生姜多糖對雛雞外周血淋巴細胞體外增殖的影響

劉 迎，張雨晴，郝星惠，何 欣，李樹鵬

（1.河北交通職業技術學院 050091；2.河北農業大學動物醫學院 071001）

生姜是多年生草本姜（Zingiber officinale Rose）的根莖，因其營養豐富，口味獨特，在我國有較大的種植面積。生姜富含多種化學物質，已有文獻記載的成分超過200 種，其中糖類約占8.5%，是含量最高的活性成分[1-3]。近年來，植物多糖已引起人們的廣泛注意，因大多具有良好的免疫增強效果、天然無污染、低毒副作用等，被視為“替抗”的最佳物質，在生產中的應用越來越廣泛[4-6]。

目前對生姜中活性多糖成分的抗氧化作用有少量報道[7,8]，但對其增強動物免疫機能的研究鮮見。本研究將生姜多糖應用于雛雞日糧中，觀察對外周血CD4+和CD8+T 淋巴細胞亞群的影響，為其進一步在動物生產中的應用提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及分組

1 日齡海蘭蛋雛雞（公雛）共計300 只，購自易縣永合養雞場。隨機分為5 組，每組60 只，組內設6 個重復。對照組雛雞飼喂基礎日糧（組成及營養水平見表1），生姜多糖處理組分別在基礎日糧中拌料添加0.05%、0.1%、0.15%和0.2%的生姜多糖。

試驗為期42d。全期采用分籠飼養，采用人工光照和自然光照相結合的養殖方式，機械通風加自然通風，自由采食和飲水，日常管理和疫苗免疫按雞場常規進行。

1.2 試驗藥物

生姜多糖制備：生姜切片并干燥，粉碎過60 目篩，水提醇沉法提取，柱層析純化得到生姜粗多糖，蒽酮-硫酸法測定多糖含量為28.57%，冰箱冷藏保存。

1.3 主要試劑和儀器

CD4+和CD8+鼠抗雞單克隆抗體（購自Southern Biotech 公司）；淋巴細胞分離液（索來寶科技有限公司）；流式細胞儀(EPICS XL 型，美國Bechman 公司)。

1.4 試驗方法

試驗開始后于7、14、21、28、35 和42 d 每組選擇12 只雛雞（每個重復隨機選取2 只）心臟采血，肝素抗凝，分離制備淋巴細胞懸液，用于檢測外周血CD4+和CD8+T 淋巴細胞亞群數量。

外周血CD4+和CD8+T 淋巴細胞計數采用流式細胞術[9]。

1.5 數據處理

結果以±SD 表示，應用SPSS19.0 軟件進行單因素方差分析，LSD 法進行組間多重比較。P ≤0.05 表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1 雛雞日糧添加GP 外周血CD4+T 淋巴細胞亞群計數

GP 對雛雞外周血CD4+T 淋巴細胞亞群的計數結果見表2 和圖1。與對照組相比，添加GP 7d 后4 個GP 組雛雞外周血CD4+T 淋巴細胞數量均有增加，但差異不顯著（P＞0.05）；14d 后雛雞外周血CD4+T 淋巴細胞數量增加幅度明顯提高。在14d 時，GP 添加量只在超過0.1%時，雛雞外周血CD4+T 淋巴細胞數量增加差異顯著（P ≤0.05）；21d 及之后，GP 添加量降到0.05%也能使雛雞外周血CD4+T 淋巴細胞數量顯著增加（P ≤0.05）。

圖1 雛雞外周血CD4+T 淋巴細胞計數（%）

表2 雛雞外周血CD4+T 淋巴細胞計數 (%)

對4 個GP 添加劑量雛雞外周血CD4+T 淋巴細胞數量進行比較，在28d 及以前，隨GP 劑量增加，雛雞外周血CD4+T 淋巴細胞數量有提高趨勢但差異不顯著（P＞0.05）；而35d 和42d 時，0.15 和0.2% 組 與0.05% 組 雛 雞 外 周 血CD4+T 淋巴細胞數量差異顯著（P ≤0.05），其余差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 雛雞日糧添加GP 外周血CD8+T 淋巴細胞亞群計數結果

由表3 和圖2 可見，4 個劑量GP 均可明顯提高雛雞外周血CD8+T 淋巴細胞數量，且隨添加時間和劑量增加其提高效果逐漸加強。7d 時，僅0.15 和0.2% GP 添加組與對照組相比，雛雞外周血CD8+T 淋巴細胞數量有顯著提高（P ≤0.05）；而14d 時，則是0.1、0.15 和0.2% 3 個GP 劑量組雛雞外周血CD8+T 淋巴細胞數量與對照組相比有顯著提高（P ≤0.05）；21d 及之后，4 個GP 劑量均能使得雛雞外周血CD8+T 淋巴細胞數量顯著增加（P ≤0.05）。

表3 雛雞外周血CD8+T 淋巴細胞亞群計數(%)

圖2 雛雞外周血CD8+T 淋巴細胞亞群計數（%）

比較4 個劑量GP 作用效果發現，在28d 之前，隨GP 劑量增加，雛雞外周血CD8+T 淋巴細胞數量逐漸增加，但僅0.05與0.2%劑量組之間差異顯著（P ≤0.05）；而35d 和42d 時，0.05%與0.15、0.2%組之間以及0.1%與0.2%組之間雛雞外周血CD8+T 淋巴細胞數量存在顯著差異（P ≤0.05），其余各劑量組則差異不顯著（P＞0.05）。

2.3 對雛雞外周血T 淋巴細胞亞群CD4+/CD8+比值的影響

由表4 可知，與對照組相比，4 個GP 劑量組雛雞外周血CD4+/CD8+比值均有所降低，但未達到差異顯著（P＞0.05），且隨GP 添加劑量增加，CD4+/CD8+比值有下降趨勢。

表4 雛雞外周血T 淋巴細胞亞群CD4+/CD8+比值

3 討論

當機體遭受外來病原入侵時，會誘導機體功能性T 淋巴細胞的數量及活性發生巨大的變化[10]，在其中CD4+和CD8+T 淋巴細胞是參與對抗原識別的重要細胞[11]，此外，它們還具有刺激B 淋巴細胞活化與增殖、分泌多種免疫活性因子、介導細胞毒殺傷等作用、增強機體特異性免疫應答與抗體產生[12,13]，因此，CD4+和CD8+T 淋巴細胞亞群在血液中的分布，是臨床上一個重要的免疫狀態檢測指標[14]。

本試驗中雛雞飼料添加生姜多糖后，雛雞外周血CD4+和CD8+T 淋巴細胞亞群數量均有不同程度增加，表明生姜多糖在試驗期內可有效提高雛雞機體的免疫功能，但量效關系不明顯，隨著GP 添加劑量增加各組雛雞CD4+和CD8+T 淋巴細胞亞群數量雖有升高趨勢，但未達顯著程度。

另外，臨床上CD4+/CD8+比值往往在一個正常范圍變動，偏離此范圍常反映機體的免疫機能不正常[15]，尤其CD4+/CD8+比值偏大多預示機體免疫機能可能失調，如比值大于2 時臨床上稱為CD4+/CD8+值倒置，是機體免疫機能紊亂的重要特征[16]。對照組雛雞7d 時CD4+/CD8+比值較高，可能與免疫器官發育不健全有關，隨日齡增長其CD4+/CD8+比值也逐漸下降，表明雛雞免疫系統發育速度加快，機體對疾病的抵抗力逐漸增強。而飼料中添加生姜多糖后，在一定程度上降低了雛雞外周血CD4+/CD8+比值，表明生姜多糖可能減輕因免疫機能不足和紊亂等造成的雛雞死淘情況。

綜上所述，生姜多糖在雛雞飼料中的使用劑量為0.05%，使用21d 后即可顯著上調雛雞外周血CD4+和CD8+T 淋巴細胞亞群數量，降低了CD4+/CD8+比值，可提高動物機體對抗原的免疫應答，增強機體的免疫力和抵抗力。