HPLC法測定富馬酸喹硫平片含量的不確定度分析

黃春燕，何秋云，柳賢福

(1 欽州市檢驗檢測院，廣西 欽州 535000；2 廣西中醫藥大學賽恩斯新醫藥學院，廣西 南寧 535222)

不確定度是表征合理地賦予被測量值的分散性與測量結果相聯系的參數[1]，也是一個完整的定量分析結果的重要組成部分，用于評價定量方法的可靠性及測量結果的可信程度[2]。高效液相色譜法目前已廣泛應用于藥品檢驗中的含量測定。富馬酸喹硫平片，主要成分為富馬酸喹硫平，化學名為11-{4-[2-(2-羥乙氧基)乙基-1-哌嗪基]}二苯駢(b，f)(1，4)硫氮雜卓富馬酸鹽(2∶1)，臨床用于治療精神分裂癥和雙相情感障礙的躁狂發作。本文通過測定富馬酸喹硫平片的喹硫平含量進行不確定度分析，分析測量結果的擴展不確定度，為客觀地評價富馬酸喹硫平片的含量提供科學依據。

1 儀器與試藥

LS220ASCS萬分之一電子分析天平，普利賽斯公司；HA225SM-DR十萬分之一天平,普利賽斯/上海天美天平儀器有限公司；KQ-400E超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司、容量瓶(100 mL，A級)；量瓶(50 mL，A級)；量瓶 (10 mL，A級)；移液管(1 mL，A級)；高效液相色譜儀(Agilent 1260，DAD檢測器)，安捷倫科技(中國)有限公司；富馬酸喹硫平對照品(100 mg，批號100815-201904)，中國食品藥品檢定研究院；色譜級甲醇(4L)，賽默飛世爾科技(中國)有限公司。

2 測定方法

2.1 色譜條件

Thermo BDS HYPERSIL-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；以甲醇-水-三乙胺(670∶330∶4)(用磷酸調節pH值至6.8)為流動相；檢測波長為289 nm；柱溫為40 ℃；進樣體積20 μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液

取富馬酸喹硫平對照品適量，精密稱定，置50 mL量瓶中，加流動相溶解，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，使每1 mL約含富馬酸喹硫平30 μg的溶液。

2.2.2 供試品溶液

取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取細粉適量(約相當于喹硫平25 mg)，置100 mL量瓶中，加流動相適量，超聲使富馬酸喹硫平溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液1 mL，置10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。

2.3 測定法

精密量取供試品溶液與對照品溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算，并將結果乘以0.8686。

3 測量不確定度分析

3.1 建立數學模型

外標法測定富馬酸喹硫平片含量的標示百分含量的計算公式：

根據不確定度來源，對結果有影響的因素均在上述公式中，因此，建立不確定度的數學模型。

3.2 測量不確定度分析

圖1 測量不確定度來源Fig.1 Sources of measurement uncertainty

根據溶液的配制和數學模型分析，不確定度來源如圖1所示，不確定度主要來源于對照品純度、對照品稱樣量、供試品稱樣量、供試品平均片重、對照品稀釋體積、供試品稀釋體積、對照品峰面積、供試品峰面積8個分量。按照標準不確定度分類可分為A類和B類，A類不確定度由測量數據的實驗標準偏差表征，B類不確定度采用非統計方法評定[3]。

(2)本次試驗中質量不確定度來源包括對照品稱樣量、供試品稱樣量、供試品平均片重。對照品稱量所用天平為HA225SM-DR十萬分之一天平(普利賽斯/上海天美天平儀器有限公司)，由該天平的計量檢定證書可知，示值誤差為0.04 mg(0≤m≤5 g)，供試品稱量所用天平為LS220ASCS萬分之一電子分析天平(普利賽斯公司))，由該天平的計量檢定證書可知，示值誤差為0.1 mg(0≤m≤50 g)。

(3)本次試驗中溶液定容體積的不確定度來源有對照品稀釋體積、供試品稀釋體積操作因素，主要影響這兩個因素不確定度有溫度、重復性和稀釋過程。

(6)合成不確定度評定

表1 各分量的相對標準不確定度Table 1 Relative standard uncertainty of each component

各分量獨立且不相關，則合成不確定度為：

高效液相色譜法測定富馬酸喹硫平片的富馬酸喹硫平含量為101.6%，其測量擴展不確定度 U=2×0.6654%=1.3308%(K=2)。測量不確定度報告為(101.6±1.3308)%，K=2。

4 結 論

由表1可知，試驗中的稀釋過程引入的不確定度較大，要求在試驗中盡可能一步稀釋到位，避免分人分次稀釋引入較大誤差。本次試驗考慮引入不確定度因素是過程中較為常見的，還有一些其它因素沒有納入本次不確定度考慮范圍，在以后試驗中可考慮其它因素，如高效液相色譜儀的儀器性能、流動相配制過程、色譜柱的選擇、取樣稱樣均勻性、樣品測定重復性等。在檢驗檢測實驗室中，要對每個品種、每次實驗均報告不確定度不現實，也不經濟，但是實驗室努力找出影響檢測結果的不確定度分量非常必要而且可行[10]，特別是當工作中的檢驗數據接近臨界值邊緣時，為了提高實驗數據的可靠性，降低實驗報告風險，也為客戶提供更多信息，此時出具實驗報告時附上不確定度更具說服力，本次試驗可為HPLC法測定其它藥物的含量方法提供參考。