不同提取方法下蕪菁功能成分及抗氧化活性測定

于翠翠，張文會，陳 鋒

（西藏自治區農牧科學院農產品開發與食品科學研究所，西藏 拉薩 850000）

西藏蕪菁（Brassica rapa） 是十字花科（Cruciferae） 蕓苔屬 （Brassica） 二年生草本植物[1]，是藏區特有的高寒低氧的惡劣環境下孕育出來的藥、食、飼三用植物[2]。藏醫學名著《四部醫典》記載，蕪菁具有味甘性溫、清熱解毒、滋補、增氧的功能[3]。藏醫使用時常將其根洗凈、切片、煎煮濃縮成膏狀入藥作為抗缺氧的食物。《四川省藏藥材標準》記載蕪菁塊莖中含有豐富的蛋白質、糖類、酸類、礦物質、維生素等[4]。現代研究表明，蕪菁功能性組分主要含有多糖類[5]、皂苷類[6]、黃酮[7]、三萜類[8]及有機酸等；具有抗氧化、降血脂、降血糖、抗疲勞及耐缺氧等功效，為開發蕪菁保健食品提供了理論依據[9]。主要探究3 種提取方法下蕪菁中總黃酮、總皂苷及三萜類物質含量變化及其抗氧化能力，為后續蕪菁開發利用提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 原料與試劑

蕪菁粉，采摘西藏自治區拉薩市；薯蕷皂苷標準品，上海源葉生物科技有限公司提供；蘆丁標準品，國藥集團化學試劑有限公司提供；齊墩果酸標準品，上海安普實驗科技股份有限公司提供；DPPH，梯希愛化成工業發展有限公司提供；總抗氧化能力（T-AOC） 試劑盒，南京建成生物研究所提供；無水乙醇、纖維素酶、果膠酶、蛋白酶；亞硝酸鈉、氯化鋁、香草醛、高氯酸、硫酸亞鐵、水楊酸、過氧化氫等，均為國產分析純。

1.2 儀器與設備

恒溫水浴鍋，常州國語儀器制造有限公司產品；酶標儀，北京凱奧科技發展有限公司產品；超聲波清洗機，昆山禾創超聲儀器有限公司產品；電熱恒溫鼓風干燥箱，上海齊欣科學儀器有限公司產品；紫外分光光度計，上海欣茂儀器有限公司產品。

1.3 試驗方法

1.3.1 樣品制備

芫菁根經清洗、除雜后切片烘干，粉碎過80 目篩，按照下述方法進行提取。

1.3.2 提取方法

①水提法：準確稱取蕪菁干粉5 g，按1∶30 料液比加入純水，在50 ℃條件下提取5 h；②超聲-醇提法：準確稱取蕪菁干粉5 g，按1∶30 料液比加入70%乙醇，在超聲400 W 條件下65 ℃提取30 min；③酶法：準確稱取蕪菁干粉5 g，按1∶30 液料比加入純水，加入由纖維素酶、果膠酶（質量比2∶1），酶添加量為2%，調節pH 值為7 后在50 ℃條件下提取3 h；全部提取液經過濾紙除雜后備用。

1.3.3 蕪菁提取液活性物質含量測定

（1） 總黃酮含量測定[10]。準確稱取蘆丁標準品1 mg，置于10 mL 容量瓶中，加乙醇定容至刻度線，得質量濃度0.1 mg/mL 的蘆丁標準液。精確吸取標準品 0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL 于 10 mL 離心管中，加入5%亞硝酸鈉0.15 mL 混勻放置6 min，加入10%硝酸鋁0.15 mL 混勻放置6 min，最后加入4%氫氧化鈉2 mL，用乙醇定容至5 mL，在波長510 nm下測定吸光度（OD51）0[11]。以蘆丁質量為橫坐標（X），以OD510為縱坐標（A），繪制標準曲線，得回歸方程為A=6.308 6X+0.006 3，R2=0.997 3；標準曲線在蘆丁質量為0.05～0.25 mg 范圍內線性關系良好。

取2 mL 蕪菁提取液，取按照蘆丁標準曲線測定方法測定黃酮類質量濃度，計算黃酮質量濃度，并根據以下公式計算黃酮得率，重復3 次計算平均值。

式中：C——根據標準曲線計算出反應液的黃酮質量濃度，mg/mL；

V——反應液體積；

V2——提取液總體積，mL；

V1——待測液移取的體積，mL；

M——稱取的蕪菁質量，g。

（2） 總皂苷質量濃度測定[12]。準確稱取薯蕷皂苷標準品10 mg，置于25 mL 容量瓶中，加甲醇定容至刻度線，得質量濃度0.4 mg/mL 的薯蕷皂苷標準液。精確吸取標準品0，0.02，0.04，0.06，0.08，0.10 mL于1.5 mL 離心管中，水浴65 ℃揮干溶劑后；加入質量分數5%香草醛冰醋酸（新鮮配制） 0.04 mL 和高氯酸0.16 mL，于65 ℃水浴中加熱15 min，冷卻后加冰醋酸0.5 mL，于波長540 nm處測定吸光度（OD54）0[11]。以薯蕷皂苷質量為橫坐標（X），以OD540為縱坐標（A），繪制標準曲線，得回歸方程為A=7.759 1X，R2=0.997 5；標準曲線在薯蕷皂苷質量為0.008～0.040 mg 范圍內線性關系良好。取蕪菁提取液1 mL用無水乙醇稀釋至15 mL，取稀釋后液體0.1 mL 取按照薯蕷皂苷標準曲線測定方法測定皂苷含量，計算皂苷得率。重復3 次計算平均值。

式中：C——芫根總皂苷質量，g；

M——原料質量，g；

N——提取液稀釋倍數。

取蕪菁提取液1 mL 用無水乙醇定容至5 mL，取定容后液體0.2 mL 取按照齊墩果酸標準曲線測定方法測定三萜類含量，計算三萜類得率。重復3 次計算平均值。

式中：C——根據標準曲線計算出反應液的三萜質量濃度，mg/mL；

V——反應液體積；

V2——提取液總體積，mL；

V1——待測液移取的體積，mL；

M——稱取的蕪菁質量，g。

1.3.4 蕪菁提取物體外抗氧化活性試驗

在國際社會不可再生能源日趨枯竭和節能環保理念愈發深入人心的當下，畢總認為在中國市場中雖然“油改電、鋰電化”已推行了一段時間，但進程仍需加快和加深，在叉車和電池技術上有著自己獨特優勢的比亞迪叉車，仍繼續前進，為“油改電、鋰電化”做出貢獻。

（1） DPPH 自由基清除能力測定[13]。用無水乙醇配制0.1 mml/L DPPH 溶液，樣品組：取蕪菁提取液1 mL 分別加入DPPH 溶液2 mL，為A1；空白組：取DPPH 溶液2 mL 加入純水1 mL，為A0；干擾組：取不同濃度蕪菁提取液1 mL 分別加入純水2 mL，為A2；搖勻后在室溫條件下避光靜置15 min，在波長517 nm 處檢測吸光度，計算DPPH 自由基清除率。

（2） 總抗氧化能力測定。采用南京建成生物有限公司試劑盒，按照其方法取提取液0.1 mL 進行總抗氧化能力的測定，并按照公式進行總抗氧能力的計算。

式中：A0——對照OD 值；

A1——測定OD 值。

1.3.5 羥自由基清除能力的測定[14]

在比色管中依次加入濃度為6 mmol/L 的硫酸亞鐵溶液2 mL，濃度為6 mmol/L 水楊酸溶液2 mL，濃度為6 mmo/L 過氧化氫溶液2 mL 后搖勻，樣品組加入1 mL 提取液，為A1；空白組加入1 mL 純水代替提取液，為A0；干擾組以2 mL 純水代替過氧化氫，為A2。

2 結果與分析

2.1 3 種提取方法下活性物質含量測定結果

3 種提取方法下3 種活性物質含量見表1。

表1 3 種提取方法下3 種活性物質含量/ %

由表1 可知，超聲- 醇提法下總黃酮含量最高為0.173%，與水法和酶法提取總黃酮含量對比呈現顯著性增加；3 種提取方法下蕪菁總皂苷含量均存在差異顯著性，酶法提取總皂苷含量最高為14.96%，其次超聲- 醇提法下蕪菁總皂苷含量為11.83%，水提法總皂苷含量最小，為8.93%；3 種提取方法下酶法提取三萜含量最高為7.45%，超聲- 醇法提取測定總皂苷和三萜含量為6.05%，這2 種提取方法較水法提取顯著性增加。

2.2 3 種提取方法下體外抗氧化活性測定

2.2.1 不同提取方法下DPPH 自由基清除能力測定

不同提取方法下DPPH 自由基清除能力見圖1。

由圖1 可知，3 種提取方法下提取液對DPPH 自由基清除率均大于90%，水提法提取液對DPPH 自由基清除率最小為90.28%，超聲醇提法、酶法提取液對DPPH 自由基清除率分別為94.74%，95.65%，其中酶法提取液對DPPH 自由基清除率最高，3 種提取方法下DPPH 自由基清除率不存在顯著性差異。

圖1 不同提取方法下DPPH 自由基清除能力

2.2.2 不同提取方法羥基自由基清除能力測定

不同提取方法下羥基自由基清除能力見圖2。

圖2 不同提取方法下羥基自由基清除能力

由圖2 可知，超聲- 醇法提取液對羥基自由基清除率最小，為60.37%，水提法、酶法提取液對羥基自由基清除率分別為78.72%，90.40%，水提與醇提2 種方法均與超聲- 醇法提取液對羥基自由基清除率存在顯著性差異。

2.2.3 不同提取方法下總抗氧化能力測定

不同提取方法下總抗氧化能力見圖3。

圖3 不同提取方法下總抗氧化能力

由圖3 可知，超聲- 醇提法提取液總抗氧化能力最高，為11.59 U/mL；水提法、酶法提取液總抗氧化能力分別為7.4 U/mL，9.04 U/mL，超聲- 醇提法與水提法總抗氧化能力存在顯著性差異，與酶提法總抗氧化能力不存在顯著差異。

3 結論

超聲- 醇提法總黃酮得率顯著性高于其他2 種提取方法，酶法提取測定總皂苷和三萜得率均為最高，且顯著高于水法提取；酶法提取對DPPH 自由基清除和羥基自由基清除能力上最強，在對羥基自由基清除能力上與其他2 種提取方法存在顯著性差異，在總抗氧化能力上超聲- 醇提法顯著高于其他2 種提取方法；綜上所述，酶法提取可作為提取蕪菁較為方便的方法。