胃癌患者幽門螺桿菌感染與EGF、EGFR、HER2表達相關性分析*

王 楠,房玉海,高雪茹,姜 葵

(1.天津醫科大學總醫院消化內科 300042；2.天津市東麗醫院消化內科 300300)

胃癌是我國發病率第二位的腫瘤，每年新發胃癌人數約占全球的40%[1]。由于目前我國胃癌早期患者診斷率較低，導致胃癌患者整體5年生存率仍不足50%[1]。幽門螺桿菌(helicobacter pylori,Hp)在胃癌進展中發揮作用，35%～60%的胃癌與Hp感染有關[2-3]。但Hp引發腫瘤形成和進展潛在分子機制仍未完全明確[4]，目前Hp感染是否能影響與胃癌發生相關蛋白表達也存在爭議[5]。盡管多項研究已表明表皮生長因子(epidermal growth factor,EGF)家族中的EGF、EGF受體(EGF receptor,EGFR)、人EGF受體-2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)在胃癌組織中表達增加，并被認為與胃癌形成和進展有關[6-8]。但關于Hp感染與胃癌組織中EGF、EGFR、HER2表達的關系的研究結論仍存在矛盾[9]。如有研究表明胃癌患者Hp感染與HER2表達無關[7]，而有文獻報道Hp感染可誘導胃黏膜HER2過表達[10-11]。本研究探討了胃癌患者Hp感染與EGF、EGFR、HER2表達的關系，旨在為今后進一步對胃癌患者的研究和治療提供研究基礎。

1 資料與方法

1.1研究對象

收集2019年9月至2021年9月天津醫科大學總醫院和天津市東麗醫院診斷的249例胃癌患者的臨床資料。納入標準：(1)通過手術或內鏡下標本病理檢查確診為胃癌；(2)通過組織病理學檢查明確為Hp感染；(3)未行Hp根治治療或治療失敗。排除標準：(1)既往有化療史；(2)病理標本過小無法進行病理診斷；(3)合并其他惡性腫瘤。本研究開始前經天津醫科大學總醫院倫理委員會備案，由于回顧性研究不涉及患者身份信息，本研究獲得了倫理委員會的知情同意豁免。

1.2方法

1.2.1資料收集

收集患者一般資料包括年齡、性別、腫瘤位置、病理類型、淋巴結浸潤情況、泌尿系統侵犯情況、Lauren分型、美國東部腫瘤協作組(eastern cooperative oncology group,ECOG)評分、TNM分期等。收集患者Hp感染情況，以及胃癌組織和周邊淋巴結中EGF、EGFR、HER2表達情況等。

1.2.2Hp感染判斷方法

首先使用HE染色，對于Hp陰性組織再使用吉姆薩染色確認Hp感染情況，兩種方法同為陰性則無Hp感染[12]。根據慢性胃炎悉尼系統對Hp感染患者病理組織學的炎癥和嚴重程度進行評估：0-無感染，1-低，2-中等，3-高[13]。

1.2.3EGF、EGFR、HER2表達檢測及判斷方法

使用熒光原位雜交檢測標本中HER2表達情況。至少測量20個連續腫瘤細胞核中HER2基因的平均拷貝數和第17號染色體著絲粒(centromeric probe for chromosome 17，CEP17)平均拷貝數。HER2/CEP17比值大于或等于2為HER2陽性[14]。利用免疫組織化學染色半定量評估胃癌組織和周邊淋巴結中EGF、EGFR、HER2蛋白表達情況。使用顯微鏡(×400)計算每個組織切片中至少500個腫瘤細胞。腫瘤和轉移淋巴結中小于30%的細胞存在EGF、EGFR、HER2表達陰性；腫瘤和轉移淋巴結中大于或等于30%細胞存在EGF、EGFR、HER2表達陽性。

1.3統計學處理

2 結 果

2.1納入胃癌患者的Hp感染情況

249例患者中胃癌組織通過手術標本獲得208份和內鏡活檢獲得41份。根據HE染色情況，Hp陽性86例，Hp陰性163例。Hp陰性患者組織切片再使用吉姆薩染色重新識別Hp狀態后陽性18例，陰性145例。最終根據組織病理學檢查結果，249例患者中Hp陽性104例(41.77%)，Hp陰性145例(58.23%)。

2.2Hp陽性和陰性胃癌患者一般資料比較

249例患者年齡27～89歲，其中男178例，女71例。組織病理學診斷為腺癌139例(55.82%)，印戒細胞癌61例(24.50%)，腺癌-印戒細胞混合腺癌49例(19.68%)。Hp陽性和陰性患者年齡、性別、腫瘤位置、病理類型、淋巴結浸潤、泌尿系統侵犯情況、Lauren分型、ECOG評分、TNM分期比較差異均無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 Hp陽性和陰性患者一般資料

續表1 Hp陽性和陰性患者一般資料

2.3Hp感染程度與胃癌EGF家族相關蛋白表達的關系

249例患者EGF表達陽性112例(44.98%)、EGFR表達陽性94例(37.75%)、HER2表達陽性37例(14.86%)。Hp感染程度與胃癌患者EGF、EGFR、HER2表達均無關，差異均無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 Hp感染程度與EGF、EGFR、HER2表達的相關性[n(%)]

2.4Hp感染與腫瘤、淋巴結EGF蛋白的關系

Hp感染與胃癌患者腫瘤、淋巴結中EGF、EGFR、HER2蛋白無關。腫瘤組織中HER2蛋白表達與腫瘤組織EGF、EGFR、局部淋巴結中HER2蛋白表達中度相關。腫瘤組織中EGF與EGFR、淋巴結中EGF與EGFR表達也呈中度相關，見表3、圖1。

圖1 胃癌患者Hp感染與不同位置EGF家族相關蛋白相關性熱圖

表3 胃癌Hp感染與腫瘤、淋巴結EGF家族相關蛋白表達的相關性(r)

3 討 論

Hp感染是導致胃癌發生的重要危險因素。在不同地區和人群中，胃癌患者Hp感染率為35%～94%[2-3,12]。而Hp感染根治后可降低患者發生胃癌的風險[15]。Hp感染與腸型胃腺癌的發生、發展關系密切，Hp感染患者胃癌好發于胃竇部位[1]。本研究比較Hp感染患者胃癌發生部位發現其胃癌發生位置均多位于胃竇和胃角，Hp感染與胃癌發生位置關系不大。目前Hp感染導致胃癌過程所涉及的潛在機制仍不清楚。為此，國內外學者長期以來一直致力于研究Hp感染與不同腫瘤相關蛋白的關系。尤其是對EGF、EGFR、HER2基因及其蛋白的表達水平一直有較高的研究興趣，但關于Hp感染與上述EGF家族基因和蛋白表達狀態的關系仍缺少具有高等級證據的研究。

腫瘤癌基因——HER-2可編碼與EGFR密切相關的跨膜糖蛋白。HER2在調節細胞增殖和分化及與細胞存活相關的其他活動中具有重要作用。胃癌HER2過表達比例為2%～45%，國內相關文獻報道為12%～20%[14，16]。本研究納入的胃癌患者中HER2陽性者占14.86%，且Hp感染與患者HER2表達無關。與本研究結論類似的其他研究人員也發現Hp感染與HER2蛋白表達無關[7]。但SHIM等[10]研究表明患者HER2表達與CagA陽性的Hp感染相關。

CagA蛋白是一種Hp細菌毒力因子，通過細菌Ⅳ型分泌系統遞送到胃上皮細胞中[17]。目前國內大多數研究并未討論不同毒力Hp感染與HER2蛋白的關系。因此，今后仍需要大樣本研究進一步探討HER2表達與胃癌患者CagA陽性和CagA陰性Hp的關系。

EGF是由53個氨基酸組成的單一多肽，在細胞相互作用中發揮著重要作用。細胞的EGF與相鄰細胞上EGFR之間的協同作用與細胞的遷移、生長，以及腫瘤生長、轉移等多種生物學特性的改變密切相關[18]。在一項經典研究中通過流式細胞分析技術證實Hp感染患者EGF和EGFR蛋白水平加倍，Hp根除后兩種蛋白水平顯著降低[19]。這與Hp可能調節胃黏膜中EGFR的表達有關，當感染未經治療時EGF和EGFR水平升高可能刺激細胞增殖并啟動新的增殖過程[19]。可見根除Hp對于胃癌的預防和治療至關重要。但本研究并未發現Hp感染與EGF、EGFR的表達相關。造成這種差異的原因可能與EGF、EGFR檢測方法不同，Hp基因型和人種差異等均存在潛在關系。但本研究發現腫瘤組織中HER2與EGF、EGFR和淋巴結中HER2表達相關。而EGF在腫瘤和淋巴結中的表達均與EGFR水平相關。因此，今后也需要更多大樣本的研究來闡明Hp感染與EGF蛋白表達的相關性。

本研究存在一定的不足：(1)部分內鏡活檢患者未獲得胃癌周圍淋巴結組織，對相關性分析結果可能產生一定影響；(2)受研究條件限制，并未分析Hp基因型差異對結果的影響；(3)受限于本研究為回顧性研究，未探討Hp感染與不同EGF蛋白表達差異對患者長期預后的影響，也未探討Hp根治后對EGF、EGFR、HER2表達變化；(4)同樣受限于研究性質，本研究并未比較非胃癌患者中Hp感染情況與不同EGF蛋白表達的差異。因此，今后仍需要進行前瞻性大樣本研究探討上述問題。

綜上所述，胃癌患者Hp感染與胃癌組織中EGF、EGFR、HER2表達無關。腫瘤組織中HER2與EGF、EGFR和淋巴結中HER2表達相關。而EGF在腫瘤和淋巴結中的表達均與EGFR表達中度相關。今后仍值得進一步探討不同Hp毒力因素與EGF家族之間的關系。