FQ-PCR檢測HBV-DNA與ELISA檢測乙肝五項指標在診斷乙型肝炎中的應用價值

任淑增 任淑桃 牟彪

（1.會寧縣中醫醫院，甘肅 白銀 730799）

（2.甘肅省金域醫學檢驗中心，甘肅 蘭州 620100）

乙型肝炎為臨床中發生率較高的一種肝臟炎性病變，主要是因為乙肝病毒感染所導致。在人們飲食結構和生活方式不斷改變的過程中，我國的乙型肝炎患病人數也越來越多，有效防治乙型肝炎已成為了我國現階段的主要公共衛生問題之一[1]。臨床中如果未制定科學的措施及時治療乙型肝炎患者，則可能導致肝衰竭、肝硬化、肝癌等疾病。乙肝病毒變異株最近幾年越來越多，進而也讓乙肝病毒的血清學檢測變得越來越困難。相關臨床研究結果顯示，選擇常規乙肝病毒血清學檢測來診斷乙型肝炎、監測其病情，不但檢測操作復雜、困難，同時檢測的準確性、敏感性以及可重復性均不理想[2]。所以，選擇快速、有效和安全的血清學檢測方法來及時、準確地診斷乙型肝炎就顯得非常重要。本研究主要分析了在對乙型肝炎進行診斷時，分別應用酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測乙肝五項指標與熒光定量聚合酶聯反應（FQ-PCR）檢測乙肝病毒基因（HBV-DNA）的價值，希望能為乙型肝炎的防治提供指導。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2019年3月至2020年9月收治的乙型肝炎患者70例。本次研究經本院倫理協會研究批準同意。患者年齡34～56歲，平均年齡（42.47±3.81）歲；男性38例、女性32例。納入標準：簽署知情同意書；滿足乙型肝炎的相關診斷標準[3]。排除標準：缺乏完善的臨床資料；認知功能或溝通障礙；精神疾病。

1.2 方法

全部患者分別采用ELISA檢測乙肝五項指標、采用FQ-PCR檢測HBV-DNA。選擇Infinite F50型酶標儀、上海科華生物工程股份有限公司的兩對半ELISA試劑盒；iWO-960型洗板機、Genelight 9800型全自動醫用PCR分析系統、廈門安普利生物工程有限公司的HBVDNA熒光PCR法試劑盒。于清晨空腹狀態下，抽取靜脈血5 mL。于37℃水浴箱中對標本進行半小時水浴處理，離心10 min，離心轉速為4000 g，對血清進行提取，并將其分為兩份以備用。在Infinite F50型酶標儀中放入其中一份待檢標本，選擇ELISA法檢測乙肝五項指標，包括乙肝病毒核心抗體（HBcAb）、乙肝病毒表面抗體（HBsAb）、乙肝病毒e抗原（HBeAg）、乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝病毒e抗體（HBeAb），根據試劑盒說明書開展相關的檢測操作。于Genelight 9800型全自動醫用PCR分析系統中放入另一份待檢標本，選擇FQ-PCR法對HBV-DNA含量進行檢測，根據試劑盒說明書開展相關的檢測操作。陰性的判斷標準為血清中HBVDNA含量≤5×102拷貝/mL，陽性的判斷標準為血清中HBV-DNA含量＞5×102拷貝/mL[4]。

1.3 統計學分析

運用SPSS 21.0軟件處理數據。計數資料以[n（%）]表示，進行χ2檢驗。以P＜0.05為差異存在統計學意義判定依據。

2 結果

2.1 乙肝五項指標檢測結果觀察

乙肝五項指標檢測結果顯示，全部70例乙型肝炎患者中，3例患者為HBeAb、HBeAg、HBsAb、HBsAg陰性，2 例患者為HBeAb、HBsAg陽性，3 例患者為HBeAg、HBsAg 陽性，3 例患者為HBcAb、HBeAb、HBsAb陽性，23例患者為HBcAb、HBeAb、HBsAg陽性，36例患者為HBcAb、HBeAg、HBsAg陽性，具體情況如表1所示。

表1 乙肝五項指標檢測結果觀察（n=70）[n（%）]

2.2 HBV-DNA檢測結果觀察

HBV-DNA檢測結果發現，全部70例患者中，23例患者為HBV-DNA陰性，47例患者為HBV-DNA陽性。具體情況如表2所示。

表2 HBV-DNA檢測結果觀察[n（%）]

3 討論

乙型肝炎是因為乙型肝炎病毒導致的一種疾病，而乙型肝炎病毒所引起的肝臟炎癥反應則被稱之為肝炎。乙型肝炎病毒屬于嗜肝病毒，進入人體則會在肝細胞內存在。作為一種由3.2 kb組成的一種雙鏈環狀DNA，在乙型肝炎病毒進入到肝臟細胞后，則會形成cccDNA，同時以其為模板轉錄成不同的mRNA，并分別作為前體RNA來對各種抗原進行編碼。cccDNA具有較長的半衰期，因此從肝臟內將其有效清除的難度較大，這也是導致乙型肝炎病毒感染慢性化的一個主要原因。現階段已知的乙型肝炎病毒基因型包括9種，從A到J，而我國主要為B型、C型，B型患者乙型肝炎主要為無癥狀攜帶者，基本上不會發展成肝硬化、慢性肝炎或者肝細胞癌。不論是在乙肝病毒免疫清除、抗病毒治療，還是在乙肝e抗原血清學轉換中，乙肝病毒基因型的作用均非常重要。

乙肝標志物主要是用來對乙型肝炎病毒感染進行鑒別，也就是“乙肝兩對半”。但是現階段乙肝標志物的內涵更加深刻和廣泛，所以“兩對半”的概念也不斷弱化。乙肝標志物的組成包括乙肝核心抗體、乙肝e抗體、乙肝e抗原、乙肝表面抗原、乙肝表面抗原。除此之外，乙肝病毒定量、乙肝核心抗體IgM也屬于血清學標志物。因為乙肝e抗原、乙肝核心抗原表示乙肝病毒復制載量較高，但是相比于乙肝e抗原，乙肝核心抗原的檢測難度更大，所以臨床中常常通過乙肝e抗原來判斷乙肝病毒的復制活躍情況。但是，現階段有關乙肝核心抗原的檢測還處在研究范圍內，臨床中還缺乏檢測可用的有效試劑。多樣對乙肝標志物的意義進行充分了解，對于診治乙型肝炎患者非常關鍵。

乙肝表面抗原表示乙肝病毒早期感染，感染后大部分患者的血液中能檢測到存在乙肝表面抗原，然而卻無臨床癥狀，急性感染除外，臨床中將這類人稱之為乙肝表面抗原攜帶者。乙肝表面抗原僅能表示乙型肝炎病毒感染，無法代表乙型肝炎病毒的傳染力、復制情況以及預后。如果血液中午乙肝病毒顆粒，那么乙肝表面抗原其實也就是空殼。乙肝表面抗體具體是指機體針對乙肝表面抗原所形成的一種抗體，其出現可以當成是急性乙型肝炎病毒感染患者的一個康復指標。乙肝表面抗體屬于中和性抗體，能長時間存活在體內。除此之外，通過注射乙肝疫苗也能產生乙肝表面抗體，能對機體進行有效保護，避免機體感染乙肝病毒。

其現階段已成為了臨床中發生率較高的一種傳染性疾病，不僅具有高發性的特點，而且具有全球性特點。現階段全世界范圍內有3億多人感染了乙肝病毒，而在我國有超過1億的人群感染了乙肝病毒[5]。現階段臨床中在對乙型肝炎進行診治時，乙型肝炎五項指標和HBV-DNA含量檢測是最常用的檢測方法。乙肝病毒是一種雙鏈DNA病毒，不僅包含了前基因組RNA，而且還包含了病毒基因組松弛環狀DNA以及共價閉合環狀DNA，而臨床中在采用抗病毒療法對乙型肝炎患者進行治療時，共價閉合環狀DNA會對臨床療程造成直接影響。

HBsAg屬于分泌性包膜蛋白，與共價閉合環狀DNA、HBV-DNA之間的關系非常密切，是對肝細胞有無乙肝病毒感染進行判斷的主要標志物之一[6]。當機體處在免疫耐受期時，HBsAg含量較高，而當處在免疫清除期時HBsAg含量則會不斷下降。所以，通過對HBsAg清除情況進行了解和觀察，可準確判斷臨床療效。HBeAg屬于可溶性蛋白質，HBV-DNA含量、患者年齡會對HBeAg表達造成直接影響。對于乙型肝炎患者來講，其HBeAg陽性時間預期預后之間的關系非常密切。選擇SLISA法來檢測乙型肝炎五項指標，是現階段臨床對乙型肝炎進行診斷的常用方法之一，診斷靈敏度、特異度均比較理想。然而，該方法僅能對乙肝病毒入侵后的機體免疫情況進行判斷，無法對體內的乙肝病毒復制和拷貝數進行測定。相關臨床研究結果顯示，在乙型肝炎的發病初期，肝細胞膜上附著的乙肝病毒較多，采用FQ-PCR法來檢測HBVDNA，能對乙肝病毒復制和感染情況進行判斷[7]。本研究中，在發病初期，有些乙型肝炎患者的HBVDNA含量處于較低水平，表示其體內僅存在少量的HBV-DNA，所以如果只是檢測乙肝五項指標，并不能對乙肝病毒傳染情況進行準確判斷。除此之外，對于部分ELISA檢測結果為HBcAb、HBeAg、HBsAg陽性的患者來講，當選擇FQ-PCR法對HBV-DNA含量進行檢測時，也可能呈陰性。結果表明，并不是全部的HBcAb、HBeAg、HBsAg陽性患者都會傳播乙肝病毒。

總之，在對乙型肝炎患者進行診斷時，應用ELISA檢測乙肝五項指標、應用FQ-PCR檢測HBV-DNA均具有自身的特點。前者能對患者有無乙肝病毒感染進行準確判斷，后者則能對病毒復制和病毒感染進行準確判斷，從而來對病情進行確定。