國產(chǎn)伏立康唑調(diào)配方法優(yōu)化及其穩(wěn)定性研究

許紅，李國春，尹加珍，劉龍梅，李欣欣

作者單位：西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院靜脈用藥調(diào)配中心，四川 瀘州 646000

伏立康唑（Voriconazole）屬于第二代廣譜的三唑類抗真菌藥物，該藥物主要通過與真菌細胞色素P450結(jié)合，有效抑制真菌羊毛甾醇14α-甾醇去甲基化酶的活性，干擾細胞膜脂質(zhì)的合成，從而破壞細胞膜的功能和結(jié)構(gòu)，使細胞的通透性發(fā)生改變，最終導(dǎo)致真菌細胞死亡，以發(fā)揮對病原體感染的免疫作用。對念珠菌、曲霉菌、隱球菌及一些不常見的霉菌都有較好的抗菌活性，具有抗菌效力強、抗菌譜廣的特點［1-3］。也有文獻報道，兩性霉素B脂質(zhì)體聯(lián)合伏立康唑治療急性髓系白血病合并曲霉菌感染病人的臨床治療效果明顯優(yōu)于單獨使用伏立康唑，但應(yīng)注意控制劑量，并監(jiān)測腎功能［4］。

由于伏立康唑水溶性差，在生產(chǎn)制備時，提高其溶解度成為首要解決問題。目前臨床上常用的國產(chǎn)注射用伏立康唑有兩種，分別是以羥丙基-β-環(huán)糊精為增溶劑，和以乙醇和丙二醇的混合液為專用溶劑［5］。我院使用的注射用伏立康唑配有專用溶媒5 mL，其成分為乙醇、丙二醇各2.5 mL的混合液。其說明書要求將5 mL專用溶媒加入伏立康唑粉針劑瓶，強力振蕩藥瓶30 s，靜置30 min，再強力振蕩30 s，確認藥物粉末完全溶解，溶液澄清，無任何細小結(jié)晶。用5%葡萄糖注射液稀釋（如果病人不能耐受葡萄糖，也可以選用0.9%氯化鈉注射液）。但在靜脈用藥調(diào)配中心實際操作過程中，若調(diào)配方法操作不當，和配伍0.9%氯化鈉注射液時，仍然會產(chǎn)生配伍液渾濁，析出藥物結(jié)晶的情況；且按說明書調(diào)配方法耗時較長，不利于工作效率的提高。為此，本實驗自2020年6―9月對注射用伏立康唑的溶媒配伍和調(diào)配方法進行考察。

1 材料

1.1 儀器日本島津高效液相色譜儀（LC-20AT泵、ELSD檢測器、CTO-10AS進樣器、LcSolution色譜工作站）；AUW120D十萬分之一電子天平（日本島津）；JP全數(shù)字超聲波發(fā)生器（武漢嘉鵬電子有限公司）；GWF-8JD型智能微粒檢測儀（天津天河分析儀器有限公司）；KJ-202型振蕩器（江蘇康健醫(yī)療用品有限公司）。

1.2 試藥伏立康唑?qū)φ掌罚ㄉ虾Ｔ慈~生物科技有限公司，批號137234-62-9，純度98.0%）注射用伏立康唑（四川美大康華康藥業(yè)有限公司，規(guī)格為0.1克/支，批號18120419），藥品自帶專用溶媒［四川美大康華康藥業(yè)有限公司，規(guī)格為5毫升/支（乙醇、丙二醇各2.5 mL），專用溶媒批號18120816］；0.9%氯化鈉注射液（四川科倫，規(guī)格為100毫升/瓶，批號W219050509，溶媒）；5%葡萄糖注射液（四川科倫，規(guī)格為100毫升/瓶，批號N19060306A，溶媒）；甲醇、乙腈為色譜純。

2 方法

2.1 色譜條件色譜柱：ODS-SP C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：0.02 mol/L醋酸銨緩沖液（醋酸調(diào)pH至4.0±0.3）-甲醇-乙腈（55∶15∶30）；流速：1.00 mL/min；柱溫：35℃；檢測波長256 nm；進樣量：10 μL。

2.2 對照品貯備液的制備精密稱取伏立康唑?qū)φ掌?.050 34 g，置25 mL容量瓶，流動相溶解并定容至刻度，超聲混勻，制得濃度2.013 6 g/L的伏立康唑?qū)φ掌啡芤骸?/p>

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 調(diào)配方法考察調(diào)配方法A：按注射用伏立康唑說明書調(diào)配方法：取注射用伏立康唑2支，分別將5 mL專用溶媒加入伏立康唑粉針劑瓶，強力振蕩30 s，靜置30 min，再強力振蕩30 s，確認藥物粉末完全溶解，溶液澄清，無任何細小結(jié)晶（用時約33分25秒）。取溶解液分別緩慢加入45 mL 0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液中，輕搖混勻，分別得配伍液1、配伍液2。

調(diào)配方法B：取注射用伏立康唑1支，將5 mL專用溶媒加入伏立康唑粉針劑瓶，反復(fù)沖洗（約6～7次）至溶液澄清透明，無任何細小結(jié)晶（用時約2分48秒）。取溶解液緩慢加入45 mL5%葡萄糖注射液中，輕搖混勻，得配伍液3。

調(diào)配方法C：取注射用伏立康唑1支，將5 mL專用溶媒加入伏立康唑粉針劑瓶，強力振蕩至溶液澄清透明，無任何細小結(jié)晶（用時約1分42秒）。取溶解液緩慢加入45 mL5%葡萄糖注射液中，輕搖混勻，得配伍液4。

分別從配伍液1～4中吸取1.0 mL置20 mL容量瓶，用相對應(yīng)溶媒定容，輕搖混勻，得供試品1-～4。

2.3.2 振蕩作用對配伍液的考察取注射用伏立康唑2支，分別將5 mL專用溶媒加入伏立康唑粉針劑瓶，用方法C進行調(diào)配。為考察成品運送過程中可能受到的外力振蕩作用，故將調(diào)配好的配伍液放置于振蕩器上，進行輕度、強度兩個擋位的振蕩，分別得配伍液5、配伍液6。

分別從配伍液5和6中吸取1.0 mL置20 mL容量瓶，用5%葡萄糖注射液定容，輕搖混勻，得供試品5和6。

2.4 標準曲線的制備精密吸取“2.2”項下貯備液適量，配置成濃度為0.010 0、0.030 2、0.060 4、0.080 5、0.100 6、0.140 9、0.161 1 g/L的對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件測其峰面積。以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線S=235 594C+40 096（r2=0.999 6）伏立康唑在0.010 0～0.161 1 g/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 精密度試驗精密吸取伏立康唑?qū)φ掌啡芤哼m量，按“2.1”項下色譜條件，連續(xù)進樣6次，測其峰面積。結(jié)果RSD=0.06%，表明儀器精密度良好。

2.5.2 重復(fù)性試驗取注射用伏立康唑6支，分別用專用溶媒5 mL溶解后，用5%葡萄糖注射液定容至50 mL，精密吸取1.0 mL至20 mL容量瓶中，用5%葡萄糖注射液定容，制成6份供試品溶液。按2.1項下色譜條件測其峰面積。結(jié)果RSD=0.20%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.5.3 回收率試驗精密稱取注射用伏立康唑0.050 33 g，用專用溶媒2.5 mL溶解后，用5%葡萄糖注射液定容至25 mL，得樣品溶液。精密吸取樣品溶液0.7 mL至25 mL容量瓶中，分別加入高、中、低3種濃度的伏立康唑?qū)φ掌啡芤?，并?%葡萄糖注射液稀釋至刻度。每種濃度測定3份，按“2.1”項下色譜條件測其峰面積，代入標準曲線計算含量。結(jié)果平均回收率為98.28%，RSD=1.63%。見表1。

表1 注射用伏立康唑加樣回收試驗結(jié)果（n=3）

3 結(jié)果

3.1 外觀性狀取“2.3”項下配制的伏立康唑各配伍液，置納氏比色管中，分別于0、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8 h觀察性狀變化，結(jié)果見表2。根據(jù)2020版《中國藥典》對靜脈輸液的規(guī)范，出現(xiàn)渾濁即不符合靜脈輸液要求，故調(diào)配液1、5、6為不合格。

表2 配伍液的性狀變化

3.2 pH取“2.3”項下配制的伏立康唑各配伍液，于0、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8 h測定pH，每份樣本連續(xù)測定2次，取平均值，結(jié)果見表3。普通靜脈輸液要求pH為4～9，配伍液1～6在8 h內(nèi)均符合規(guī)范。

表3 配伍液的pH變化

3.3 不溶性微粒取“2.3”項下配制的伏立康唑各配伍液，于0、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8 h按《中國藥典》（2020年版）微粒檢測法中的光阻法檢測微粒。根據(jù)《中國藥典》（2020年版）通則0903規(guī)定［6］，每1 mL中含10 μm及10 μm以上的微粒數(shù)不得過25粒，含25 μm及25 μm以上的微粒數(shù)不得過3粒。結(jié)果見表4。配伍液1、5、6已不符合規(guī)范要求。

表4 配伍液不溶性微粒變化（≥10 μm，≥25 μm）/（粒/毫升）

3.4含量測定取“2.3”項下配制的伏立康唑各配伍液，按2.1項下色譜條件，分別于0、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8 h測其峰面積并計算含量，以0 h含量為100%計算相對百分含量。結(jié)果見表5。配伍液1、5、6分別在2 h、3 h、1.5 h含量已下降超過10%，根據(jù)《藥品注射劑使用指南（2005年版）》有關(guān)規(guī)定，在靜脈注射液中＞10%的有效成分被分解，則認為該藥品與此溶劑不宜配伍。

表5 6種配伍液中注射用伏立康唑的相對百分含量變化/%

3.5 不同調(diào)配方式對伏立康唑殘留量的考察按“2.3.1”項下的調(diào)配方法A、B、C進行調(diào)配，每種調(diào)配方法檢測10個平行樣。對每個空西林瓶，用10 mL相應(yīng)溶媒反復(fù)沖洗3次，轉(zhuǎn)至50 mL容量瓶并用相應(yīng)溶媒定容。分別取1.0 mL置20 mL容量瓶，用相應(yīng)溶媒定容，過濾，進樣10 μL，計算殘留量。

目前，國家尚無針對靜脈用藥調(diào)配后安瓿和西林瓶中殘留藥量的限度標準，根據(jù)2020版《中國藥典》（四部）中對于注射劑的罐裝規(guī)定，參照靜脈用藥調(diào)配中心藥品調(diào)配的殘留量限度標準［7］：注射用無菌粉末標示量0.05 g及其以下，殘留量限度不超過標示量的15%；注射用無菌粉末標示量0.05～0.15 g，殘留量限度不超過標示量的10%；注射用無菌粉末標示量0.15～0.50 g，殘留量限度不超過標示量的7%；注射用無菌粉末標示量0.50 g以上，殘留量限度不超過標示量的5%。本實驗中所用注射用伏立康唑標示量為0.1 g，即殘留量應(yīng)不超過0.01 g。藥液殘留量合格率＝合格數(shù)/檢查數(shù)量×100%。

采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析處理，計量資料以±s表示，用t檢驗；計數(shù)資料以率表示，用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。不同調(diào)配方法下的殘留量合格率均為100%，組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。調(diào)配時間：方法A、B、C組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表6。

表6 不同調(diào)配方法下注射用伏立康唑殘留量/（±s，n=10）

表6 不同調(diào)配方法下注射用伏立康唑殘留量/（±s，n=10）

調(diào)配方法A B C調(diào)配時間/s 33.616 0±0.887 3 2.648 0±0.428 8 1.670 0±0.326 9殘留量/g 0.004 3±0.000 1 0.004 2±0.000 1 0.004 0±0.000 0合格率/%100 100 100

4 討論

4.1 溶媒的確認本實驗首先按藥品說明書的方法進行調(diào)配，選用配伍液有5%葡萄糖注射液和0.9%氯化鈉注射液。結(jié)果表明：伏立康唑與0.9%氯化鈉注射液的配伍液在0.5 h出現(xiàn)渾濁，且隨時間的延長，由于鹽析作用和pH的影響［8］，渾濁程度越明顯。不溶性微粒在1.5 h已超過《中國藥典》（2020年版）微粒檢測法中的規(guī)定。主藥百分含量在2 h下降至86.16%。而伏立康唑與5%葡萄糖的配伍液均符合規(guī)范，百分含量在8 h下降至99.77%。根據(jù)《藥品注射劑使用指南（2005年版）》有關(guān)規(guī)定，在靜脈注射液中大于10%的有效成分被分解，則認為該藥品與此溶劑不宜配伍［9-12］。故選用5%葡萄糖注射液作為注射用伏立康唑的首選溶媒。

4.2 調(diào)配方法的確定本實驗所用伏立康唑配有專用溶劑（乙醇、丙二醇各2.5 mL的混合液），伏立康唑水溶性差，但易溶于有機溶劑。按說明書方法進行調(diào)配，調(diào)配時間為（33.62±0.87）min，在確定5%葡萄糖注射液為其首選溶媒后，考察“縮短與專用溶劑溶解的時間”對配伍液的影響。結(jié)合靜脈用藥調(diào)配中心實際工作情況，本實驗另采用了“2.3.1”項下調(diào)配方法B和調(diào)配方法C，不同調(diào)配方法下的殘留量合格率均為100%，組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。調(diào)配時間組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。調(diào)配方法B和C比說明書推薦方法A縮短了近30 min，對提高靜脈用藥調(diào)配中心工作效率有較大意義。但方法B在反復(fù)沖洗的過程中，容易往西林瓶注入過多的氣體而造成瓶內(nèi)氣壓過大，導(dǎo)致藥液從橡皮塞的針孔漏出的情況，所以在實際操作過程中，建議選擇調(diào)配方法C進行調(diào)配。且調(diào)配方法C下配伍液的外觀、pH、不溶性微粒和主藥百分含量均符合規(guī)范。雖然乙醇、丙二醇能與水混溶，但由于伏立康唑的水溶性差，用專用溶劑溶解伏立康唑至溶液澄清透明后，應(yīng)緩慢注入5%葡萄糖注射液的可立袋中，使伏立康唑緩慢充分溶解。

4.3 成品輸液運送過程振蕩作用對伏立康唑穩(wěn)定性的影響在靜脈用藥調(diào)配中心實際工作中發(fā)現(xiàn)，將合格的伏立康唑成品輸液送至病區(qū)后，仍接到病區(qū)反映伏立康唑成品輸液出現(xiàn)渾濁。分析原因可能與溶媒瓶PVC材質(zhì)對藥物的吸附有影響，加上伏立康唑的水溶性差也有關(guān)，以及在使用運送推車送往病區(qū)過程中，難免有外力對輸液成品的振蕩，從而可能加速了藥物析出。故本實驗還考察了振蕩作用對配伍液的影響，即使用振蕩器考察輕度、強度兩個擋位的振蕩對伏立康唑穩(wěn)定性的影響。實驗發(fā)現(xiàn)輕度、強度振搖下的配伍液分別在1.5 h和1 h開始出現(xiàn)渾濁，藥物析出結(jié)晶，輕度振搖下其百分含量在3 h下降至89.41%，強度振搖下其百分含量在1.5 h下降至88.84%，均已不符合規(guī)范。所以在實際工作中，調(diào)配好的伏立康唑成品輸液應(yīng)避免振蕩，盡快使用，以保證藥物的有效性。