多糖組合物對特應性皮炎的功效評價及機理研究

隨著我國高等教育大眾化進程的不斷推進，高校畢業生的供給數量逐年大幅度增加。與此同時，近年來應屆畢業生的崗位數量和崗位質量卻大幅降低。如何合理地解決大學生的就業問題，直接影響到家庭和睦、社會和諧和國家穩定。輔導員作為高校從事就業指導工作的基礎力量，在大學生就業工作中的地位不容忽視。但輔導員就業指導隊伍由于整體素質不高、指導觀念不強、指導技術落后等，影響了畢業生就業工作的有效開展。因此，提高輔導員隊伍就業指導工作的能力，成為各高校促進畢業生順利就業、實現人才培養目標和社會人才資源合理配置的重要途徑。

皮膚是保護人體免受外界傷害與刺激的重要保護層，當外界刺激給人體造成損傷時，皮膚的免疫系統會啟動信號，促進炎癥因子（如白介素等）以及組胺過度表達

，引起血流加快、細胞的通透性增加，導致皮膚出現緊繃和發紅、瘙癢、脫屑甚至燒灼和刺痛等癥狀

。

特應性皮炎（atopic dermatitis，AD）是以慢性、炎癥性、瘙癢性為主要表現的皮膚病。過去30年，AD患病率在全球范圍內逐步上升，歐美國家兒童患病率為7%～30%，成人1%～10%。我國2015年一項流行病學調查顯示，1～7歲兒童AD患病率為12.94%，而成人AD的患病率尚無大樣本流行病學調查數據

。

臨床上對于AD治療主要應用糖皮質激素類外用藥物進行，但是長期應用激素類外用藥物會導致皮膚出現萎縮、色素沉著以及毛細血管擴張等不良現象

，進一步對皮膚加以損害。

2,4-二硝基氟苯（DNFB）模擬的AD模型，可通過破壞皮膚的屏障功能達到表皮厚度增加和表皮出現紅斑等癥狀來模擬AD癥狀

。本研究通過DNFB模擬的AD模型，基于南沙參多糖、枸杞多糖、玫瑰多糖、云芝多糖以及黃芩多糖良好的免疫調節以及抗炎功效，將5種多糖配方組合制備成5種天然多糖組合物，研究該多糖組合物的抗炎、抗氧化、免疫調節等機制，探索利用天然多糖緩解AD的作用及機理。

沙參在歷代本草中都有記載，《本草從新》首次把沙參分為南沙參和北沙參。南沙參性甘，微寒；歸肺、胃經；有養陰清肺，化痰，益氣等功效，用于肺熱燥咳，陰虛勞嗽，干咳痰黏，氣陰不足，燥熱口干。枸杞子始載于《神農本草經》，被列為上品。《本草綱目》對枸杞子的功效記載頗為詳細，可補腎生精，養肝，明目，堅筋骨，去疲勞，易顏色，明目安神，令人長壽

。云芝隸屬真菌門擔子菌亞門多孔菌科栓菌屬，具有增強免疫、抗氧化等功效

。玫瑰在《藥性考》中有記載，可行血破積，損傷瘀痛，浸酒飲。黃芩是中醫臨床常用藥材，具有清熱解毒、活血祛瘀、消腫止痛之功效

。

南沙參多糖能夠對血清抗體的水平產生顯著的提高作用，從而對免疫有一定的調節作用

；枸杞多糖作為枸杞子中主要化學成分及活性成分，具有多種生物活性，有很好的消炎止痛作用，且不良反應小、藥物依賴性弱

；云芝多糖能提高機體免疫功能，增強機體抗感染能力，對自身免疫性疾病、感染性疾病的治療有重要意義

；玫瑰多糖可以增強鼠巨噬細胞的白細胞介素6的產生，具有有效的免疫調節活性

。

01 材料與方法

1.1 主要材料、試劑、儀器與試驗動物

丙二醇（≥99.9%），華韻生物；九水合硫化鈉（≥99.9%），阿法埃莎；生理鹽水（0.9%），廣州美侖生物科技有限公司；無水乙醇，廣州化學試劑廠；多聚甲醛（4%），阿拉丁；橄欖油（酸度≤0.3%），黛尼；DNFB（98%），麥克林；蒸餾水，實驗室自制。

超高壓均質機 JN-02HC，廣州聚能納米有限公司；電熱恒溫水浴鍋DK-S22，上海精宏試驗設備有限公司；離心機Z326K，德國賀默公司；數控超聲波清洗器KQ3200DE，昆山市超聲儀器有限公司。

由圖5可以看出以目前工區所有采用板墻厚度可以滿足集中拉底后的充填需要，如局部拉底高度過高，例如25#進路、26#進路和29#進路拉底較高的進路，可以考慮板墻砌筑厚度由400 mm增加到800 mm，防止由于進路高度增加進路內充填料漿體積增大對板墻的壓力增大，造成板墻倒塌[3]，影響工區正常生產。

1.2 天然多糖的制備、篩選及多糖組合物的復配

參考王淑萍等的實驗方法

，取曬干之后的南沙參，粉碎后取20g，與200 mL體積分數為95%的乙醇溶液混合，密閉靜置過夜。后過濾加入150 mL純化水，置于90℃恒溫水浴鍋恒溫加熱3 h，用300目濾袋過濾得懸濁液，靜置2h后，將懸濁液用雙層中速定性離心紙過濾，得到植物多糖水溶液，烘干得到植物多糖提取物。枸杞多糖、玫瑰多糖、云芝多糖、黃芩多糖的提取方法與南沙參多糖提取方法相同，均為水提醇沉法提取。

“行政法治存在于一個國家的法治體系中，也存在于一個國家的社會治理機制之中。通常情況下，行政法治都與一個國家的特定時代相對應，是這個國家特定時代的產物。”[3]在新時代社會主義社會治理目標模式下，公物的提供與管理不再只是行政權得以作用的對象和手段，而是國家或行政主體保障公民權益、實現社會和諧發展的法定職責，成為代表社會文明與法治進步水平的重要標志。

大鴨婆從海南島回來了，只在白家灣待了三天，就回海南島去了。兩個月后，他結束了海南島的制種工作，不光自己回來了，還帶回了兩個姑娘，一個挺著大肚子，一個又黑又瘦，說是兩姐妹，說話伊伊呀呀，吉里丫里，只有大鴨婆聽得清白。兩姐妹同一天嫁給了大鴨婆和二鴨婆。白家灣的人后來才知曉，杏子拍電報要大鴨婆回來，大鴨婆當時是把人家的肚子搞大了，脫不得身。若不是杏子和招財兩人造孽，大鴨婆還不知道怎么在海南島了難。

移取一定量植物多糖水溶液至100 mL容量瓶，用純化水定容至刻度線，移取2 mL該溶液至試管，再各加5 %苯酚溶液1.0 mL，搖勻，然后加入5.0 mL濃H

SO

使其充分混勻，置于沸水浴中加熱15 min，取出后在冰浴中冷卻至室溫。取100 μL溶液于96孔板中，在酶標儀中在490 nm處對樣品測定吸光值。將吸光度與多糖標準曲線對比，得出該溶液多糖含量。

觀察各組小鼠每天的背部皮損變化情況，依據PASI評分標準給予小鼠皮損處紅斑（erythema）、鱗屑（scales）和浸潤增厚程度（thickness）0～4的積分：0，無；1，輕度；2，中度；3，重度；4，極重度。將三者積分相加得到總積分（0～12），對各組小鼠積分取平均值后繪制趨勢線。

1.3 AD動物模型及給藥方法

伴隨著醫改的實施，不少醫院為了適應醫改的要求而將很多改革注意力集中在提高醫院臨床治療的水平與服務質量上，但卻忽略了對財務會計內部控制工作的管理，導致醫院財務會計內部控制工作形式化嚴重。另外，一些醫院的領導也缺乏對財務會計控制工作重要性的認識，在安排與調度上缺乏考慮，導致醫院財務會計內部控制工作很難真正發揮控制作用，甚至出現財務管理混亂無章的局面，直接對醫院財務資金的使用和管理產生負面影響。

1.4 PASI評分

多糖組合物包括復配1～5：枸杞多糖、玫瑰多糖、云芝多糖組合形成復配1；黃芩多糖、南沙參多糖、云芝多糖組合形成復配2；南沙參多糖、枸杞多糖、玫瑰多糖組合形成復配3；黃芩多糖、云芝多糖、玫瑰多糖組合形成復配4；黃芩多糖、枸杞多糖、南沙參多糖組合形成復配5。以上5種復配的多糖質量濃度均為0.5%（w/v）。

1.5 H&E染色

通過對小鼠背部皮膚HE染色，測量其背部皮膚厚度，結果如圖2所示。與空白組比較，模型組小鼠背部表皮厚度增厚；與模型組比較，各多糖復配組的小鼠背部表皮厚度均顯著下降，其中復配3組的小鼠背部表皮厚度接近空白組。

參考Motoyama K等的實驗方法

，取BALB/c雄性小鼠70只，4周齡，體重20～25g，購自廣東省醫學試驗動物中心【動物批號：SCXK(粵)2016-0041】。小鼠標準環境飼養，室溫維持在（24±0.2）℃，保持晝夜12 h節律，自由飲水、攝食。適應性飼養1周后進行實驗。小鼠隨機分為空白組、模型組、復配1、2、3、4、5組（共7組，每組10只）。實驗前一周剔除小鼠背部毛發（面積約2cm×4cm），直至皮膚完全顯露。脫毛次日，除空白組外，其余各組用0.5% DNFB涂抹小鼠背部脫毛皮膚，每只100 μL，連續涂抹7 d。造模第7天，模型穩定，各給藥組開始給予相應的受試物，連續給藥15 d。給藥期間，除正常組外，其余各組每周3次動物背部及右耳涂抹0.2%DNFB，其中背部100 μL，右耳 50 μL。各治療組從造模第7天開始外用涂抹給藥，1次/d，連續15 d，將受試物少量涂于患病右耳及背部皮膚，模型組及空白組不涂抹。

1.6 甲苯胺藍染色測定皮膚肥大細胞密度

用于實驗的石蠟切片的皮膚組織用曲別針反貼固定在硬質塑料卡上，防止組織固定時卷曲。經10%福爾馬林固定后，進行石蠟包埋和常規切片，甲苯胺藍染色法對小鼠皮膚組織石蠟切片進行染色，觀察各組小鼠患部皮膚組織中肥大細胞數量變化。使用ImageJ 1.48軟件在放大倍率200×下進行肥大細胞計數。

2.Have you ever been to Beauty Salon? Tell your experience of beauty treatment?

1.7 實時熒光定量PCR檢測

將受試小鼠處死后剪去受試小鼠背部皮膚約1cm×1cm的面積（＞100mg）的全層皮膚組織。檢測皮膚組織中IL-6 mRNA、MCP-1 mRNA、cAMP mRNA表達。使用總RNA提取試劑盒，從小鼠皮膚組織中提取mRNA，測定RNA含量、純度符合要求。使用反轉錄試劑盒合成cDNA。以GADPH作為內參基因，根據2-ΔΔCt算法進行各組mRNA表達量檢測。引物由廣州賽維爾生物科技有限公司合成，總RNA提取試劑盒購自賽維爾，貨號：G3013。引物序列見表1。

1.8 統計學處理

通過對小鼠耳部皮膚HE染色，測量其耳部皮膚厚度，結果如圖3所示，圖3A中刺激為涂抹了98% DNFB的小鼠右耳，未刺激為沒有涂抹98% DNFB的小鼠左耳。涂抹了98% DNFB的模型組小鼠與空白組比較，模型組小鼠耳部表皮厚度增厚；與模型組比較，各多糖復配組的小鼠耳部表皮厚度均顯著下降，其中復配1、復配4組的小鼠耳部表皮厚度接近空白組。

如某年一個中午，單位組織沙漠徒步，在一條大河中間，一個女同事被急流沖倒，盡管沒有被卷走，其他同事齊聲驚叫，有的甚至穿著鞋子跳入河中，奮力施救，而他卻爆發出一陣刺耳的笑聲。那種笑，在烈日之下，讓人渾身打顫。還有一個冬天，單位組織掃雪，在寒風凜冽、雪粒橫飛的馬路上，一個騎摩托車的人，因為車速太快而摔倒，滑出十多米遠。雖然有些滑稽，但這個同事爆發出來的笑，在我和其他同事的耳朵里，卻有些毛骨悚然。

02 結果

2.1 多糖提取及含量測定結果

5種植物提取的多糖如表2所示，其中枸杞多糖固重達到8.44 g，多糖含量達到43.85%；黃芩多糖固重達到7.10 g，多糖含量達到35.50%。

2.2 DNFB模型小鼠背部皮膚PASI評分

與空白組比較，模型組小試背部皮膚出現紅、腫等癥狀；與模型組比較，各多糖復配組紅、腫等癥狀明顯好轉；其PASI評分如圖所示。各多糖復配組的第17天PASI評分均明顯低于模型組。

2.3 DNFB模型小鼠背部皮膚厚度測量及統計

將耳部及背部皮膚組織用4%多聚甲醛固定，常規脫水后，石蠟包埋。將修整好的蠟塊放置在石蠟切片機上切成厚度為4 μm的切片。切片漂浮于攤片機40 ℃溫水上，將組織展平，用載玻片將組織撈起，并放進60 ℃烘箱內烤片。待水烤干蠟烤化后取出常溫保存備用。切片于顯微鏡下觀察并隨機選取視野進行拍照并測量其厚度。

2.4 DNFB模型小鼠耳部皮膚厚度測量及統計

實驗結果采用單因素方差分析，采用GraphPad軟件作圖。使用Image J軟件處理甲苯胺藍染色圖片，所有數值均用“均數±標準誤差”。各組間差異比較用單因素方差分析（One-Way ANOVA），進行組間兩兩多重比較。

2.5 各天然多糖組合物復配對小鼠背部炎癥皮膚組織中肥大細胞密度抑制情況

與空白組比較，模型組肥大細胞密度顯著升高；與模型組比較，各多糖復配組肥大細胞密度均顯著降低，見圖4。

2.6 CAMP、MCP-1、IL-6在mRNA中的表達量

實時熒光定量PCR結果表明，與模型組相比，給予多糖復配1的小鼠背部全層皮膚組織中CAMP mRNA的表達量顯著升高，如圖5所示。

4) 在罐區防火堤外應設置緊急切斷閥的現場操作開關，其接點信號直接送至氣動執行機構的電磁閥或電液、電動執行機構的緊急停車系統(ESD)動作端子或相應的SIS，用于在緊急情況下現場手動開關緊急切斷閥。

與空白組比較，模型組小鼠背部全層皮膚組織中MCP-1 mRNA的表達量顯著升高。與模型組相比，給予多糖復配1、3、4、5組的小鼠背部全層皮膚組織中MCP-1 mRNA的表達量明顯降低，給予多糖復配2、4組的小鼠背部全層皮膚組織中IL-6 mRNA的表達量明顯降低。

03 討論

患AD后，皮膚免疫屏障受損，導致免疫調節下降，體內肥大細胞活化，炎癥反應增強

。肥大細胞是炎癥的主要啟動細胞，發生炎癥反應時，肥大細胞向外周組織過度浸潤加劇、放大炎癥反應

。

有研究表明，AD患者外周血中肥大細胞的數量增多。AD慢性期，免疫屏障受損，白介素-6等Th1型細胞因子和趨化因子表達水平提高，Th2細胞因子蛋白表達受抑制，刺激肥大細胞、巨噬細胞等炎癥細胞增多[25-28]。但同時，患AD后，巨噬細胞的遷移過程受阻，吞噬作用降低，導致無法抵御污染源，MCP-1在巨噬細胞的遷移過程中起到至關重要的作用。研究表明，cAMP參與了多種重要炎癥信號通路的調控，如MAPKs、NF-κB、JAKSTAT等通路。

亂作為的背后，往往是扭曲的政績觀在作祟。為了能迅速樹立自己的“能人形象”，充分展示自己的“治理能力”，少數干部特別熱衷上項目，搞工程。而進一步梳理中央“打虎”榜單，我們還不難發現，那些“政績項目”“形象工程”的背后，也往往隱藏著權錢交易的魅影。

本研究通過DNFB誘導小鼠成功模擬AD模型。結果表明，通過給予多糖復配的小鼠皮膚狀況顯著好轉，明顯抑制了小鼠耳部及背部紅、腫等癥狀。

從組織學結果可以看出，南沙參多糖、枸杞多糖、玫瑰多糖、云芝多糖以及黃芩多糖組合物通過調節提升小鼠體內Th1/Th2平衡，從而抑制了肥大細胞的活化，降低肥大細胞密度。實時熒光定量PCR檢測結果表明，多糖組合物提升了cAMP在mRNA中的表達水平，同時調節MAPKs、NF-κB通路中MCP-1的表達，增強了皮膚角質層屏障功能，修復了受損細胞。同時，多糖組合物通過抑制白介素-6在mRNA的表達量，使機體Th1/Th2平衡得以調節以及巨噬細胞的活化，從而有效緩解了AD的癥狀。

[1]謝志強，張世鑫.2020年成人特應性皮炎領域重要研究進展[J].中華醫學信息導報,2021, 36(4) : 18-18.

[2]林歡兒，李孜怡，彭靜，等.中醫藥治療特應性皮炎研究進展[J].遼寧中醫藥大學學報,2019,21(11):29-32.

[3]黃嬌，羅杰偉，韓麗，等.甘草酸銨調控IL-33/ST2通路對特應性皮炎小鼠肥大細胞活化的影響[J].藥物評價研究,2020,43(11):2181-2186.

[4]湯建萍.兒童特應性皮炎診斷和管理[J].中國實用兒科雜志,2015,30(01):33-36.

[5]莫俊鑾，周繼昌，劉小立，等.DNCB致敏誘導BALB/c小鼠特應性皮炎模型的建立[J].中國熱帶醫學,2013,13(12):1439-1442.

[6]曹素珍.皮膚科病人用藥依從性改變及護理對策[J].藥學服務與研究,2002,2(4):214-223.

[7]陳誠，程莎莎，房靈，等.基于過敏進程的治療性教育在特應性皮炎患兒治療中的作用[J].中國麻風皮膚病雜志,2020,36(04):242-245,

[8]湯建萍.兒童特應性皮炎診斷和管理[J].中國實用兒科雜志,2015,30(01):33-36.

[9]石振萍，蔣朝輝，梁卿，等.枸杞多糖結構及藥理作用研究進展[J].甘肅中醫藥大學學報,2021,38(02):90-95.

[10]張圓，孫玉娣，劉璇，等.云芝糖肽化學成分的研究進展[J].中國食用菌,2021,40(08):1-4.

[11]劉寧寧.黃芩在急性濕疹治療中的臨床效果及藥理作用分析[J].中國現代藥物應用,2021,15(15):241-243.

[12]馬瑩慧，劉雪，王藝璇，等.南沙參主要化學成分及藥理活性研究進展[J].吉林醫藥學院學報,2019,40(05):357-359.

[13]石振萍，蔣朝輝，梁卿，等.枸杞多糖結構及藥理作用研究進展[J].甘肅中醫藥大學學報,2021,38(02):90-95.

[14]張俊，吳超.云芝多糖對機體細胞因子影響的研究進展[J].遼寧中醫藥大學學報,2011,13(10):263-265.

[15]魯雷震，賈紫偉，封成玲，等.玫瑰植物中活性物質及其功效研究進展[J].食品研究與開發,2021,42(20):206-213.

[16]鄭瑞生，封輝，戴聰杰，等.植物中抗氧化活性成分研究進展[J].中國農學通報, 2010, 26 (9) :85-90.

[17]王淑萍，許飛揚，張學偉.乙醇浸提南沙參揮發油化學成分分析[J].分子科學學報,2010,26 (6) :428-431.

[18]Motoyama K，Tanida Y，Sakai A，et al. Anti-allergic effects of novel sulfated polysaccharide sacran on mouse model of 2,4-Dinitro-1-fluorobenzene-induced atopic dermatitis[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2018, 108:112-118.

[19]劉方方，王華.特應性皮炎的靶向治療藥物研究進展[J].兒科藥學雜志, 2019,25(11):55-58.

[20]車丹丹，狄正鴻.特應性皮炎的治療進展[J].醫學綜述,2019,25(18):3634-3640.

[21]陳嘉雯，姚志榮.特應性皮炎的生物學分型及靶向治療進展[J].中國麻風皮膚病雜志,2019,35(3):184-188.

[22]王珊，劉玲玲.肥大細胞在特應性皮炎發病機制中的作用[J].中國醫學文摘-皮膚科學,2016,33(2): 114-121.

[23]Kezic S，Jakasa I. Filaggrin and skin barrier function[J].Curr Probl Dermatol,2016,49: 1-7．

[24]彭戈，韓秀萍.特應性皮炎中相關細胞因子的研究進展[J].中國麻風皮膚病雜志 ,2017,33(3):189-192

[25]Hassani B，Isaian A，Shariat M, et al. Filaggrin gene polymorphisms in Iranian ichthyosis vulgaris and atopic dermatitis patients[J]. Int J Dermatol,2018,57(12): 1485-1491．

[26]Armengot-Carbo M，Hernández-Martín，Torrelo A. The role of filaggrin in the skin barrier and disease development[J]. Actas Dermosifiliogr,2015,106(2) : 86-95.

[27]孔羽薇，姚志榮.特應性皮炎相關細胞因子的研究進展[J].臨床兒科雜志 ,2019,37(2):148-152.

[28]黃雨茜，張浩，張雙，等.維生素D受體與MCP-1在系統性紅斑狼瘡患者中的表達及意義[J].南方醫科大學學報,2020,40(01):99-103.