液相色譜法測定半成品泡菜中乙二胺四乙酸二鈉殘留量

周至均，王麗蘭，羅紅梅，王莎莎

（國家泡菜質(zhì)檢中心（四川），四川眉山 620010）

我國是泡菜生產(chǎn)加工大國，泡菜也是我國傳統(tǒng)的消費食品，產(chǎn)品種類多，消費量較大[1]。但由于土壤污染，蔬菜鉛含量較高，泡菜企業(yè)在生產(chǎn)加工過程中，加人一定量的乙二胺四乙酸二鈉，不僅可以降低泡菜中的鉛含量，其還具有抗氧化和防腐功能，具有良好的抗菌活性，可以防止食品褐變。《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》（GB 2760—2014）規(guī)定在腌漬蔬菜中乙二胺四乙酸二鈉的最大使用量為0.25 g·kg-1，但泡菜企業(yè)在生產(chǎn)加工過程中，由于EDTA二鈉混合不均、加入量不同等因素，在經(jīng)過脫鉛工藝后，可能會造成泡菜中EDTA二鈉殘留量超標[2]。現(xiàn)有檢測標準只適用于成品樣品，而半成品泡菜與成品泡菜在很多方面都有所差異[3-4]。因此，本文建立了一種操作簡單且成本低的半成品泡菜中EDTA二鈉含量的檢測方法，可用于企業(yè)在生產(chǎn)過程中對半成品泡菜中EDTA二鈉含量進行快速檢測。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

乙二胺四乙酸二鈉（EDTA二鈉），純度：99.97%，標準物質(zhì)GBW(E)060311；甲醇，色譜純；三氯化鐵，四丁基氫氧化銨，實驗用水為電阻率18.2 MΩ·cm的超純水；0.45 μm水系微孔濾膜。

1.2 儀器與設備

液相色譜儀Agilent1260（配DAD檢測器），美國安捷倫科技公司；漩渦混合器，上海谷寧儀器有限公司；超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；萬分之一電子天平ML 104T，梅特勒-托利多儀器有限公司。

1.3 溶液配制

三氯化鐵溶液：稱取0.54 g三氯化鐵溶于90 mL水中，用純水溶解并定容至100 mL容量瓶中混勻。

四丁基氫氧化銨溶液：吸取40%四丁基氫氧化銨水溶液3.25 mL，置于燒杯中，加水130 mL，再用甲酸稀溶液將pH調(diào)至3.30，將此溶液轉移至1 000 mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，脫氣后備用。

1.4 實驗方法

1.4.1 樣品預處理

從腌制池中取出通過加入EDTA處理過的半成品泡菜樣品，按照泡菜加工工藝用自來水沖洗2 min，瀝干后將蔬菜放入空燒杯中，作為待測樣品。取有代表性樣品約500 g用組織搗碎機搗碎，裝入一次性密封袋中保存。稱取約5.0 g樣品于50 mL具塞玻璃管中，加入20 mL蒸餾水、1 mL三氯化鐵溶液，混勻后于超聲波中超聲20 min，使之充分衍生化。冷卻至室溫后，用蒸餾水定容至刻度混勻。將衍生化樣品溶液在旋渦混合器上混合2 min，在離心機中以4 000 r·min-1離心5 min。取上清液過0.45 μm水系濾膜后供液相色譜儀測定[5]。

1.4.2 標準曲線配制

準確稱取0.100 0 g乙二胺四乙酸二鈉（EDTA二鈉），用純水溶解并定容至100 mL容量瓶中，得到EDTA二鈉標準中間溶液（1 mg·mL-1）；分別吸取EDTA二鈉標準中間溶液0 mL、0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL和4.00 mL于50 mL容量瓶中，分別加入1 mL三氯化鐵溶液，用蒸餾水定容至刻度，搖勻后，即得到EDTA二鈉標準系列溶液衍生物，同時做標液空白，分別含EDTA二鈉0 μg·mL-1、5.0 μg·mL-1、10.0 μg·mL-1、20.0 μg·mL-1、40.0 μg·mL-1和 80.0 μg·mL-1，臨用時配制。

1.4.3 色譜條件

色譜柱：迪馬C18柱（250 mm×4.6 mm，粒度5.0 μm）；泵：四元泵；流動相：四丁基氫氧化銨水溶液∶甲醇=90∶10；流速：1 mL·min-1；柱溫：35 ℃；檢測器：二極管陣列檢測器，檢測波長260 nm；進樣量：20 μL。

2 結果與分析

2.1 檢測波長的選擇

在190～400 nm處對EDTA二鈉標準系列溶液衍生物進行掃描，結果顯示在250～260 nm處有最大吸收，如圖1所示。為了減少干擾雜峰，選擇波長為260 nm進行檢測。

圖1 EDTA二鈉標準系列溶液衍生物光譜圖

2.2 色譜圖

將配制好的EDTA二鈉標準系列溶液衍生物和樣品預處理后得到的濾液在上述1.4.3條件下測定，得到EDTA二鈉標準溶液衍生物色譜圖（圖2）和樣品中EDTA二鈉衍生物色譜圖（圖3），走樣時間22 min，標準品保留時間在19 min左右。

圖2 EDTA二鈉標準溶液衍生物色譜圖

圖3 樣品中EDTA二鈉衍生物色譜圖

2.3 線性范圍和檢測限

在選定的色譜條件下，進樣20 μL，以EDTA二鈉質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。回歸方程為y=6.830 2x-0.198 3，相關系數(shù)R2=1，說明在 0 ～ 80.0 μg·mL-1存在良好線性關系，根據(jù)信號與噪聲比值等于10時作為定量檢出限，得出本方法定量檢出限為20 mg·kg-1。

2.4 方法學驗證實驗

選擇半成品泡青菜為樣品，稱取樣品后精密添加3種濃度標準品，分別按照1.4.1進行樣品預處理后，按1.4.3條件測定。加標回收率和相對標準偏差見表1。

表1 不同加標水平條件下的回收率與精密度（n=6）

2.5 脫鉛后樣品EDTA二鈉殘留量

稱取脫鉛后的半成品泡菜樣品5 g左右，以相同的儀器條件測定脫鉛后樣品中EDTA二鈉殘留量。經(jīng)檢測，處理后的青菜半成品EDTA二鈉殘留量為0.118 g kg-1，豇豆半成品EDTA二鈉殘留量為0.082 g·kg-1，檢測結果較為穩(wěn)定。

3 結論

加入適量食品級乙二胺四乙酸二鈉對半成品泡菜進行鉛處理后，采用液相色譜法測定脫鉛后樣品中EDTA二鈉殘留量，該法操作簡單、快速，具有準確度高和精密度好等優(yōu)點，可為半成品泡菜中EDTA二鈉殘留量的檢測提供參考。