基質、插穗類型與扦插方式對川滇槲蕨扦插繁殖的影響

黨友超， 孫慶文， 王 波， 王 健， 陸 祥， 陳春伶

(貴州中醫藥大學 貴州省中藥民族藥材種質資源保存及評價工程研究中心， 貴州 貴陽 550025)

0 引言

【研究意義】川滇槲蕨(DrynariadelavayiChrist)系水龍骨科槲蕨屬植物，又名爬巖姜、骨碎補。《中國中藥資源志要》《貴州藥用蕨類植物》《貴州中草藥資源圖典》等本草記載川滇槲蕨以根狀莖入藥，具有補腎強骨、續筋止痛等功效；主治腎虛腰痛、耳鳴耳聾、牙齒松動、筋傷、斑禿和白癜風等[1-3]。其主要含苷類、葡萄糖及烯類等化學成分[4]。2020年版《中國藥典》所收載的中藥材骨碎補原植物為水龍骨科槲蕨屬植物槲蕨(DrynariaroosiiNakaike)[5]。槲蕨在貴州雖分布廣泛，但資源量十分有限，近年來由于市場需求激增，導致野生資源銳減，加之槲蕨屬植物生長在巖石上或樹干上的特殊生態環境要求，骨碎補藥材已供不應求，急需開展人工栽培，以滿足日趨擴大的市場需求。據全國(貴州)第四次中藥資源普查發現，川滇槲蕨在許多地方作為骨碎補進行銷售和使用。川滇槲蕨與槲蕨的功能主治與化學成分等均較相似，且川滇槲蕨根莖更發達，產量高，根狀莖附著的鱗片少，更有利于藥材的加工炮制，開發利用前景廣闊。開展川滇槲蕨人工繁殖技術研究，對提高其產量，滿足市場需求及環境保護等均具有重要現實意義。【前人研究進展】嚴福林等[6]以槲蕨根狀莖為插穗，考察不同基質、激素類型及其濃度與處理時間對槲蕨扦插繁殖的影響，提出了槲蕨根莖根系發育與后期生長的方法，為骨碎補藥材的人工繁殖提供了一定參考。目前，對川滇槲蕨的研究較少且主要集中于化學成分及資源分布等方面。胡勇等[7]對川滇槲蕨進行了生藥學鑒定。胡奇志等[4]研究發現，川滇槲蕨與槲蕨的化學成分等較相似。在全國(貴州)第四次中藥資源普查的過程中發現，川滇槲蕨在許多地方作為骨碎補進行銷售和使用。【研究切入點】川滇槲蕨在自然條件下繁殖的主要方式為孢子繁殖，但其孢子囊不具囊群蓋，孢子萌發受環境因素影響較大，導致川滇槲蕨在自然環境中生長繁殖較困難。扦插繁殖作為無性生殖的重要方法之一，具有遺傳穩定、能保持母本優良性狀、操作簡單、周期短、產量高等特點[8]。川滇槲蕨根狀莖發達，無性繁殖潛力較好，且目前未見川滇槲蕨扦插繁殖技術相關研究報道。【擬解決的問題】以成活率及發芽時間、葉片舒展時間等作為評價指標，采用多重比較等方法，研究不同基質、不同扦插方式及不同部位插穗對川滇槲蕨根狀莖扦插繁殖的影響，探尋其最適扦插繁殖方法，以期為川滇槲蕨的人工規模化種植及喀斯特地區石漠化治理提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 川滇槲蕨 樣品采自貴州省水城縣蟠龍鎮野外，經貴州中醫藥大學鑒定為水龍骨科植物川滇槲蕨(DrynariadelavayiChrist)，憑證標本存放于貴州中醫藥大學生藥重點實驗室標本室。

1.1.2 培養基質 腐殖土、草炭土等，購于金吉祥和厚普礦業材料廠；高錳酸鉀，廣州林國化肥有限公司生產。

1.2 方法

1.2.1 插穗處理 取生長旺盛、粗細一致、無病蟲害的川滇槲蕨根狀莖，去除泥土與須根后，將根狀莖分為頂端(根狀莖最先端嫩莖)與中端(根狀莖中端老莖)2組。用枝剪分別剪成頂端與中端各100根長15 cm左右的插穗，每根插穗帶2個節；頂端插穗50根下端剪斜面狀，作斜插方式備用，50根下端剪平，作平鋪備用；中端插穗50根下端剪斜面狀，上端剪平，作斜插方式備用，50根兩端均剪平，作平鋪方式備用。所有插穗分組捆好于清水中浸泡1 h后取出，所有剪口面均用草木灰消毒處理，備用。

1.2.2 試驗設計 采用3因素試驗，即3種基質(A為腐殖土∶砂石=3∶1，B為草炭土∶砂石=3∶1，C為腐殖土)，2種根狀莖插穗(x為頂端，y為中端)，2種扦插方式(1為斜插，2為平鋪)，共組成12個處理，即：Ax1，腐殖土∶砂石(3∶1)基質頂端插穗斜插；Ax2，腐殖土∶砂石(3∶1)基質頂端插穗平鋪；Ay1，腐殖土∶砂石(3∶1)基質中端插穗斜插；Ay2，腐殖土∶砂石(3∶1)基質中端插穗平鋪；Bx1，草炭土∶砂石(3∶1)基質頂端插穗斜插方式；Bx2，草炭土∶砂石(3∶1)基質頂端插穗平鋪；By1，草炭土∶砂石(3∶1)基質中端斜插；By2，草炭土∶砂石(3∶1)基質中端平鋪；Cx1，腐殖土基質頂端插穗斜插；Cx2，腐殖土基質頂端插穗平鋪；Cy1，腐殖土基質中端插穗斜插；Cy2，腐殖土基質中端插穗平鋪。每種插穗各100根，每種扦插方式各用50根，分別考察不同基質、不同部位插穗及不同扦插方式對川滇槲蕨扦插繁殖的影響。

1.2.3 試驗過程 試驗在貴州中醫藥大學溫室大棚進行。大棚配置有自動噴水裝置、控溫系統及換氣裝置等。選擇土質疏松、排水性好的地塊，用方形水泥板圍成長120 cm、寬120 cm的苗床，共3塊，苗床上搭建長500 cm、寬200 cm、高200 cm的遮陽網。用5%高錳酸鉀溶液對基質進行消毒后，按腐殖土∶砂石(3∶1)，草炭土∶砂石(3∶1)進行基質配制，將3種基質分別鋪入相應的苗床，耙平，建成3塊深約20 cm的試驗苗床，均勻澆灌讓基質充分吸水并把殘余的高錳酸鉀全部洗掉。將處理好的插穗扦插于建成的苗床中，斜插方式插穗按斜60°斜面狀向下扦插，以橫6 cm、縱6 cm的行距插入苗床，插穗頂端1/3～1/2露出基質；平鋪部分按橫6 cm、縱4 cm平鋪于基質上。處理完成后，對苗床進行全面澆灌，并將遮陽網固定扎實，后期管理注意適時澆水，保持空氣濕度在75%以上，基質濕潤但不浸水。

1.2.4 指標測定 自扦插之日起，每日進行觀察，記錄每株插穗最早發芽時間(芽長0.5～1.0 cm)、初葉長出時間(開始長出第一片卷曲嫩葉)與葉片舒展時間(所有卷曲嫩葉全部展開定義為葉片舒展)，扦插后70 d統一查看各插穗的生根情況并記錄(已生根插穗定義為成活，反之不成活)。以發芽時間、展葉時間的快慢和成活率為評價指標，探討不同基質、不同部位插穗及不同扦插方式對川滇槲蕨扦插繁殖的影響。

成活率=成活插穗數量/總插穗數量×100%

1.3 數據統計分析

采用Excel 2010處理數據，統計成活率，采用SPSS 26.0的多重比較法分析不同處理間數據的差異性(P<0.05，差異顯著；P<0.01，差異極顯著)并繪圖。

2 結果與分析

2.1 不同處理扦插繁殖川滇槲蕨的成活率

從圖1看出，不同處理扦插繁殖川滇槲蕨的成活率為60%～100%，表現為Ax1=Ax2=Bx1>Ay2>Bx2>Cx1>Cx2=Cy2>By1>Cy1>Ay1=By2。其中，Ax1、Ax2和Bx1的成活率最高，均為100%；Ay2其次，為96%；Ay1與By2最低，均為60%。有6種扦插方式成活率達90%以上，其中5種為頂端插穗，可初步判斷頂端插穗優于中端插穗；6種扦插方式中，3種為腐殖土∶砂石(3∶1)基質，2種為草炭土∶砂石(3∶1)基質，可初步判斷最優基質為腐殖土∶砂石(3∶1)基質，含砂石的基質優于不含砂石的基質。6種扦插方式中，斜插與平鋪方式均為3種，但成活率前三的扦插方式中有2種為斜插方式，可見斜插方式稍優于平鋪方式。

2.2 不同處理扦插繁殖川滇槲蕨的發芽時間

觀察發現，不同處理扦插繁殖川滇槲蕨的初芽時間和平均發芽時間最早分別為扦插后9 d和33 d，各處理的平均發芽時間存在差異，在扦插后33～51 d，表現為Ax1

2.3 不同處理扦插繁殖川滇槲蕨的展葉時間

觀察發現，不同處理扦插繁殖川滇槲蕨各處理的平均展葉時間在扦插后52～78 d，表現為Ax1

3 討論

川滇槲蕨既適合附生于巖石上，又適合附生于樹干上，是林藥經濟產業發展和喀斯特地區石漠化治理的理想藥用植物之一。貴州被稱為中國的喀斯特省，其生態脆弱、石漠化嚴重。近些年各類生態工程的推廣和實施，我國喀斯特石漠化地區的森林資源不斷增加，石漠化現象在一定程度上得到緩解，但其治理的過程依舊任重道遠[9]。貴州省“十四五”規劃綱要指出，要發揮森林生態資源優勢，大力發展林果、林禽、林菌、林藥及林蜂等林下經濟和特色林業產業，實現鞏固拓展脫貧攻堅成果同鄉村振興有效銜接，林下種植經濟具有投入少、見效快、易操作和潛力大等優點。貴州森林面積達0.108億hm2，森林覆蓋率達61.51%，是耕地面積的2倍以上，為發展林下經濟提供了無限空間[10]。發展川滇槲蕨林下種植產業，不僅能在一定程度上緩解骨碎補藥材資源匱乏現狀，同時能提高石漠化地區的植被覆蓋率，加強水土保持，治理石漠化，還能帶來可觀的經濟效益，促進石漠化地區社會經濟發展。貴州黔東南州從江縣等地雖有少量林下骨碎補藥材種植，但栽培繁殖技術手段相對滯后，存在缺乏優質種子、種苗等問題，嚴重制約骨碎補的產業發展。種苗是林下藥材栽培生產的基礎，良好的種質資源是骨碎補產量和品質形成的前提，因此，對川滇槲蕨扦插繁殖育苗技術研究十分必要。

黃春江等[11]通過灰色關聯度法和逼近理想排序法評價附生于巖石與樹干2種不同生境骨碎補的質量得出，樹干生境骨碎補質量高于巖石生境。在前期調查中發現，附生于巖石上的川滇槲蕨較附生于樹干者根莖發達、粗壯。據此推斷，川滇槲蕨根狀莖生長與鈣質息息相關，含有充足水分與透氣性的土質能保證其質量。選用土質與砂石(3∶1)混合基質，綜合2種生境各自的優勢，對川滇槲蕨的根狀莖扦插繁殖進行研究，結果表明，成活率等指標均以含有砂石的2種基質明顯優于不含砂石的基質。

川滇槲蕨以根狀莖入藥，且根狀莖呈橫走方式附生。傳統扦插方法多為斜插或直插方式，考慮到川滇槲蕨根狀莖特殊的生長習性，該研究將川滇槲蕨根狀莖分為頂端與中端，按斜插和平鋪2種扦插方式進行扦插繁殖。研究結果表明，頂端插穗成活率明顯優于中端插穗；頂端插穗采用斜插方式稍微優于平鋪方式，中端插穗以平鋪方式扦插的插穗各方面指標均明顯優于斜插方式。筆者認為，頂端插穗分裂旺盛是頂端插穗表現良好的一個重要因素，頂端插穗光滑無根系，吸水主要靠切面，所以，在頂端插穗中斜插方式較平鋪方式稍好；在中端插穗中平鋪方式又優于斜插方式，可能是中端插穗中尚存根系的切口，平鋪方式可讓更多殘留切口吸收水分。

目前，川滇槲蕨僅作為中藥材骨碎補的地方習用品和混用品，尚未收載于中國藥典和地方標準。根據《中國中藥資源志要》《貴州藥用蕨類植物》《貴州中草藥資源圖典》等記載，川滇槲蕨與槲蕨的功能主治與化學成分等比較相似，但其能否作為常用中藥材骨碎補的來源之一，尚需進一步從臨床療效和藥理藥效等方面開展深入研究。

4 結論

川滇槲蕨的扦插繁殖基質以腐殖土∶砂石為3∶1最優；以此為基質，頂端插穗采用斜插或平鋪方式扦插繁殖均全部成活，其中以頂端插穗斜插方式扦插各項指標均最優，扦插后9 d開始發芽、20 d開始展葉，平均發芽時間為扦插后33 d，展葉時間為扦插后52 d；中端插穗以平鋪方式扦插成活率較高，為96%。表明，選擇頂端插穗進行扦插繁殖最優，若要選用中端插穗，應采用平鋪方式進行扦插，所用基質應選取透氣性好，且含有一定鈣性的腐殖土與砂石(3∶1)混合土質，為保證其品質，所含砂石不易過多。綜上，川滇槲蕨最適扦插繁殖方式為頂端插穗+斜插方式+腐殖土∶砂石為3∶1的基質。此繁殖方式可為其后期開展人工規模化種植提供參考，同時對緩解骨碎補藥材資源匱乏，發展林下種植產業，治理喀斯特地區石漠化等均具有積極作用。