可溶性低密度脂蛋白受體相關蛋白1在阿爾茨海默病血清中的表達及臨床意義

李小勇，郭琴，郭海志

作者單位：資陽市第一人民醫院,a神經內科，b檢驗科，四川 資陽 641300

阿爾茨海默病（Alzheimer's disease，AD）是一種由社會、生理、心理等多種因素引起的神經退行性疾病，臨床上主要表現為注意力渙散、認知障礙、情感障礙、記憶障礙、行為異常等［1］。AD起病隱匿，病情發展機制復雜，與β淀粉樣蛋白（amyloid-beta，Aβ）代謝異常密切相關，主要危害老年型人群，其患病率隨著年齡的增長逐漸升高，隨著全球人口老齡化的加劇，AD患病人數也逐漸升高，給社會及家庭帶來沉重的負擔［2-3］。目前關于AD的治療仍是世界難題之一，關于緩解或者改善AD病情的藥物和方法較少，原因可能是AD發病緩慢，早期癥狀不明顯，且呈現不可逆性［4］。因此尋找與AD發生發展相關的生物因子仍是研究的熱點。可溶性低密度脂蛋白受體相關蛋白1（soluble Low-density lipoprotein receptor-related protein 1，sLRP-1）隸屬于低密度脂蛋白受體家族，在腦內、血管等組織中均有表達，與AD病情密切相關，具有維持腦內環境及清除腦內Aβ的作用，主要通過調節血管平滑肌細胞、神經膠質細胞、血管內皮細胞等對Aβ的攝取功能來發揮其Aβ清除能力［5-6］。本研究通過對AD病人血清中sLRP-1表達水平的測定來分析其與AD之間的關系，為AD的診斷及治療開發新的靶點。

1 資料與方法

1.1 樣本量估算本研究假說認為sLRP-1表達水平對AD病人具有一定的診斷價值，能有效區分健康對照和AD病人，根據前期預實驗結果，sLRP-1曲線下面積為0.7，設單側α=0.005，β=0.95，組間比例1∶1，采用PASS 15軟件估算樣本量，AD組樣本量N1=69例，對照組樣本量N2=69例，考慮失訪、拒訪的情況10%計算，最終至少需要AD組、對照組各77例，總計至少納入154例。

1.2 一般資料選擇2016年7月至2020年2月在資陽市第一人民醫院確診的AD病人82例為AD組，年齡范圍為67～86歲，年齡（76.1±14.4）歲，病史范圍為1～14年，病史（8.4±2.7）年，男性35例，女性47例。同時選擇在資陽市第一人民醫院進行體檢的健康者95例為對照組，年齡范圍為70～85歲，年齡（75.7±12.6）歲，男性46例，女性49例，兩組研究對象的年齡及性別差異無統計學意義（P＞0.05）。

納入標準：（1）AD的診斷標準參考美國國立神經病語言障礙卒中研究所及阿爾茨海默病協會（NINCDS-ADRDA）制定的診斷標準［7］；（2）臨床資料完整。排除標準：（1）突然起病或卒中樣發作；（2）早期有偏癱、共濟失調、感覺喪失、視野缺損等局灶性神經性體征；（3）有精神分裂、抑郁等精神類疾病史；（4）伴嚴重心臟、肝臟、腎臟等器官疾病等。

癡呆分級標準：根據個人自理狀況、記憶力、解決問題能力、業余習慣嗜好、社會事物認知、意動定向力、家居生活料理等方面進行測評，采用臨床癡呆分級量表（CDR）評定，由臨床經驗豐富的醫師進行匯總，分為輕度癡呆（1分）、中度癡呆（2分）、重度癡呆（3分）。

所有相關樣品的采集均獲得病人及其近親屬知情同意并簽字，本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》。

1.3 主要試劑與儀器全自動生化分析儀，購自美國Bio-Rad公司；sLRP-1、Aβ1-42 ELISA試劑盒，購自于美國Invitrogen公司。

1.4 研究方法

1.4.1 血液樣品預處理采集所有受試者空腹靜脈血3～5 mL，室溫靜置20 min，3 000 r/min，4℃，離心10 min，收集血清裝至特定離心管中，于-80℃冰箱保存備用，用于后續相關指標的測定。

1.4.2 ELISA法檢測血清sLRP-1的表達水平及相關指標的測定根據相應ELISA試劑盒中的說明書測定所有受試者血清中sLRP-1、Aβ1-42含量；用全自動生化分析儀測定血清中三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）含量。計算病人體質指數（BMI）、日常生活能力評估量表（ADL評分）、AD評定量表認知（ADAS-cog評分）、智力狀況檢查評分（MMSE評分）。

1.5 統計學方法利用SPSS 23.0進行統計學分析。以±s對計量資料進行表述，兩組比較采用t檢驗，三組間比較采用單因素方差分析，多組間兩兩比較采用SNK-q法，ROC法分析血清sLRP-1表達水平對AD的診斷價值，Pearson相關性分析血清sLRP-1表達水平與臨床指標之間的相關性；計數資料用例（%）進行描述，行χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般資料比較與對照組相比，AD病人年齡、性別、文化程度、BMI、血清中TG、TC、LDL-C水平比較差異無統計學意義（P＞0.05），AD病人ADAS-cog顯著升 高（P＜0.05），血清中HDL-C、ADL評分、MMSE評分均顯著下降（P＜0.05）。結果見表1。

表1 阿爾茨海默病（AD）組及對照組一般資料比較

2.2 兩組血清sLRP-1表達水平及Aβ1-42濃度比較與對照組相比，AD組血清sLRP-1表達水平降低（P＜0.05），血清中Aβ1-42濃度升高（P＜0.05）。

表2 AD組與對照組血清可溶性低密度脂蛋白受體相關蛋白1（sLRP-1）表達水平及β淀粉樣蛋白1-42（Aβ1-42）濃度比較/±s

表2 AD組與對照組血清可溶性低密度脂蛋白受體相關蛋白1（sLRP-1）表達水平及β淀粉樣蛋白1-42（Aβ1-42）濃度比較/±s

項目對照組AD組t值P值例數95 82 sLRP-1/（mg/L）17.84±5.31 11.16±3.63 8.18＜0.001 Aβ1-42/（μg/L）38.31±10.77 53.34±16.07 7.39＜0.001

2.3 不同分組AD病人血清sLRP-1表達水平及Aβ 1-42濃度比較隨著癡呆程度的加深，AD病人血清中sLRP-1表達水平呈依次降低趨勢（P＜0.05），血清中Aβ1-42濃度呈依次升高趨勢（P＜0.05）。結果見表3。

表3 輕度、中度、重度癡呆血清可溶性低密度脂蛋白受體相關蛋白1（sLRP-1）表達水平及β淀粉樣蛋白1-42（Aβ1-42）濃度比較/±s

表3 輕度、中度、重度癡呆血清可溶性低密度脂蛋白受體相關蛋白1（sLRP-1）表達水平及β淀粉樣蛋白1-42（Aβ1-42）濃度比較/±s

注：①與輕度癡呆相比，P＜0.05。②與中度癡呆相比，P＜0.05。

組別輕度癡呆中度癡呆重度癡呆F值P值例數30 24 28 sLRP-1/（mg/L）13.01±4.03 11.18±3.02①9.15±3.05①②9.15＜0.001 Aβ1-42/（μg/L）46.17±13.59 54.39±16.13①60.12±17.68①②5.70 0.005

2.4 AD病人血清sLRP-1表達水平與臨床指標相關性分析Pearson相關性分析表明AD病人血清中sLRP-1表達水平與血清中Aβ1-42以及ADAS-cog評分呈負相關（r=-0.88，r=-0.74，P＜0.05），與HDL-C水平、ADL評分、MMSE評分呈正相關（r=0.81，r=0.70，r=0.79，P＜0.05）。

2.5 sLRP-1表達水平對AD的診斷價值ROC曲線結果表明，血清sLRP-1表達水平診斷AD曲線下面積（AUC）為0.84，95%CI為（0.77，0.90），靈敏度為82.1%，特異度為84.1%，截斷值為13.943 mg/L。

3 討論

AD是常發于老年性人群的神經系統疾病，年齡越大患病率越高，早期AD病人常伴有認知障礙、記憶混亂、社交障礙等臨床特征，重度癡呆病人則表現為日常生活不能自理、嚴重記憶喪失等，完全依賴照護者，具有病程長、治療效果較差、康復困難等特點，嚴重影響病人的生活質量及生命健康，給病人家屬和社會帶來沉重負擔。目前全世界AD病人有兩千多萬例，隨著人們壽命的不斷延長，AD患病人數也在逐漸增加［6，8］。關于AD的發病機制假說“Aβ級聯假說”認為是Aβ蛋白代謝異常在AD的病情發生及發展中起到重要作用［9］，Aβ蛋白由Aβ前體蛋白水解而來，廣泛存在于腦脊液、血液、腦間質液中，具有很強的神經毒性作用，能促使血管淀粉樣變性、神經纖維纏結、神經元受損，沉積的Aβ常會誘發細胞凋亡、炎癥、氧化應激等一系列不良反應，進一步加重AD病情［10-11］。

研究發現sLRP-1在血管內皮細胞、膠質細胞、神經元等細胞中均有表達，與腦老化、腦萎縮等過程密切相關，是人體血腦屏障中轉運Aβ的主要受體之一，Aβ與sLRP-1的相關配體（Aβ前體蛋白、載脂蛋白等）結合形成復合物，被sLRP-1識別，通過血腦屏障將可溶性的Aβ轉運出腦，研究發現低表達的sLRP-1會加劇血管及腦內Aβ的聚集，進而影響神經元的狀態，誘導神經細胞過早凋亡［6，12］。曹利等［13］研究顯示，AD病人血清sLRP水平顯著低于血管性癡呆、非AD變性癡呆及正常人，且對AD的甄別具有一定價值。本研究中，AD組病人血清sLRP-1表達水平顯著低于對照組，血清中Aβ1-42濃度顯著高于對照組，隨著癡呆程度的加深，AD病人血清中sLRP-1表達水平呈依次降低趨勢，血清中Aβ1-42濃度呈現依次升高趨勢，提示血清sLRP-1水平與AD的發生及發展有關，可能原因為sLRP-1水平下降可能加速Aβ蛋白在腦組織中的積累，促進AD的發展，但具體機制有待進一步探討。

資料顯示ADAS-cog評分及ADL評分可以反映病人的口頭表達能力、詞語回憶、詞語辨析、語言理解能力、回憶能力、日常生活能力等，對于評估AD病人的認知能力具有良好的信度和效度［14］，MMSE評分能反應AD病人的智力情況，研究發現AD的發生與老年人血脂水平存在一定的關聯，HDL-C具有一定的抗炎作用及抑制腦內Aβ生成作用，高HDLC水平還具有調節大腦結構穩定及神經細胞流動性等作用，研究顯示AD病人體內HDL-C水平呈現低水平［15-16］，本次研究發現，AD病人ADAS-cog評分高于對照組，血清中HDL-C、ADL評分、MMSE評分均低于對照組，與相關研究一致。Pearson相關性分析表明AD病人血清中sLRP-1表達水平與血清中Aβ 1-42濃度、ADAS-cog評分呈負相關，與血清HDL-C水平、ADL評分、MMSE評分呈正相關，進一步提示血清sLRP-1表達水平與AD病人病情進展密切相關。ROC曲線結果表明，血清sLRP-1表達水平診斷AD曲 線下 面 積（AUC）為0.84，95%CI為（0.77，0.90），靈敏度和特異度較高，對AD病情具有一定的診斷價值，當sLRP-1水平低于13.943 mg/L時，有發生AD的風險，需加強監測與預防。

綜上所述，血清sLRP-1表達水平與AD病人病情的發生及發展密切相關，對AD具有一定的診斷價值，但是關于sLRP-1在AD病人體內異常表達的具體機制尚不明確，仍需進一步研究。