結(jié)直腸癌患者血清miRNA-497、miRNA-30a-5p的表達及臨床意義

高露露，呂陽，朱琳

鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院1胃腸外科，2手術(shù)室，鄭州 450000

結(jié)直腸癌是臨床常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率和病死率均較高，由于該病早期無特異性癥狀且缺乏有效的早期診斷和癌前篩查方法，超過60%的患者在確診時已發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，患者預(yù)后較差[1-2]。結(jié)直腸癌的發(fā)病過程較為復(fù)雜，有研究報道，微小RNA（microRNA，miRNA）在結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展過程中存在異常表達[3]。miRNA作為高度保守的非編碼RNA在細胞代謝、分裂、分化等多種過程中均有重要的調(diào)節(jié)作用[4]。miRNA-497作為抑癌基因，可參與細胞增殖、分化、凋亡等過程，與腫瘤轉(zhuǎn)移和血管生成具有密切關(guān)系[5]。miRNA-30a-5p也是抑癌基因，在多種腫瘤組織中均呈低表達，能夠靶向調(diào)控腫瘤細胞增殖和遷移[6]。基于此，本研究對結(jié)直腸癌患者血清miRNA-497、miRNA-30a-5p水平進行檢測，以分析血清miRNA-497、miRNA-30a-5p水平與結(jié)直腸癌患者臨床特征的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年10月至2020年10月于鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院接受治療的結(jié)直腸癌患者的病例資料。納入標準：①經(jīng)病理學(xué)檢查確診為結(jié)直腸癌；②入院前未進行過放療或化療；③入院前6個月內(nèi)未服用過抗炎藥物；④可進行手術(shù)治療。排除標準：①有嚴重的肝腎損傷或凝血功能異常；②合并其他惡性腫瘤；③入院前3個月內(nèi)有手術(shù)史；④合并自身免疫性疾病或系統(tǒng)性疾病。根據(jù)納入、排除標準，共納入120例結(jié)直腸癌患者為觀察組，年齡40～75歲，平均（58.82±9.36）歲；男68例，女52例；TNM分期：Ⅰ期46例，Ⅱ期32例，Ⅲ期42例；分化程度：低分化32例，中分化57例，高分化31例；腫瘤直徑：＜5 cm 67例，≥5 cm 53例。另選取120例同時期在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院行健康體檢的健康者作為對照組，年齡40～75歲，平均（58.56±9.45）歲；男65例，女55例。兩組研究對象年齡、性別比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

采集所有研究對象空腹靜脈血5 ml，分離出單個核細胞后加入Trizol 1 ml，提取總RNA，采用經(jīng)典方法反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，采用實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction，qRT-PCR）對cDNA進行定量檢測，檢測并計算miRNA-497和miRNA-30a-5p相對表達量，檢測時嚴格按試劑盒說明書進行。

1.3 觀察指標

①比較觀察組與對照組miRNA-497和miRNA-30a-5p相對表達量。②比較不同臨床特征結(jié)直腸癌患者miRNA-497、miRNA-30a-5p相對表達量。③分析臨床特征與miRNA-497和miRNA-30a-5p的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)表示，組間比較采用χ2檢驗；采用Pearson相關(guān)分析法進行相關(guān)性分析；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對象miRNA-497和miRNA-30a-5p相對表達量的比較

觀察組患者血清miRNA-497、miRNA-30a-5p相對表達量均明顯低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 兩組研究對象血清-miRNA-497和miRNA-30a-5p相對表達量的比較（±s）

表1 兩組研究對象血清-miRNA-497和miRNA-30a-5p相對表達量的比較（±s）

組別觀察組（n=1 2 0）對照組（n=1 2 0）t值P值9.9 8±1.7 4 2 6.2 9±4.8 5 3 4.6 7 5 0.0 0 0 0.3 9±0.1 2 1.1 8±0.3 4 2 4.0 0 2 0.0 0 0 m i R N A-4 9 7 m i R N A-3 0 a-5 p

2.2 不同臨床特征結(jié)直腸癌患者血清miRNA-497和miRNA-30a-5p 相對表達量的比較

不同分化程度、TNM分期、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況結(jié)直腸癌患者血清miRNA-497相對表達量比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；不同腫瘤直徑、腫瘤部位、年齡、性別及脈管浸潤情況結(jié)直腸癌患者血清miRNA-497相對表達量比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。不同分化程度、TNM分期、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤情況結(jié)直腸癌患者血清miRNA-30a-5p相對表達量比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；不同腫瘤直徑、腫瘤部位、年齡、性別結(jié)直腸癌患者血清miRNA-30a-5p相對表達量比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。（表2）

2.3 miRNA-497、miRNA-30a-5p 相對表達量與臨床特征的相關(guān)性

對表2中差異有統(tǒng)計學(xué)意義的指標進行相關(guān)性分析，miRNA-497相對表達量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、分化程度、浸潤深度均呈負相關(guān)（P＜0.05），miRNA-30a-5p相對表達量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、分化程度、脈管浸潤、浸潤深度均呈負相關(guān)（P＜0.05）。（表3）

表2 不同臨床特征結(jié)直腸癌患者血清miRNA-497和miRNA-30a-5p相對表達量的比較

表3 miRNA-497、miRNA-30a-5p相對表達量與臨床特征的相關(guān)性分析

3 討論

近年來，隨著生活方式和飲食結(jié)構(gòu)的改變，結(jié)直腸癌的發(fā)病率呈不斷上升趨勢，該病好發(fā)于40～65歲中老年人群[7]。在發(fā)病早期患者無明顯的臨床癥狀，隨著病情進展，糞便性狀和排便習(xí)慣可能發(fā)生變化，出現(xiàn)便秘、腹瀉、便血、腹痛等臨床癥狀，中晚期患者甚至可能出現(xiàn)乏力、貧血、消瘦等全身性癥狀，威脅患者生命安全[8-9]。有研究顯示，結(jié)直腸癌的發(fā)展包括增生、癌變等多個階段，發(fā)生局部或遠處轉(zhuǎn)移的患者5年生存率較低，臨床治療難度較大[10-11]。但目前臨床缺乏診斷早期結(jié)直腸癌患者的有效方式，因此尋找新的生物標志物診斷和評估結(jié)直腸癌患者病情，對于采取有效治療方式、改善患者預(yù)后具有重要意義[12-13]。

miRNA來自細胞核，占人類基因總數(shù)的2%～5%，在整個基因組中均有表達[14]。有研究發(fā)現(xiàn)，在結(jié)直腸癌患者糞便、血漿和組織中存在多種miRNA異常表達[15]。有研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-497具有高度保守性，可通過對細胞周期和細胞轉(zhuǎn)導(dǎo)產(chǎn)生干擾作用從而阻礙細胞生長[16]。對結(jié)直腸癌患者miRNA表達量和病情嚴重程度進行分析，對于臨床改善患者預(yù)后具有重要意義。本研究結(jié)果顯示，觀察組患者miRNA-497、miRNA-30a-5p相對表達量均明顯低于對照組。表明miRNA-497、miRNA-30a-5p在結(jié)直腸癌患者中呈低表達，這與既往研究基本一致[17]。不同分化程度、TNM分期、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況結(jié)直腸癌患者血清miRNA-497相對表達量比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；不同分化程度、TNM分期、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤情況結(jié)直腸癌患者血清miRNA-30a-5p相對表達量比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。表明miRNA-497、miRNA-30a-5p與結(jié)直腸癌的侵襲和轉(zhuǎn)移具有密切關(guān)系。可能是因為miRNA-497作為抑癌基因，當表達量過低時可能會降低對蛋白激酶的抑制作用，使得蛋白激酶信號通路異常活化，對腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移產(chǎn)生促進作用，結(jié)直腸癌易在患者體內(nèi)擴散和轉(zhuǎn)移，使病情進一步惡化[18-19]。miRNA-30a-5p可作用于多種靶蛋白并能夠抑制惡性腫瘤上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）過程，其低表達會降低對腫瘤細胞增殖、分化的抑制作用[20]。經(jīng)Pearson相關(guān)性分析，miRNA-497相對表達量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、分化程度、浸潤深度均呈負相關(guān)（P＜0.05），miRNA-30a-5p相對表達量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、分化程度、脈管浸潤、浸潤深度均呈負相關(guān)（P＜0.05）。表明miRNA-497、miRNA-30a-5p低表達與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和侵襲、病情惡化均具有相關(guān)性。

綜上所述，結(jié)直腸癌患者血清miRNA-497、miRNA-30a-5p呈異常表達，其水平高低可反映病情嚴重程度和腫瘤惡性情況，可作為臨床診斷的指標。