CA125、MDM2、VEGF、FAK在子宮腺肌癥中的表達(dá)水平及其意義

溫馨 薩日娜 宋建東

子宮腺肌癥是一種常見的婦科疾病，主要發(fā)生在絕經(jīng)前婦女，可導(dǎo)致慢性盆腔疼痛、痛經(jīng)、不孕和不良產(chǎn)科結(jié)局。據(jù)估計(jì)，子宮腺肌癥在絕經(jīng)前婦女中的發(fā)病率最高可達(dá)80%，在患有不孕癥和慢性盆腔痛的婦女中患病率更高[1]。子宮腺肌癥的主要組織學(xué)特征是在子宮肌層內(nèi)存在子宮內(nèi)膜腺體和間質(zhì)，周圍有平滑肌增生。盡管子宮腺肌癥于1860 年由病理學(xué)家Carl von Rokitansky 首次描述，并于1962 年被婦科醫(yī)生Ludwig Emge 確認(rèn)為“難以捉摸的疾病”，但至今子宮腺肌癥的病因仍然不明，主要源于歷史上依賴于子宮切除術(shù)后子宮標(biāo)本的組織病理學(xué)檢查來(lái)診斷疾病，以及過(guò)去缺乏可靠的術(shù)前診斷，限制了人們對(duì)其重要性的認(rèn)知及進(jìn)一步研究相關(guān)癥狀、合并癥和對(duì)生活質(zhì)量影響的能力。因此，尋找和發(fā)現(xiàn)可靠早期的診斷生物標(biāo)志物對(duì)改善子宮腺肌癥患者生育能力具有重要的意義[2-3]。目前，解釋子宮腺肌癥病理學(xué)仍然沒(méi)有定論，普遍認(rèn)為子宮腺肌癥是一種與惡性行為相關(guān)的良性疾病，包括侵襲能力增強(qiáng)、轉(zhuǎn)移、細(xì)胞凋亡改變及子宮內(nèi)膜血管生成增加。糖類抗原125（CA125）是一種高分子量糖蛋白，傳統(tǒng)上與卵巢癌相關(guān)，在其他良性疾病中可能升高[4]，黏著斑激酶（FAK）是一種細(xì)胞質(zhì)蛋白酪氨酸激酶，在調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附、遷移、增殖和存活方面發(fā)揮重要作用[5]，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）是目前已知最為關(guān)鍵的血管形成因子[6]，鼠雙微基因2（MDM2）是腫瘤抑制因子P53 的重要調(diào)節(jié)基因，通過(guò)調(diào)節(jié)P53 促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖和生長(zhǎng)來(lái)促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[7]。基于此，本研究探討CA125、MDM2、VEGF、FAK 在子宮腺肌癥中的表達(dá)水平及其意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2020 年2 月-2022 年2 月于內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院80 例經(jīng)子宮切除術(shù)治愈并經(jīng)子宮標(biāo)本的組織病理學(xué)檢查確診為子宮腺肌癥患者的臨床資料，將其設(shè)為觀察組，分別取其異位內(nèi)膜組織和在位內(nèi)膜組織；并分析同期因其他婦科疾病（排除子宮腺肌癥、子宮內(nèi)膜異位癥）來(lái)本院接受手術(shù)治療，且子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本正常的80 例患者的臨床資料，將其設(shè)為對(duì)照組。觀察組納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）子宮腺肌癥患者均經(jīng)病理確診，無(wú)其他內(nèi)科合并癥；（2）術(shù)前3 個(gè)月未經(jīng)激素治療；（3）臨床資料完整。對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）患有除子宮腺肌癥、子宮內(nèi)膜異位癥以外的良性婦科疾病；（2）未經(jīng)任何藥物治療；（3）臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并有嚴(yán)重肝腎功能不全、血液系統(tǒng)疾病、免疫系統(tǒng)疾病及惡性腫瘤。（2）入院前接受過(guò)對(duì)癥治療。本次研究獲得到本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 血清標(biāo)本及其檢測(cè)方法 抽取兩組患者清晨空腹靜脈血5 mL，靜置后離心，1 000 r/min 離心20 min，將上層血清吸取置于EP 管中，密封、標(biāo)記，放于-80 ℃冰箱保存待測(cè)。血清CA125、MDM2、VEGF、FAK 水平的測(cè)定均采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定，CA125 試劑盒購(gòu)自北京普贊生物技術(shù)有限公司，MDM2 試劑盒購(gòu)自武漢伊萊瑞特生物科技有限公司，F(xiàn)AK 試劑盒購(gòu)自上海意杰生物科技有限公司，VEGF 試劑盒購(gòu)自上海酶聯(lián)生物技術(shù)有限公司，所有檢測(cè)過(guò)程均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.2.2 組織標(biāo)本及其檢測(cè)方法 術(shù)中取觀察組患者異位病灶和在位內(nèi)膜組織及對(duì)照組的正常子宮在位內(nèi)膜組織，用0.9%生理鹽水沖洗血液，然后放入10%福爾馬林中進(jìn)行固定，乙醇脫水、常規(guī)石蠟包埋，制成厚度約為3 mm 的石蠟切片，采用免疫組織化學(xué)進(jìn)行染色，即55～60 ℃烤片10 min、脫蠟、洗滌、抗原修復(fù)、洗滌振蕩、封閉非特異結(jié)合位點(diǎn)、分別滴加一抗（VEGF 抗體濃度為1∶500，CA125抗體濃度為1∶250，MDM2抗體濃度為1∶500，F(xiàn)AK 抗體濃度1∶100）4 ℃過(guò)夜、洗滌振蕩、滴加二抗室溫孵育、洗滌、滴加二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色后脫水、蘇木素復(fù)染、樹脂膠封片。鼠抗人VEGF 單克隆抗體、一鼠抗人CA125 單克隆抗體、鼠抗人FAK 克隆抗體及鼠抗人MDM2 均購(gòu)Abcam公司。

1.2.3 免疫組化結(jié)果判定方法 用低倍和高倍鏡觀察切片，陽(yáng)性細(xì)胞為鏡下組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，有棕黃色顆粒沉著，染色明顯高于背景。VEGF 陽(yáng)性部位位于胞漿、MDM2 陽(yáng)性部位位于細(xì)胞核和胞質(zhì)中、CA125 和FAK 陽(yáng)性部位位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)。參照梁爽等[8]研究中的免疫組化結(jié)果評(píng)分方法對(duì)兩組組織標(biāo)本CA125、MDM2、VEGF、FAK 蛋白表達(dá)進(jìn)行評(píng)分。即在細(xì)胞密集區(qū)隨機(jī)選取10 個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)200 個(gè)細(xì)胞。計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分率，低于5%為0 分，高于5%且不高于20%為1 分，高于20%且不高于50%為2 分，高于50%且不高于75%為3 分，高于75%為4 分，根據(jù)染色強(qiáng)度分為不著色（0 分）、淺棕色（1 分）、棕色（2 分）和深棕色（3 分），最后將陽(yáng)性率評(píng)分與強(qiáng)度評(píng)分相乘所得之積即為該組織的免疫組化最終評(píng)分。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 23.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，連續(xù)變量用（）描述，符合正態(tài)分布的連續(xù)變量比較采用t 檢驗(yàn)，分類變量用率（%）描述，采用χ2檢驗(yàn)，使用各指標(biāo)血清檢測(cè)結(jié)果及預(yù)測(cè)概率作為協(xié)變量構(gòu)建ROC 曲線。曲線下面積（AUC）用于評(píng)估每種指標(biāo)的診斷價(jià)值。AUC大于0.9 表明預(yù)測(cè)效果極佳。AUC 介于0.7～0.9 表明預(yù)測(cè)效果良好。AUC＞0.5 且＜0.7 表明預(yù)測(cè)效果不佳。AUC≤0.5 表明該指標(biāo)缺乏診斷價(jià)值。以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 觀察組年齡26～51 歲，平均（37.21±6.50）歲；對(duì)照組年齡24～49 歲，平均（36.96±6.12）歲，兩組患者年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

2.2 兩組治療前血清CA125、MDM2、VEGF、FAK水平比較 與對(duì)照組比較，觀察組治療前血清CA125、MDM2、VEGF、FAK 水平均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組治療前血清CA125、MDM2、VEGF、FAK水平比較（）

表1 兩組治療前血清CA125、MDM2、VEGF、FAK水平比較（）

2.3 兩組組織標(biāo)本CA125、MDM2、VEGF、FAK蛋白表達(dá)比較 觀察組異位內(nèi)膜組織中CA125、MDM2、VEGF、FAK 蛋白表達(dá)均顯著高于在位內(nèi)膜組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但觀察組在位內(nèi)膜組織中CA125、MDM2、VEGF、FAK 蛋白表達(dá)與對(duì)照組內(nèi)膜組織相比，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 兩組組織標(biāo)本CA125、MDM2、VEGF、FAK蛋白表達(dá)比較[分，（）]

表2 兩組組織標(biāo)本CA125、MDM2、VEGF、FAK蛋白表達(dá)比較[分，（）]

*與對(duì)照組在位內(nèi)膜組織比較，P＜0.05；#與觀察組在位內(nèi)膜組織比較，P＜0.05。

2.4 血清VEGF、FAK、CA125、MDM2 在子宮腺肌癥中的診斷價(jià)值分析 根據(jù)上述檢測(cè)結(jié)果繪制ROC 曲線，VEGF、FAK、CA125、MDM2 單獨(dú)檢測(cè)的AUC分別為0.770、0.654、0.648、0.645，均顯著低于聯(lián)合檢測(cè)的0.916，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ZVEGF=2.036，P=0.042；ZFAK=3.291，P=0.001；ZCA125=3.221，P=0.001；ZMDM2=3.367，P=0.001）。見表3 和圖1。

表3 VEGF、FAK、CA125、MDM2診斷子宮腺肌癥效能分析

圖1 VEGF、FAK、CA125、MDM2診斷子宮腺肌癥ROC曲線

3 討論

子宮腺肌癥是一種常見的子宮疾病，其特征是在子宮肌層中存在子宮內(nèi)膜腺體和間質(zhì)，癥狀是非特異性的，并常與其他婦科疾病共存，早期識(shí)別診斷和治療具有挑戰(zhàn)性。目前子宮腺肌癥的發(fā)病機(jī)制尚不明確，臨床多認(rèn)為痛經(jīng)、經(jīng)量過(guò)多和不孕癥可能是子宮內(nèi)膜和肌層成分的炎癥、細(xì)胞凋亡、血管生成和收縮異常的結(jié)果[9-11]。

CA125 是單克隆抗體OC125 特異識(shí)別的腫瘤抗原，與卵巢癌密切相關(guān)，最近研得出結(jié)論，高水平的CA125 可見于良性婦科疾病而非惡性腫瘤。這主要基于CA125 為腔上皮化生組織細(xì)胞膜表面的膜蛋白抗原，在子宮內(nèi)膜疾病早期具有較強(qiáng)地分泌CA125 的功能，通過(guò)影響孕酮分泌進(jìn)一步促進(jìn)子宮內(nèi)膜增生，文獻(xiàn)[12-13]發(fā)現(xiàn)子宮腺肌癥女性的CA125 陽(yáng)性率高于正常對(duì)照組或平滑肌瘤患者，且CA125 水平與子宮大小呈正相關(guān)，還發(fā)現(xiàn)術(shù)后1 周平均CA125 水平顯著下降。VEGF 為促血管生長(zhǎng)因子，在子宮內(nèi)膜異位癥中的作用已經(jīng)確立，子宮內(nèi)膜細(xì)胞具有侵襲性，需要血管生成才能在異位部位建立。而子宮內(nèi)膜異位癥與子宮內(nèi)膜異位癥密切相關(guān)，故血管生成因子與發(fā)生子宮內(nèi)膜異位癥和子宮腺肌癥的風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)，盡管關(guān)于血管生成在子宮腺肌癥中的作用知之甚少，但文獻(xiàn)[14-16]發(fā)現(xiàn)與沒(méi)有子宮腺肌癥的對(duì)照患者的子宮內(nèi)膜相比，血管生成標(biāo)志物的表達(dá)增加和抗血管生成標(biāo)志物的減少，以及異位和在位子宮內(nèi)膜中血管密度（MVD）和毛細(xì)血管特征的增加，證實(shí)血管生成可促進(jìn)子宮腺肌癥發(fā)病。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)殚g充質(zhì)細(xì)胞的過(guò)程，常見于胚胎發(fā)育、腫瘤轉(zhuǎn)移和纖維化疾病中，有研究表明，EMT 在子宮腺肌癥的發(fā)展中發(fā)揮重要作用，F(xiàn)AK 可能促進(jìn)這一過(guò)程[17-18]，Zheng 等[19]研究顯示FAK 可誘導(dǎo)PI3K/AKT 信號(hào)級(jí)聯(lián)，導(dǎo)致EMT 標(biāo)志物的上調(diào)，在子宮腺肌疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。MDM2 是抑癌基因P53 的重要調(diào)節(jié)基因，可通過(guò)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖和生長(zhǎng)來(lái)促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，已有文獻(xiàn)[20]表明，MDM2 在子宮內(nèi)膜異位癥和子宮腺肌癥中升高。本研究結(jié)果顯示，觀察組血清CA125、MDM2、VEGF、FAK 及異位組織中CA125、MDM2、VEGF、FAK 表達(dá)均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），說(shuō)明血清及異位組織中CA125、MDM2、VEGF、FAK 的表達(dá)與子宮腺肌癥疾病發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，ROC 曲線分析顯示，血清VEGF、FAK、CA125、MDM2 聯(lián)合診斷子宮腺肌癥敏感度和特異度可分別達(dá)到84.40%和92.90%，故臨床可通過(guò)血清VEGF、FAK、CA125、MDM2 聯(lián)合檢測(cè)對(duì)子宮腺肌癥患者進(jìn)行早期診斷及預(yù)后評(píng)估。

綜上所述，CA125、MDM2、VEGF、FAK 的表達(dá)與子宮腺肌疾病發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，臨床可通過(guò)監(jiān)測(cè)患者血清及組織中CA125、MDM2、VEGF、FAK 的水平判斷疾病進(jìn)展和預(yù)后。鑒于子宮腺肌癥病理機(jī)制尚未明確，未來(lái)需要更多的研究確定上述生物標(biāo)志物在子宮腺肌癥中的具體的作用機(jī)制，以期成為預(yù)防和治療子宮腺肌癥的潛在靶點(diǎn)。