微小RNA-143、糖類抗原19- 9在胰腺癌診斷和預(yù)后預(yù)測中的應(yīng)用價值

田永，王瑞勤，常越，陳希，陳明凱

河南大學(xué)附屬鄭州頤和醫(yī)院消化內(nèi)科，鄭州 450000

胰腺癌是臨床常見的惡性腫瘤，由于早期癥狀不明顯，絕大多數(shù)患者確診時已發(fā)展至進(jìn)展期，僅有少部分患者確診時能夠采取手術(shù)根治性治療，5年生存率低于10%[1-2]。胰腺癌惡性程度高、早期診斷困難、預(yù)后極差，因此提高胰腺癌的早期診斷率可能對改善預(yù)后具有重要意義[3]。血清腫瘤標(biāo)志物檢測是臨床中篩查腫瘤最簡便、快捷的方法，但目前尚無診斷胰腺癌的準(zhǔn)確可靠的血清標(biāo)志物，糖類抗原 19-9（carbohydrate antigen 19-9，CA19-9）是美國食品藥品管理局（Food and Drug Administration，F(xiàn)DA）批準(zhǔn)的唯一一個用于臨床的胰腺癌血清標(biāo)志物，但其靈敏度和特異度有限[4]。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤的發(fā)生發(fā)展與微小RNA（microRNA，miRNA）的調(diào)控相關(guān)，其中miRNA-143在結(jié)腸癌、乳腺癌中低表達(dá)，經(jīng)證實(shí)miRNA-143為抑癌基因，而且其在胰腺癌患者血清中的表達(dá)水平明顯低于健康人，其低表達(dá)影響了胰腺癌的組織學(xué)特性及生物學(xué)行為[5-6]。本研究探討miRNA-143、CA19-9在胰腺癌診斷和預(yù)后預(yù)測中的應(yīng)用價值，以期為胰腺癌的診斷和治療提供新的方向，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年10月至2017年10月河南大學(xué)附屬鄭州頤和醫(yī)院收治的胰腺癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理檢查確診為胰腺癌；②年齡18～80歲；③入院前未接受過其他抗腫瘤治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并重要臟器功能障礙；②合并血液系統(tǒng)疾?。虎酆喜⑵渌麗盒阅[瘤；④失訪患者。根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入100例胰腺癌患者，作為胰腺癌組。其中，男54例，女46例；年齡41～78歲，平均（62.35±7.28）歲；腫瘤直徑 1.5～5.8 cm，平均（3.50±1.22）cm；腫瘤部位：胰頭42例，胰體尾58例；臨床分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期25例，Ⅲ期49，Ⅳ期15例。另選擇同期河南大學(xué)附屬鄭州頤和醫(yī)院收治的30例胰腺良性病變患者（胰腺良性病變組）和30例健康體檢者（健康組）。胰腺良性病變組中，男17例，女13例；年齡36～75歲，平均（61.58±6.91）歲；疾病類型：慢性胰腺炎14例，急性胰腺炎9例，胰腺良性占位7例。健康組中，男15例，女15例；年齡37～79歲，平均（63.05±8.01）歲。3組研究對象的性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P﹥0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

采集所有研究對象的肘靜脈血5 ml，離心后取上層血清并分裝成2份，保存于-80℃冰箱中待用，其中一份采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測血清CA19-9水平，另外一份采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）檢測 miRNA-143表達(dá)水平。

1.3 隨訪方法

對胰腺癌患者進(jìn)行3年的電話隨訪，隨訪截止時間為2020年10月，統(tǒng)計患者的生存情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，符合正態(tài)分布且方差齊性計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組間比較采用單因素方差分析，如有統(tǒng)計學(xué)差異，進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線分析血清miRNA-143、CA19-9單獨(dú)及聯(lián)合檢測對胰腺癌的診斷價值，采用二元Logistic回歸分析構(gòu)建聯(lián)合診斷方程；采用Spearman相關(guān)分析法分析miRNA-143與CA19-9的相關(guān)性；采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，組間比較采用Log-rank檢驗(yàn)。以P﹤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清miRNA-143、CA19- 9水平的比較

胰腺癌組、胰腺良性病變組、健康組的血清miRNA-143、CA19-9水平比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01）。胰腺癌組患者的血清miRNA-143水平低于胰腺良性病變組和健康組，CA19-9水平高于胰腺良性病變組和健康組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.05）；胰腺良性病變組和健康組的血清miRNA-143水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P﹥0.05）；胰腺良性病變組患者的血清CA19-9水平高于健康組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.05）。（表1）

表1 3組研究對象血清miRNA-143、CA19- 9水平的比較（）

表1 3組研究對象血清miRNA-143、CA19- 9水平的比較（）

注：a與健康組比較，P<0.05；b與胰腺良性病變組比較，P<0.05

組別miRNA-143（pmol/L）CA19-9（U/L）胰腺癌組（n=100）0.44±0.15a b72.19±25.46a b胰腺良性病變組（n=30）0.71±0.1957.33±18.20a健康組（n=30）0.69±0.2017.56±5.11F值44.98272.665P值<0.01<0.01

2.2 血清miRNA-143、CA19- 9單獨(dú)及聯(lián)合檢測對胰腺癌的診斷價值

ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清miRNA-143聯(lián)合CA19-9檢測診斷胰腺癌的AUC為0.923，靈敏度為82.00%，特異度為90.00%；血清miRNA-143診斷胰腺癌的AUC為0.882，靈敏度為78.00%，特異度為93.33%；血清CA19-9診斷胰腺癌的AUC為0.718，靈敏度為59.00%，特異度為83.33%。其中血清miRNA-143聯(lián)合CA19-9檢測對胰腺癌的診斷價值最高，其次是血清miRNA-143、血清CA19-9。（表2、圖1）

表2 血清miRNA-143、CA19- 9單獨(dú)及聯(lián)合檢測對胰腺癌的診斷價值

圖1 血清miRNA-143、CA19- 9單獨(dú)及聯(lián)合檢測診斷胰腺癌的ROC曲線

2.3 血清miRNA-143與CA19- 9表達(dá)的相關(guān)性

Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，血清miRNA-143與CA19-9表達(dá)無相關(guān)性（r=-0.135，P=0.089）。

2.4 血清miRNA-143、CA19- 9表達(dá)與胰腺癌患者預(yù)后的關(guān)系

以ROC曲線獲得的miRNA-143、CA19-9截斷值為界將胰腺癌患者分為低表達(dá)組和高表達(dá)組，分析miRNA-143、CA19-9與胰腺癌患者預(yù)后的關(guān)系。本研究中100例胰腺癌患者的隨訪資料完整，隨訪時間為3～36個月，根據(jù)血清miRNA-143、CA19-9的截斷值將其分為miRNA-143高表達(dá)組（miRNA-143≥0.39 pmol/L，43例）和miRNA-143低表達(dá)組（miRNA-143﹤0.39 pmol/L，57例）、CA19-9高表達(dá)組（CA19-9≥67.26 U/L，65例）和CA19-9低表達(dá)組（CA19-9﹤67.26 U/L，35例）。結(jié)果顯示，miRNA-143低表達(dá)組患者的3年生存率為12.30%，低于miRNA-143高表達(dá)組患者的27.90%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=6.529，P=0.011）；CA19-9高表達(dá)組患者的3年生存率為16.90%，低于CA19-9低表達(dá)組患者的31.40%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.039，P=0.044）。miRNA-143低表達(dá)組患者的中位總生存期為12.07個月（95%CI：8.30～15.70），短于miRNA-143高表達(dá)組的 21.09個月（95%CI：14.59～27.41）；CA19-9高表達(dá)組患者的中位總生存期為13.27個月（95%CI：8.49～17.51），短于CA19-9低表達(dá)組的21.46個月（95%CI：12.89～29.11）。（圖2、圖3）

圖2 miRNA-143低表達(dá)組（n=57）和miRNA-143高表達(dá)組（n=43）胰腺癌患者的生存曲線

圖3 CA19- 9低表達(dá)組（n=35）和CA19- 9高表達(dá)組（n=65）胰腺癌患者的生存曲線

3 討論

調(diào)查顯示，由于胰腺癌發(fā)病隱匿、早期診斷率低、解剖位置特殊，其預(yù)后較差，病死率極高，其中80%的患者在首次確診時已處于中晚期，無法采取手術(shù)切除治療，只能采取化療、放療、免疫治療等綜合治療，但患者的生存情況并未得到明顯改善[7-8]。因此，探尋新的腫瘤標(biāo)志物和分子靶點(diǎn)以提高胰腺癌的早期診斷率和治療效果成為臨床研究的熱點(diǎn)。CA19-9是目前最常用的診斷胰腺癌的標(biāo)志物，正常情況下CA19-9在血清中的含量極少，主要以糖蛋白復(fù)合物的形式存在，當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)某些炎癥反應(yīng)如胰腺炎、胰腺良性占位病變時，CA19-9可過表達(dá)，而且在腫瘤患者的血清中，CA19-9水平也會升高[9-10]。miRNA屬于內(nèi)源性非編碼RNA，長度約為22 nt，可通過基因沉默途徑調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化、凋亡過程，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[11]。miRNA-143是近年來臨床研究較多的一類抑癌基因，經(jīng)證實(shí)其在胰腺癌細(xì)胞中低表達(dá)，可能與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，也有研究表明，miRNA-143在胰腺癌組織中的表達(dá)量與全身淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移率呈負(fù)相關(guān)[12-13]。因此，本研究將miRNA-143與CA19-9聯(lián)合用于診斷胰腺癌并探討其預(yù)后預(yù)測價值。

本研究結(jié)果顯示，胰腺癌組患者的血清miRNA-143水平低于胰腺良性病變組和健康組，CA19-9水平高于胰腺良性病變組和健康組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.05）；胰腺良性病變組和健康組的血清miRNA-143水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P﹥0.05）；胰腺良性病變組患者的血清CA19-9水平高于健康組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.05）。上述結(jié)果與郭飛波等[6]研究結(jié)果具有一定的相似性，提示miRNA-143可能參與了胰腺癌的發(fā)展。既往研究發(fā)現(xiàn)，原癌基因Kirsten鼠肉瘤病毒癌基因同源物（Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog，KRAS）的激活突變是導(dǎo)致惡性腫瘤（包括胰腺癌）最常見的原因，其激活后可介導(dǎo)磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）及促分裂原活化的蛋白激酶（mitogenactivated protein kinase，MAPK）通路，從而調(diào)控細(xì)胞增殖、遷移及凋亡過程[14-15]。KRAS基因激活后可導(dǎo)致miRNA-143在多種胰腺癌細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，說明miRNA-143表達(dá)下調(diào)可促進(jìn)腫瘤的發(fā)展，因此胰腺癌患者血清miRNA-143水平低于胰腺良性病變患者和健康者。黃鶯等[16]研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-21聯(lián)合CA19-9檢測對胰腺癌具有較高的診斷價值。本研究通過繪制ROC曲線得出，miRNA-143聯(lián)合CA19-9檢測對胰腺癌的診斷價值最高，提示miRNA-143聯(lián)合CA19-9檢測可提高胰腺癌的診斷準(zhǔn)確性。本研究結(jié)果顯示，miRNA-143診斷胰腺癌的靈敏度與特異度均相對較高，表明miRNA-143與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)；而CA19-9診斷胰腺癌的靈敏度與特異度均相對較低。已有研究顯示，在胰腺良性病變中CA19-9也存在過表達(dá)[17]。miRNA-143與CA19-9聯(lián)合診斷胰腺癌的靈敏度和特異度均理想，可進(jìn)一步提高診斷效能。本研究通過Spearman法進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果顯示，血清miRNA-143與CA19-9表達(dá)無相關(guān)性，與羅杰[18]的研究結(jié)果具有一定的相似性。

研究顯示，通過構(gòu)建miRNA模型能夠預(yù)測胰腺癌患者的生存情況[19]。本研究結(jié)果顯示，miRNA-143低表達(dá)組患者的3年生存率低于miRNA-143高表達(dá)組，CA19-9高表達(dá)組患者的3年生存率低于CA19-9低表達(dá)組，提示miRNA-143和CA19-9可作為胰腺癌的預(yù)后預(yù)測指標(biāo)。然而本研究仍存在不足，納入的病例數(shù)相對較少，未來需加大樣本量進(jìn)一步證實(shí)。

綜上所述，miRNA-143聯(lián)合CA19-9檢測對胰腺癌具有較高的診斷價值，而且miRNA-143和CA19-9可作為胰腺癌的預(yù)后預(yù)測指標(biāo)。