齦溝液中miR-146a、miR-21表達水平與種植體周圍炎的相關性研究

鐘秋 陳艷莉 冷建瓊 周吉

種植體周圍炎是因口腔細菌微生物導致的組織炎癥，是致炎因子引起的破骨細胞活化導致的牙槽骨吸收平衡遭到破壞，可導致種植體松動脫落，進而影響種植效果[1，2]。因此，及早發現種植體周圍炎具有重要意義。miR-146a是炎癥因子信號傳導的重要物質，而miR-21可通過多種途徑參與調控細胞分化和更新，參與牙周組織修復，且二者均參與牙周炎等慢性炎癥疾病發展過程，但有關其在種植體周圍炎中的作用機制報道較少[3，4]。本研究以我院108例行種植體修復患者為研究對象，檢測其齦溝液中miR-146a、miR-21水平，分析其表達水平與種植體周圍炎的關系，旨在為臨床種植體周圍炎預防及治療提供參考，以提高牙種植修復效果。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取我院2019年7月～2020年7月收治的進行牙種植修復的108例患者（共108枚）為研究對象，年齡25～78歲，平均（48.56±2.43）歲；其中男62例，女46例。根據種植體檢測指標情況將患者分為健康種植體組48例（48枚）、種植體周圍炎組60例（60枚）。其中健康種植體組中男30例，女18例，年齡23～76歲，平均（47.83±2.35）歲；種植體周圍炎組中男32例，女28例，年齡23～78歲，平均（48.72±2.76）歲。選取同期體檢牙齦健康的75例健康者作為對照組，年齡23～77歲，平均（47.32±2.51）歲；其中男40例，女35例。三組一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

納入標準：①口腔情況良好，首次進行種植牙修復術；②種植6個月后進行相關檢查獲取牙齦完整數據，X線片顯示種植體骨組織破壞程度，輕度骨吸收，即出現骨喪失則為種植體周圍炎；③參照美國牙周病協會制定的牙周病新分類方法《種植義齒》[5]中相關標準確診為種植體周圍炎；健康種植體診斷標準為：探診無出血、化膿、疼痛等情況，且無軟組織增生；④患者知情且簽署知情同意書。排除標準：①合并全身系統性疾病；②進入本研究前3個月服用過抗生素類藥物；③合并慢性咽炎、扁桃體炎等口腔局部炎癥疾病；④妊娠期及哺乳期婦女。本研究獲我院倫理研究委員會批準（批號：2022-033-01）。

1.2 樣本采集 以清水漱口后使用無菌干棉球擦干牙面，隔濕取樣，用探針去除菌斑，然后將濾紙條插入牙齦保持60s，取出濾紙，測量浸潤長度，并將浸潤部分裝入抗凝管內，震蕩1h，以4℃ 1000r/min離心10min，取上清液置于-70℃冰箱保存待測。

1.3 臨床指標測量 用牙簽探診檢查所有種植體的近側、近中、遠中頰側、舌側4個位點的探診深度數據結果，取其平均值作為最終結果。使用專用的牙周探針所測得的齦袋或牙周袋深度，是齦緣至袋底或齦溝底的距離，即為探診深度。根據齦溝出血指數評分標準對所有種植體齦溝出血情況進行評估：0分表示牙齦健康不出血；1分表示牙齦輕度炎癥；2分表示牙齦輕度炎癥且探診后點狀出血；3分表示牙齦中度炎癥，探診后血滯于齦溝內；4分表示牙齦重度炎癥，探診后血溢出齦溝；5分表示探診后牙齦出血。計算齦溝液量。采用CT檢測患者牙槽嵴高度，即種植體根尖部到種植體頸部標志點間垂直距離，若骨高度變低，則該部分為骨吸收量。

1.4 齦溝液中miR-146a與miR-21水平檢測 取齦溝液待測樣品于室溫解凍后，采用實時熒光定量復擴增法（qRT-PCR）檢測齦溝液中miR-146a、miR-21水平。使用miRNA提取試劑盒（賽默飛世爾科技有限公司）提取總miRNA，然后使用反轉錄酶試劑盒（上?；茖嶒炂鞑挠邢薰荆iRNA反轉錄成cDNA，miScript SYBR GreenPCR Kit（上海力敏實業有限公司）進行PCR，反應條件：95℃ 15s，95℃50s，60℃ 15s，共40個循環。以內源性U6小核RNA進行標準化，正向引物5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'；反向引物5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。通過2-ΔΔCT方法計算miR-146a、miR-21相對表達水平。

1.5 臨床指標比較 檢查并測量所有種植體的探診深度、齦溝出血指數、齦溝液量、骨吸收量，然后進行組間分析比較。

1.6 統計學方法 采用SPSS 19.0軟件統計數據，計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗，多組比較采用F檢驗；相關性分析采用Pearson直線分析法，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 臨床指標比較 種植體周圍炎組齦溝出血指數、探診深度、齦溝液量、骨吸收量均顯著高于健康種植體組（t=17.848、8.641、18.918、15.785，P＜0.05）和對照組（t=21.321、11.501、23.535、30.188，P＜0.05），健康種植體組亦高于對照組（t=3.872、2.178、3.858、9.934，P＜0.05），且組間比較差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

2.2 齦溝液中miR-146a與miR-21水平比較 種植體周圍炎組齦溝液中miR-146a、miR-21水平均顯著高于健康種植體組（t=9.768、7.952，P＜0.05）和對照組（t=20.310、20.657，P＜0.05），健康種植體組亦高于對照組（t=15.646、19.662，P＜0.05），且組間比較差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表1 3組臨床指標比較（±s）

表1 3組臨床指標比較（±s）

注：與對照組比較，①P＜0.05；與健康種植體組比較，②P＜0.05

組別 齦溝出血指數 探診深度（mm） 齦溝液量（μl） 骨吸收量（mm）種植體周圍炎組（n=60） 3.24±1.03①② 4.23±1.15①② 1.95±0.36①② 2.71±0.45①②健康種植體組（n=48） 0.79±0.24① 2.72±0.64① 0.87±0.23① 1.48±0.36①對照組（n=75） 0.65±0.18 2.51±0.48 0.72±0.22 1.03±0.14 F 366.916 82.854 342.386 351.916 P 0.000 0.000 0.000 0.000

表2 齦溝液中miR-146a與miR-21水平比較（±s）

表2 齦溝液中miR-146a與miR-21水平比較（±s）

注：與對照組比較，①P＜0.05；與健康種植體組比較，②P＜0.05

組別 miR-146a miR-21種植體周圍炎組（n=60） 3.86±1.15①② 3.65±1.12①②健康種植體組（n=48） 2.21±0.56① 2.34±0.58①對照組（n=75） 1.01±0.32 0.89±0.24 F 242.797 247.640 P 0.000 0.000

2.3 齦溝液中miR-146a、miR-21水平與臨床指標的關系 齦溝液中miR-146a與miR-21水平與齦溝出血指數、探診深度、骨吸收量呈正相關（P＜0.05），與齦溝液量無關（P＞0.05），見表3。

表3 齦溝液中miR-146a、miR-21水平與臨床指標的關系

3 討論

由于種植體周圍組織代謝與免疫能力降低，當口腔衛生不佳時易出現種植體周圍炎。據相關研究表明，種植體周圍炎發生率高達20%左右，其可導致種植體脫落、種植術失敗，因此明確種植體齦溝液中相關指標與種植體周圍炎臨床指標的關系，對于預防種植體周圍炎發生及牙種植成功具有積極意義[6]。本研究顯示，種植體周圍炎組患者齦溝液中miR-146a與miR-21水平呈高表達，其表達水平與種植體周圍炎臨床指標呈正相關，對于評估種植體周圍炎的發生具有較好價值。

本研究結果顯示，種植體周圍炎組齦溝出血指數、探診深度、齦溝液量、骨吸收量均顯著高于健康種植體組和對照組，說明齦溝出血指數、探診深度、齦溝液量可反映種植體周圍炎活動狀況及炎癥程度，是種植體周圍炎炎癥進展及牙周組織損傷程度的重要評估指標[7，8]。骨吸收量是骨重建的重要參考指標，骨吸收增加會使牙體穩定性下降。探診深度表示牙周袋深度，在炎癥牙齦中深度更深，是評估牙周健康狀況的重要臨床指標之一，組織有炎癥時牙齦探針可穿透結合上皮進入結締組織內，而健康牙齦則中止于結合上皮，因此在炎癥牙齦中深度更深。齦溝液量水平可反映牙周組織炎癥情況。齦溝出血指數是評估牙齦炎癥活動期狀況的臨床指標，是評估牙周炎癥的重要指標之一[9，10]。

通過檢測齦溝液中miR-146a與miR-21水平發現，種植體周圍炎組齦溝液中miR-146a、miR-21水平均顯著高于健康種植體組和對照組，說明miR-146a與miR-21可能與種植體炎癥反應有關。對齦溝液中miR-146a、miR-21水平與種植體牙周炎癥臨床指標進行Pearson相關性分析發現，miR-146a及miR-21水平與齦溝出血指數、探診深度、骨吸收量呈正相關，可作為評估種植體周圍組織健康狀態的重要指標之一。究其原因為微小RNA（microRNA，miRNA）是一類非編碼的小分子RNA，參與細胞多種生物學過程，在慢性炎癥疾病中表達異 常[11，12]。miR-146包 括miR-146a和miR-146b兩個亞型，miR-146a是重要的免疫調控因子，在慢性炎性疾病中呈高表達，可能與介導炎癥因子信號傳導，發揮免疫細胞分化及免疫調節功能，參與慢性炎癥反應過程有關[13，14]。動物實驗表明，miR-146a在牙齦炎性組織中呈較高表達，其可促進巨噬細胞活性增強，介導炎癥因子釋放增加，進而參與炎癥反應調節過程，可能是導致牙周炎癥發展的重要原因[15，16]。miR-21是參與細胞增殖、分化的重要的miRNA，miR-21可通過調控RunX2蛋白，發揮對成骨細胞的調節作用，可反映成骨細胞轉化趨勢。牙周干細胞具有更新、分化和免疫調節特性，在維持牙周環境穩定中發揮重要作用。牙周有炎癥時炎性因子大量分泌，促進破骨細胞活化，導致骨吸收失衡，進而影響種植體穩定性[17，18]。較高水平的miR-21可刺激超氧化物歧化酶分泌，促進巨噬細胞分泌，活性增加，與超氧化物歧化酶水平呈正相關[19，20]。也有研究指出，miR-21可通過促進間充質干細胞增殖，促進成骨分化，進而參與牙周組織損失、修復過程，其水平升高與牙周組織損傷程度密切相關[21]。通過檢測齦溝液中miR-146a與miR-21水平可了解牙周組織炎癥活動狀況及牙周組織損傷情況，進而為種植體周圍炎評估提供參考。對種植體周圍炎癥組織進行有效清除，以骨替代材料填充引導骨組織再生，促進新骨形成，進而提高種植成功率[22]。但吸煙、飲酒、不良口腔衛生習慣等會影響種植體組織修復情況，因此，miR-146a與miR-21在種植體周圍炎中的作用機制還需進一步研究，進而為臨床種植成功率的提高提供參考。

綜上所述，種植體周圍炎患者齦溝液中miR-146a、miR-21水平顯著升高，其可為預測種植體周圍炎發生提供依據，通過預防種植體周圍炎發生，以提高牙種植效果。