功能損傷越嚴重，同時可加劇神經傳導障礙，影響認知功能[16]。因此，血清AchE水平或可為臨床早期HSE患者預后提供參考。但還有研究指出，中樞神經系統病毒感染病情轉歸是多因素參與的結果，炎性反應、并發其他神經系統疾病等均與HSE患者預后發生認知功能障礙有關[17]。本研究采用多元線性逐步回歸校正白細胞介素6、C反應蛋白水平后發現，AchE、sOX40L、癲癇發作與MMSE評分有關(P<0.05)，說明AchE、sOX40L、癲癇發作是HSE患者發生認知功能損害的主要因素。但不難看出癲癇發作仍無法直觀性評價患者認知情況，且患者認知功能受眾多因素影響，而血清AchE、sOX40L水平變化涉及免疫損害、神經傳導等過程，或可滿足對認知功能評估的需求，為臨床完善相關診療機制提供參考。本研究不足之處在于，樣本量較小，HSE患者血清AchE、sOX40L所測結果為病情穩定期數據，而HSE確診時數據是否可作為此類患者預后預測的指標，仍需后期繼續探討。

綜上所述，血清AchE、sOX40L水平升高是HSE患者認知功能損害的相關因素，可能為臨床完善相關預警機制提供參考。