油莎草提取物對慢性應激誘導小鼠抑郁樣行為的改善和作用機制初探

抑郁癥是發病率最高的精神疾病，具有高患病、高復發、高致殘和高致死率等特點

。目前，治療抑郁癥的藥物多數是化學合成，因此從天然產物中開發出療效更好、副作用更低的抗抑郁藥物成為當務之急

。植物化學物因其天然、高效、低毒等特點，已成為治療抑郁癥的研究熱點

。目前發現的具有抗抑郁作用的天然活性物質有黃酮類、生物堿類、多糖類、皂苷類、苯并二蒽酮類等

。WANG J C等

發現，葫蘆巴種子類黃酮可能通過下調KLF11/SIRT1-MAO-A通路，抑制MAO-A的表達和活性，以及上調單胺類神經遞質水平發揮抗抑郁作用；孫丹晨等

通過網絡藥理學方法，以抑郁癥為目的疾病，篩選出酸棗仁生物堿中10 個具有抗抑郁的活性成分；韋震等

研究發現，黃精多糖(200、400 mg/kg)可通過上調急性絕望抑郁模型動物腦內的單胺類神經遞質、抑制神經炎性反應和調節色氨酸代謝通路起到改善抑郁的作用；張云等

研究發現，柴胡皂苷D通過PI3K/AKT/FOXO1信號通路抑制TLR4蛋白表達,改善大鼠腦中神經炎癥與神經元凋亡,逆轉LPS造成的大鼠抑郁樣癥狀；肖東

采用慢性不可預知性小鼠抑郁模型及分子生物學技術研究發現，苦豆根單體黃酮Trifolirhizin及總黃酮能顯著改善小鼠的抑郁樣癥狀。

油莎草是莎草科莎草屬多年生草本

，是一種優質、高產、綜合利用價值高的多用型作物

。《新華本草綱要》及《名醫別錄》里有油莎草行氣開郁功效的記載，而抑郁癥在中醫上多屬“郁證”

。研究發現，油莎草具有促進微循環和抗凝血活性作用

，能夠調節大鼠的性行為

、干預缺血性腦中風

等生物活性，但關于油莎草抗抑郁生物活性的研究鮮見報道，而其同屬莎草科植物的香附子根的醇提物、香附揮發油抗抑郁作用已有研究報道。JIA H M等

發現，香附醇提物乙酸乙酯萃取部位和正丁醇萃取部位對“行為絕望”動物模型有較明顯的抗抑郁作用，其作用機制是抑制了5-羥色胺單胺遞質(5-HT)的再吸收以及單胺氧化酶(MAO活性)；李世英等

采用慢性束縛應激法建立小鼠焦慮模型。通過強迫游泳實驗、懸尾實驗、曠場實驗、明暗箱實驗、高架十字迷宮實驗分析發現香附揮發油能改善慢性束縛應激小鼠焦慮行為，其作用機制可能與調節中樞膽堿能系統、增加海馬單胺類遞質 5-HT 水平有關。

由串口調試助手可以知道詳細信息：設備的IP 地址：192.168.103，子網掩碼：255.255.255.0，網關 ：192.168.1.1，MAC 地 址 ：0X00-0X08-0XDC-0X00-0XAB-OXCD等，以及單片機發送的對應API函數，如果數據成功上傳到Yeelink，則串口會顯示HTTP OK！指令，以及上傳的溫濕度數據；如圖25所示下位機采集的溫濕度數據已經上傳到Yeelink平臺了，此時登陸網頁可以看到數據已經更新到當前時間段；也可以查看歷史數據，比如：顯示最近一天、一周、一月、一年等采集的數據，方便了解數據變化趨勢。

敬思群等

對油莎草全株三部位活性成分的分析結果表明，油莎草含有糖類、黃酮、內酯、香豆素及其苷類、甾體及三萜類、鞣質與酚類、生物堿、強心苷等有效成分。Jing SQ等

研究發現，油莎草地上莖葉醇提物及其總黃酮活性單體葒草苷對CoCl

誘導的HT22細胞I/R損傷有保護作用。葒草苷是一種具有生物活性的黃酮類化合物，且有研究報道葒草苷能抑制氧化應激、改善Aβ1-42誘導的阿爾茨海默病小鼠認知功能缺陷

。王賽賽等

確定了油莎草地上莖葉醇提物的30%乙醇洗脫部位為抗氧化活性最強部位，并從此部位分離得到4個單體化合物，其中葒草苷占4種單體總量的65.4%(質量百分比)，葒草苷是油莎草單體化合物的主要組成部分。鑒于此，本研究采用慢性不可預見性的應激(CUMS)小鼠抑郁模型，通過小鼠行為學測試、血清超氧化物歧化酶(SOD)活力及丙二醛(MDA)含量等生化指標、血清皮質酮水平分析，考察油莎草三部位提取物的抗抑郁作用，為抗抑郁候選新藥的研發及油莎草資源深層次開發利用奠定理論基礎。

建立核磁共振成像儀管理檔案，定期進行效益分析，弄清影響效益的因素及影響程度，從而提高設備的使用率，充分挖掘設備潛力。與大型醫療機構開展設備維修合作，由于中心大型設備較少，如引進專業技術維修人員，則大大增加設備運行成本，降低設備經濟效益，通過維修、維護合作，可達到共享技術優勢和人才資源的目的，這種方法既可提高中心設備維修、維護的專業化水平，又可降低設備的運行成本，提高設備的經濟效益。提升設備操作人員的專業水平，加強職業培訓，增加他們外出交流學習的機會，開闊專業視野，科學合理使用檢測設備，減少誤診漏診、誤治漏治情況的發生。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

由表8可知，80 g的烘干量太少，導致吸收的微波能量過多而烘干太干；100 g烘干量偏少；而140 g的烘干量偏多，單位質量的魚片吸收的微波能量偏少而導致魚片硬度不夠；在120 g烘干量的條件下適宜，且鳳尾魚片軟硬適中，咀嚼性較好[12-14]。

1.2.2 造模、分組及給藥 (1)建立慢性不可預見性溫和應激(CUMS)抑郁小鼠模型：參照薛劍方法

。CUMS期間需單籠飼養，給予充足的水和食物，應激刺激方法有：①向每個標準籠噴灑干凈的水使墊料潮濕，將動物放置在潮濕籠中3～4 h；②45°斜籠3～4 h；③2 h晝/12 h夜循環為每30 min 1個連續周期，持續8 h；④移除所有墊料并加入0.25英尺深度的水，持續時間4 h；⑤噪音刺激等3 h以上刺激，前3周每天1種，后面可酌情增加應激，持續6 w，造模成功。具體為：領取小鼠162只，分2個組(空白組和模型組)，空白組正常飼養18只，模型組開始持續6 w的抑郁癥模型建立，將造模組小鼠進行模型達標測試，淘汰不合格的小鼠。再將造模組小鼠按照抑郁癥模型測試結果隨機分組，每組14只，即模型組、陽性組、油莎草須根水提物劑量組、油莎草須根醇提物劑量組、油莎草地上莖葉水提物劑量組、油莎草地上莖葉醇提物劑量組、油莎豆水提物劑量組、油莎豆醇提物劑量組。(2)分組：造模成功后，開始給小鼠受試藥物4 w(模型組，一部分在測試過程中繼續應激模型，另一部分不繼續應激)。實驗前對SPF級ICR小鼠進行1次糖水偏愛度實驗，根據結果選取無顯著差異的小鼠分別稱取體重。實驗前1天進行曠場實驗，剔除中央活動總路程結果差異較大的小鼠，然后將健康雄性小鼠112只隨機分為8組，每組14只，分別為正常對照組和模型組(均灌胃給予等體積的蒸餾水)、陽性對照組(鹽酸氟西汀40 mg/kg)和試驗樣品干預組(實驗組分別為油莎草須根水提物、油莎草須根醇提物、油莎草地上莖葉水提物、油莎草地上莖葉醇提物、油莎豆水提物、油莎豆醇提物)(表1)。(3)給藥：將小鼠按照組別分籠飼養，每天灌胃1次，灌胃容積 0.1 mL/10 g BW，給藥組(C～I 組)按照設定劑量灌胃受試物，A組和B組灌胃等體積的純凈水，連續給藥30 d，第30天晚上10點禁食，第31天處死小鼠，取樣。

1.2 方法

由表2可知，與正常組比較，模型組小鼠體重降低，有厭食暗示；與正常組比較，各給藥組小鼠體重增加，無顯著性差異；與模型組比較，各給藥組小鼠體重增加明顯，差異具有統計學意義(油莎草須根水提物和醇提物劑量組；油莎豆水提物組劑量組)。結果表明，油莎草提取物可以改善抑郁癥小鼠的厭食程度。

1.2.3 指標測定 (1)體重稱量，按給藥后，每周進行體重稱量，持續30 d。(2)小鼠行為學測試：①曠場實驗：采用木質敞箱(50 cm×50 cm×50 cm)，周壁及底面均為黑色，底面劃分為面積相等的25個方格(10 cm×10 cm)，觀察5 min內小鼠的活動情況，包括自主活動次數(方格間穿行次數)、直立次數(兩前肢離地1 cm以上的次數)。②強迫游泳實驗：正式測試前24 h，將小鼠置水深23 cm的玻璃圓缸(高40 cm，直徑18 cm)內，水溫(24±1)℃，作強迫游泳訓練15 min。在末次給藥60 min后再次將小鼠置水深23 cm的玻璃圓缸內強迫游泳5 min，觀察并記錄5 min內小鼠的靜止時間。當小鼠停止掙扎，浮在水中保持不動，或僅做一些必要的輕微動作保持頭部浮在水面上的時間視為不動時間。③糖水偏好試驗：先訓練動物適應飲糖水，訓練每籠同時放2個小瓶，1個瓶裝2%蔗糖水，1個瓶裝純水，每12 h換1次瓶子位置。訓練結束后進行糖水偏好實驗，先禁食禁水8 h，再給予每籠小鼠事先稱過重量的2瓶水(1瓶2%蔗糖水，1瓶純水)，15 h(中途8 h時交換瓶子位置)后，取走2瓶并稱重，計算糖水消耗量、純水消耗量，再算出小鼠糖水的偏好百分比。小鼠糖水的偏好百分比=糖水攝入量(g)/[糖水消耗量(g)+純水消耗量(g)]，正常組作對照。在造模期間每2周測1次糖水偏好值，操作步驟同上。(3)生化指標測定：①小鼠血清MDA含量測定和SOD及GSH-PX活性測定：各組小鼠進行完行為學測試后，摘眼球取血，分離血清。測定MDA含量、SOD和GSH-Px的活性，按照試劑盒規定的方法比色測定吸光度，按公式換算成SOD和GSH-Px的活性以及MDA濃度。②小鼠血清皮質酮濃度測定：采用酶聯免疫分析(ELISA)法測定皮質酮含量，操作步驟按照皮質酮試劑盒說明書進行。

Multifuge X1R離心機，賽默飛世爾科技(中國)有限公司；SHE-3000G全波長多功能酶標分析儀，北京海爾福知心科技有限公司；隔水式恒溫培養箱，上海一恒科技有限公司；RE-52旋轉蒸發器，上海亞榮生化儀器廠；DZF-6050真空干燥箱，上海一恒科學儀器有限公司；LGJ-25C冷凍干燥機，四環福瑞科儀科技發展(北京)有限公司。

傳統的電氣工程優化設計，主要是工作人員根據自己的經驗，靠著工作人員以往的經驗，根據現場的人工測量，并運用手工技術進行設計，很顯然，這樣的設計效率是很低的，一旦出現設計返工，或者由于設計人員自身水平導致設計結果不達標，就會給后期的電氣安裝和使用帶來不必要的麻煩，而且更容易導致系統故障，不利于電氣工程的安全性和穩定性。通過智能化設計，就可以從很大程度上對電氣工程的設計進行提前優化，大大的降低了設計人員的工作量。智能化設計的成果通過實際檢驗后還可以很好的提升電氣工程的適用性，尤其是遺傳算法的使用，可以從很大程度上實現對設計的優化，降低設計的錯誤，提升整個系統設計的有效性，保證電氣工程設計更加高效。

除此以外，在新時期、新背景下的小學數學情景教學實踐應用過程中，教師還應當強調數學評價體系在情景教學中的應用。通過對學生每一步操作給予恰當、得體的評價來實現更為全面、客觀的認識。最終實現學生學習能力的有效引導，激發學生對于數學的主動性與積極性，對于一些有條件的數學課堂還可以引入多媒體教學等方式來實現情景教學內容的滲透與推進。

1.3 數據分析

2.2.1 對CUMS小鼠曠場運動行為的影響 由表3可知，造模前8組小鼠水平運動得分對比差異均無統計學意義(

>0.05)，造模后，正常組水平運動得分與模型組和7個給藥組比較有顯著性差異(

<0.01)，垂直運動得分也有顯著性差異(

<0.05或

<0.01)，說明本研究造模成功。與正常組比較，各給藥組小鼠水平運動和垂直運動得分無顯著性差異(

>0.05)。與正常對照組比較，模型組小鼠的運動功能明顯受到抑制，水平和垂直運動得分低；與模型組比較，各給藥組中，油莎草須根水和醇提物、油莎草塊莖水提物組和油莎豆醇提物劑量組水平運動得分提高，說明油莎草須根水和醇提物、油莎草塊莖水提物和油莎豆醇提物對CUMS小鼠的行為有一定的影響，對抑郁癥小鼠有改善水平活動行為的作用。油莎草須根水和醇提物組垂直運動得分提高，這說明油莎草須根水和醇提物對CUMS小鼠的行為有一定的影響，對抑郁癥小鼠有改善垂直運動行為的作用。綜上，油莎草提取物可以改善抑郁癥小鼠的運動能力，以油莎草須根水和醇提物作用最強。

2 結果與分析

2.1 油莎草提取物對CUMS小鼠體重的影響

1.2.1 樣品制備 (1)醇提物的制備：各部位的粉末過60目篩，分別以95%乙醇和50%乙醇各回流提取2次，每次2 h。提取液抽濾后，減壓濃縮(溫度40 ℃、真空度0.01 MPa)，冷凍干燥(真空度1 Pa、冷阱溫度65 ℃)。(2)水提物的制備：各部位的粉末過60目篩，用蒸餾水回流提取3次，每次2 h。提取液抽濾后，減壓濃縮(溫度80 ℃、真空度0.01 MPa)，冷凍干燥(參數同上)。

SPF級健康雄性ICR小鼠[生產許可證號：SCXK(新)2016-0003]162只，6～8 w齡，體重(20±2)g。動物質量合格證號：110322201101520028。動物于屏障級 SPF動物房飼養盒內常規飼養，自由進食進水；油莎草，采自實驗室在新疆昌吉的試驗田，2017年9月；丙二醛(MDA)試劑盒(貨號A001-1)、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(酶活150.50 U/mL，貨號A003-1)、谷胱甘肽-過氧化物酶(GSH-PX)測試盒(酶活69.12 U/mL，貨號A005)，南京建成生物工程研究所；酶聯免疫試劑盒(ELISA)，上海將來實業股份有限公司；鹽酸氟西汀(陽性對照藥)，禮來蘇州制藥有限公司(批號：8373A)。

2.2 油莎草提取物對CUMS小鼠行為學的影響

2.2.2 對CUMS小鼠強迫游泳不動時間的影響 造模前各10組小鼠不動時間對比差異均無統計學意義(

>0.05)，造模后，與正常對照組比較，模型組小鼠不動時間顯著增加，提示抑郁癥小鼠出現行為絕望。與正常組比較，各給藥組小鼠的不動時間無顯著性差異(

>0.05)。與模型組比較，各給藥組小鼠的不動時間明顯縮短，差異均有統計學意義(

<0.05)。結果表明，油莎草提取物可明顯減輕抑郁癥小鼠的絕望程度(表4)。

2.2.3 對CUMS小鼠糖水偏好的影響 與正常對照組比較，模型組小鼠的糖水偏好百分比明顯降低，糖水的消耗量明顯下降，差異具有統計學意義(

< 0.01)，提示抑郁癥小鼠對糖水的反應性降低。與正常組比較，各給藥組小鼠糖水偏好百分比無顯著性差異(

>0.05)。與模型組比較，油莎草提取物各劑量組小鼠的糖水偏好百分比明顯升高，糖水消耗量明顯增加。結果表明，油莎草提取物可提高抑郁癥小鼠對糖水的偏好(表5)。

2.3 油莎草提取物對CUMS小鼠生化指標的影響

由表6可知，與正常對照組比較，模型組小鼠血清SOD水平、GSH-Px活性降低，MDA含量明顯增高，差異具有統計學意義(

<0.01)；與正常組比較，各給藥組小鼠血清MDA含量顯著降低，油莎草須根水提物劑量組、油莎草須根醇提物劑量組、油莎草地上莖葉水提物劑量組、油莎豆醇提物劑量組的SOD水平極顯著升高(

<0.01)，各給藥組小鼠血清GSH-Px活性極顯著降低(

<0.01)；與模型組比較，油莎草提取物各組小鼠血清中SOD水平顯著提高(

<0.01)，油莎草須根水提物劑量組和醇提物劑量組、地上莖葉醇提物劑量組能大幅度提高GSH-Px水平，各給藥組都能顯著降低MDA含量(

<0.01)，結果表明，改善機體自由基損傷狀態，增強 SOD、GSH-Px活力，降低 MDA含量可能是油莎草提取物干預抑郁癥的機制之一。

2.4 油莎草提取物對CUMS小鼠血清皮質酮水平的影響

由表7可知，與正常對照組比較，模型組及各給藥組小鼠血清皮質酮水平升高，其中油莎豆醇提物劑量組能顯著提高小鼠血清皮質酮水平(

<0.05)；與模型組比較，油莎草各組提取物中油莎草須根水提物及醇提物劑量組、油莎草地上莖葉水提物及醇提物劑量組能降低血清皮質酮水平，而油莎豆醇提物劑量組能顯著提高血清皮質酮水平(

<0.05)，其他組無統計學差異(陽性對照組除外)，這與實驗室前期抗氧化性分析結果相一致。臨床研究表明,抑郁癥病人的下丘腦-垂體-腎上腺軸(HPA)功能亢進，血中糖皮質激素水平顯著升高

，說明油莎草須根、油莎草地上莖葉提取物可能通過抑制HPA軸功能紊亂而產生抗抑郁作用

，具體的作用機制仍需做進一步研究。

3 結論

油莎草提取物可以改善抑郁癥小鼠的厭食程度和運動能力，以油莎草須根水和醇提物作用最強；同時，油莎草提取物可明顯減輕抑郁癥小鼠的絕望程度、提高抑郁癥小鼠對糖水的偏好、提高CUMS小鼠血清中SOD水平，油莎草須根水提物組、醇提物組、地上莖葉醇提物劑量組能顯著提高GSH-Px水平，各組都能顯著降低MDA含量；油莎草須根醇提物劑量組、油莎草地上莖葉水提物劑量組能顯著降低CUMS小鼠血清皮質酮水平，說明油莎草提取物可能通過抑制HPA軸功能紊亂、改善機體自由基損傷狀態、增強 SOD、GSH-Px活力、降低 MDA含量等多種途徑改善慢性應激所引起的抑郁癥。

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