乳酸菌在魚類腸道上的應用

■ 馮興浪（湖南漁美康生物技術集團有限公司 湖南 長沙 410000）

乳酸菌（lacticacid bacteria，LAB）是一類能利用可發酵碳水化合物產生大量乳酸的細菌的統稱。這類細菌在自然界分布極為廣泛，具有豐富的物種多樣性，至少包含18個屬，共200多種。除極少數外，其絕大部分都是魚體內必不可少的、且具有重要生理功能的菌群，廣泛存在于魚體的腸道中。

乳酸菌是發酵糖類主要產物為乳酸的一類無芽孢、革蘭氏染色陽性細菌，其包含許多種屬。大多數乳酸菌不運動，少數以周毛運動，菌體常排列成鏈。乳酸鏈球菌族，菌體球狀，通常成對或成鏈。乳酸桿菌族，菌體桿狀，單個或成鏈，有時成絲狀，產生假分枝。普通的乳酸菌，活力極弱，它們只能在相對受限制的環境中存活，一但脫離這些環境，其自身就會遭到滅亡。

在水產養殖過程中，乳酸菌已經大量應用在實踐生產中，它作為一種飼料添加劑，或者是內服營養保健劑常常被用在飼料中添加投喂魚類，乳酸菌針對于魚體有很強的生理意義，作為魚胃腸道固有菌群的組成部分，乳酸菌能定植于魚類消化道，大量占據腸壁上的靶細胞，形成生物保護屏障，抑制病原菌對腸壁的定植，維持腸道正常的微生態平衡。因此，以乳酸菌為對象的益生菌開發正成為行業研究的熱門。

1 乳酸菌在海淡水魚類腸道的應用情況

魚的腸道前端和胃相連，無胃魚類的腸道直接與食道相連；腸道后端止于肛門。不同魚類的腸道長短不一，大體上講，植食性的魚類腸道＞雜食性魚類的腸道＞肉食性魚類的腸道，我們在實踐生產中，評判魚類腸道是否健康，作用機理是否正常，除了各項理化指標的正常外，我們更多的是觀察腸道的厚度，腸道絨毛膜的稠密度以及腸道褶皺度情況。而這些常規的理化指標，和腸道微生物的作用密不可分，特別是腸道定植的乳酸菌。

圖1 肝腸健使用效果

1.1 乳酸菌在海水魚類腸道的應用情況

研究表明魚卵孵化前表面附著有大量的細菌但剛孵化魚的胃腸道通常是無菌的孵化后由于與環境和飼料的接觸，一些能適應魚類胃腸道環境，如胃腸道pH值、厭氧環境、膽鹽和消化酶以及宿主的免疫系統的微生物開始陸續定植于胃腸道逐漸形成比較復雜而穩定的微生物區系。這個微生物區系會隨著魚的年齡、營養狀況 以及環境的變化發生變化。一般說來，乳酸菌是早期恒溫動物消化道的優勢菌，但少數研究表明仔稚魚消化道中也存在一定數量的乳酸菌，而且淡水魚腸道乳酸菌是腸道正常菌群的主要組成成分，而海水魚類腸道中乳酸菌數量較少。

中國農業大學王福強在研究魚類腸道微生物過程中，通過普通培養基和選擇性培養基相結合的方法，從健康牙鲆腸道固有菌群中分離益生菌，共得到6株乳酸菌，6株弧菌拮抗菌和24株產蛋白酶菌。在6株乳酸菌中，其中一株P15經過生化生理和16s rRNA分子鑒定，為鼠李糖乳桿菌；P15對弧菌有很強的抑制作用，在pH值6.8和pH值7.5生長良好，而在pH值8.0和pH值8.5時該菌生長不良且無抑菌活性。鼠李糖乳桿菌P15有很強的抑制弧菌活性，對消化道粘液很強的粘附能力和在消化道很好的定植能力。它可以降低牙鮮消化道和水中弧菌的數量，促進生長，降低死亡率。

中國計量學院章蔚從黑鯛腸道分離出一株益生乳酸菌并通過生化鑒定和16S rDNA分子鑒定為明串珠菌屬乳酸菌（Leuconostoc lactis）。將此株乳酸菌在體外對其生物學特性研究：此乳酸菌對低pH值、膽鹽、胃蛋白酶、胰蛋白酶均具有較好的耐受性，但是高濃度的膽鹽、胃蛋白酶、胰蛋白酶會影響其生存活力。選用50g左右的健康黑鯛幼魚48尾為試驗對象，隨機分為空白對照組、溶菌酶對照組和明串珠菌乳酸菌試驗組，溶菌酶組和乳酸菌試驗組幼魚按魚體重的5%飼喂含7,200U/g重組溶菌酶的配合飼料和含1×107cfu/g乳酸菌的配合飼料，飼喂56d，空白對照組飼喂配合飼料。試驗14d、28d、42d、56d屠宰幼魚取血樣、腸道及內容物。測定血清生化指標；制備腸道組織橫截面切片，HE染色觀察測量腸道形態；采用PCR-DGGE技術分析腸壁、內容物菌群變化。結果表明：根據條帶聚類相似性（UPGAMA）分析，試驗14d、28d、42d、56d時各泳道腸壁菌群相似性為0.52、0.45、0.66、0.7，腸內容物菌群相似性，0.57、0.61、0.66、0.69。在腸壁的DGGE圖譜中，14d、28d、42d和56d乳酸菌組的平均條帶數顯著（P＜0.05）多于空白對照組和溶菌酶組；在內容物的DGGE圖譜中，在56d時，乳酸菌組的平均條帶數顯著（P＜0.05）多于對照組和溶菌酶組，說明明串珠菌乳酸菌可增加幼魚腸道菌群多樣性。對空白對照組、溶菌酶組和明串珠菌乳酸菌組的共同優勢條帶回收測序，發現黑鯛幼魚腸道的優勢菌群主要包括假單胞菌屬（Pseudomonas）、腸桿菌屬（Enterbacter）、微球菌屬（Micrococcus）、微小桿菌屬（Exiguobacterium）、不動桿菌屬（Acinetobacter）、紅桿菌屬（Rhodobacter）、枯草芽孢桿菌屬（Brevibacterium）。飼喂乳酸菌的黑鯛幼魚腸道肌層厚度、粘膜厚度、絨毛長度和絨毛寬度隨試驗時間延長均有增加的趨勢，肌層厚度在14d、28d、42d和56d期間，乳酸菌試驗組和空白對照組、溶菌酶對照組均無顯著差異；粘膜厚度在14d、28d、42d和56d顯著（P＜0.05）大于空白對照，14d、28d時顯著大于溶菌酶組的幼魚腸道粘膜厚度；絨毛寬度在14d、28d、42d和56d和空白對照組、溶菌酶對照組均無顯著差異；絨毛長度在14d、28d、42d和56d顯著（P＜0.05）大于空白對照組，在14d、28d、42d乳酸菌組絨毛長度顯著（P＜0.05）大于溶菌酶組；因此，飼喂乳酸菌可以促進黑鯛幼魚腸道生長。飼喂乳酸菌的黑鯛幼魚血清葡萄糖含量在56d時顯著低于對照組幼魚（P＜0.05）；乳酸菌組的血清蛋白質含量在42d顯著（P＜0.05）高于空白對照組和溶菌酶組；乳酸菌組的血清SOD活力在56d顯著（P＜0.05）高于空白對照組，然和溶菌酶組幼魚14d、28d、42d和56d均無差異；乳酸菌組的血清溶菌酶活力在42d、56d顯著（P＜0.05）高于空白對照組，42d顯著（P＜0.05）高于溶菌酶組；抗菌活力在42d、56d顯著（P＜0.05）高于空白對照組，和溶菌酶組均無顯著差異；由此可知，飼喂乳酸菌在一定程度上能對幼魚血清各指標產生影響。

圖2 美康1號使用效果

1.2 乳酸菌在淡水魚類腸道的應用情況

在淡水養殖中，越來越多的有益菌被添加到飼料中作為營養保健劑，特別是乳酸菌應用也越來越廣泛和頻繁，很多的研究表明，在飼料中添加乳酸菌，有助于改善魚體腸道健康情況，增加魚體免疫機能，降低腸炎的發生率，在某些程度上，可以降低餌料系數，提高飼料的利用率。

上海海洋大學郭鳳茹針對從羅非魚腸道分離出來的乳酸菌，對其抑制常見致病菌的能力進行分析，并對其抑菌活性物質和生物學特性進行研究。并且對乳酸菌的抗氧化活性進行了評估，以期其在天然抗氧化劑的開發和應用方面起到作用。實驗采用瓊脂打孔擴散法對保存于實驗室的20株乳酸菌（植物乳桿菌16株，戊糖乳桿菌3株，乳酸片球菌1株）對5種指示菌（大腸桿菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、嗜水氣單胞菌）的抑菌效果進行測定和分析，結果表明菌株之間的抑菌能力有一定差異，其中13株乳酸菌對5種指示菌均有抑菌作用，其中有5株菌MRE3014、MRE3019、MRE3029、MRE3035、MRE3709對5種指示菌的抑菌圈直徑均在13mm以上，具有較好的抑菌效果和廣譜抑菌性。實驗還對兩株乳酸菌MRE3014和MRE3029單一培養和混合培養的生長特性及抑菌效果做了對比分析，兩株菌混合培養和單一培養時，生長特性并無顯著差別，但菌株混合培養上清液對5種指示菌的抑菌效果好于乳酸菌單一培養時。挑選出10株具有較好抑菌能力的乳酸菌株，為了研究乳酸菌抑菌活性物質的特性，實驗檢測了過氧化氫、蛋白酶、pH值以及溫度對其抑菌效果的影響。結果表明乳酸菌培養上清液中有過氧化氫的產生，且對蛋白酶比較敏感，在一定程度上表現出良好的熱穩定性，其抑菌作用對酸環境有一定的依賴性。結果說明乳酸菌上清液的抗菌作用可能是由于細菌素、蛋白酶、過氧化氫、有機酸或環境pH值，這些因素中的一種或組合產生的。對10株乳酸菌株耐酸和耐膽鹽能力分析發現，10株菌在pH3.0靜置培養4h后，菌株的存活率保持在62%～81%之間，而在pH2.0靜置培養4h后，大部分菌株的存活率在50%左右，個別菌株失去存活。10株菌在含有不同膽鹽濃度的液體培養基中，表現出較好的耐受性，只是研究結果表明，隨著培養時間和濃度的增加，其菌株存活率會逐漸下降。10株乳酸菌株對13種抗生素的藥敏性測定結果表示，10株乳酸菌株對氨基糖苷類，糖肽類和氟喹諾酮類抗生素表現耐藥，對四環素類、青霉素類、紅霉素和氯霉素表現敏感。在水產養殖過程中應盡量避免乳酸菌敏感性抗生素的使用。通過對10株菌的培養上清液、菌體懸液及無細胞提取物對羥自由基、超氧陰離子自由基和DPPH自由基的清除能力的測定，結果顯示，10株乳酸菌對幾種自由基的清除能力均為上清液大于菌體懸液大于無細胞提取物，其中無細胞提取物對幾種自由基的清除能力很弱或幾乎沒有。乳酸菌培養上清液對羥自由基的清除率均在10%以上；對DPPH自由基的清除率達50%以上；對超氧自由基的清除率在20%以上。10株乳酸菌菌體懸液對羥自由基的清除率差異較大，在5.34%～32.02%之間；對DPPH自由基的清除率在14.28%～28.55%之間；對超氧自由基的清除率在9.11%～13.68%之間。10株乳酸菌只有培養上清液具有較好的還原能力，而其菌體懸液和無細胞提取物均未檢測出還原性。

上海海洋大學張洪玉在研究乳酸菌在斑點叉尾鮰的應用時，利用在體實驗研究干酪乳桿菌YYL3（Lactobacillus casei，Lc-YYL3）和植物乳桿菌YYL5（Lactobacillus plantarum，LpYYL5）在斑點叉尾鮰腸道中的定植性，然后在飼料中添加兩種乳桿菌，基于高通量測序的宏基因組學分析干酪乳桿菌YYL3和植物乳桿菌YYL5對腸道菌群結構的影響，基于腸道菌群功能預測，對代謝通路進行了分析，研究了兩種乳桿菌的益生機制。

本文的研究結果總結如下：1、從市售水產益生菌制劑、糖蜜、紅糖、斑點叉尾鮰腸道中篩選出21株乳酸菌，經16S r DNA測序確定分屬于10種乳酸菌，分別為屎腸球菌、布氏乳桿菌、干酪乳桿菌、植物乳桿菌、乳酸乳球菌、棒狀乳桿菌、腸膜明串珠菌、發酵乳桿菌、鳥腸球菌和海氏腸球菌。分別對10種21株乳酸菌進行病原菌體外拮抗、耐膽鹽及腸道上皮細胞黏附性實驗。結果表明：干酪乳桿菌YYL3、植物乳桿菌YYL5、植物乳桿菌YYL6、乳酸乳球菌TM3和發酵乳桿菌HT3等5株對斑點叉尾鮰三種主要致病菌（鮰魚愛德華氏菌、嗜水氣單胞菌和魯氏耶爾森氏菌）有較好拮抗作用。植物乳桿菌YYL5和YYL6、干酪乳桿菌YYL3和乳酸乳球菌TM3可以耐受0.2%的膽鹽，在0.2%膽鹽濃度下仍然可以生長。干酪乳桿菌YYL3、植物乳桿菌YYL5和發酵乳桿菌HT3這3株菌對Caco-2細胞的黏附作用相對較強，黏附率在5%以上。綜合以上試驗結果，最終獲得兩種能拮抗斑點叉尾鮰病原菌、耐膽鹽并對Caco-2細胞具有一定黏附性的乳桿菌-干酪乳桿菌YYL3和植物乳桿菌YYL5。

2、使用已證的在斑點叉尾鮰腸道具有定植能力的地衣芽孢桿菌A1（Bacillus licheniformis，Bli-A1）作為陽性對照，使用惰性對照嗜熱脂肪地芽孢桿菌（Geobacillus stearothermophilus，Gs）作為陰性對照，研究干酪乳桿菌YYL3和植物乳桿菌YYL5在斑點叉尾鮰腸道中的定植性。通過每周換水100%和飼料Co60輻照滅菌減少水體和飼料微生物對腸道菌群的影響。采用改良MRS平板（pH值5.0）方法，提高MRS平板檢測兩種乳桿菌的靈敏度和特異度。采用52℃高溫選擇性培養腸道Bli-A1，使用Gs的芽孢作為惰性對照，研究外源添加兩種乳桿菌在腸道內的消長規律。結果顯示，每周100%換水使水體Lc、Lp、Bli含量＜1cfu/mL。MRS改良平板檢出限可以達到1cfu/腸。輻照滅菌使飼料中的乳酸菌和芽孢菌降至檢出限以下。停止補充外源Lc、Lp、Bli、Gs后，Day21之后便再無Gs的檢出，Day14之后便再無乳酸菌檢出了，而Bli-A1在腸內容物中的含量直至觀察期結束時（Day28）仍有1.3×102cfu/g。結果表明，干酪乳桿菌YYL3和植物乳桿菌YYL5不能在斑點叉尾鮰腸道中有效定植。

3、為研究兩種乳桿菌對斑點叉尾鮰的益生性，在飼料中添加3.0×108cfu/g的干酪乳桿菌YYL3（Lc-YYL3）或植物乳桿菌YYL5（Lp-YYL5），養殖4周后，測定生長指標和存活率，分析血清的非特異性免疫指標，并測定人工感染后叉尾鮰的累積存活率。利用高通量測序技術研究投喂Lc和Lp對腸道菌群的影響，并對腸道菌群功能進行了預測，對代謝通路進行分析。結果表明：Lc能夠顯著提高斑點叉尾鮰生長性能，終末平均體重（114.67±10.75）g、體重平均增重（47.49±1.62）g以及特定生長率（1.90±0.05）%均顯著高于對照組（Conrtol group，CG），餌料系數顯著低于CG組（P＜0.05）。Lp對生長性能的改善無統計學差異。Lc能夠顯著提高溶菌酶活性（P＜0.05），對替代補體通路活性（ACH50）以及超氧化物歧化酶（SOD）無顯著影響，Lp對溶菌酶活性、ACH50以及SOD均無顯著影響（P＞0.05）。Lc能夠顯著提高斑點叉尾鮰抗愛德華氏菌感染能力，15d后，Lc組（31.25±6.25%）累積存活率顯著高于CG組（8.33±9.55%）和Lp組（16.67±9.55%）（P＜0.05），而Lp組同CG組無顯著性差異（P＞0.05）。Lc、Lp降低了腸道菌群的豐度分布和多樣性。在停止投喂乳桿菌兩周后，Lc-2wk組腸道豐度仍然顯著低于CG-2wk（P＜0.05），但腸道菌群多樣性逐漸恢復。Lp-2wk組菌群豐度逐漸恢復，但多樣性仍然顯著低于CG-2wk（P＜0.05）。投喂乳桿菌期間，乳桿菌屬是Lc、Lp兩組的腸道菌群絕對優勢菌屬，分別為：85.39%、84.58%。停止投喂兩種乳桿菌兩周后，腸道中兩種乳桿菌降低到了很低的水平（＜0.05%）。假單胞菌屬是Lc腸道菌群的第二優勢菌群。Lp組中Pseudoclavibacter（2.99%）、假單胞菌屬（2.19%）、軍團菌屬（1.29%）和短波單胞菌屬（1.15%）所占比例也均超過1%。停止投喂乳桿菌2周后，兩種乳桿菌腸道菌群發生了明顯的變化。Lc-2wk菌群屬水平分布較為均勻，假單胞菌屬（19.75%）、桿菌屬（13.41%）和新根瘤菌屬（10.47%）所占比例超過10%。Lp-2wk組，鯨桿菌屬是絕對優勢菌，為84.72%，阿克曼菌屬（12.23%）是第二優勢菌屬，同對照組腸道菌群親緣關系較近。兩種乳桿菌極大的改變了斑點叉尾鮰腸道菌群結構，線性判別分析（Linear discriminant analysis effect size，LEf Se）顯示，在LDA分值大于3.6，CG同Lc組之間39個分類單元有差異，CG同Lp組相比較，一共有51個分類單元有明顯差異。投喂干酪乳桿菌YYL3和植物乳桿菌YYL5后，能夠在一定時間內降低斑點叉尾鮰腸道中的機會致病菌氣單胞菌的比例。對腸道菌群功能基因進行分析，Lc-YYL3組新陳代謝途徑豐度比例高于對照組，在脂質代謝、萜類化合物和聚酮類化合物的代謝、其他氨基酸的代謝、外源生物的生物降解和代謝以及碳水化合物代謝等豐度比例上均高于對照組，這些功能基因的富集，更好的利用碳水化合物、脂類、氨基酸等營養物質，發酵碳水化合物形成短鏈脂肪酸，最終表現在促進斑點叉尾鮰生長性能以及免疫水平上。綜上所述，干酪乳桿菌YYL3和植物乳桿菌YYL5不能在斑點叉尾鮰腸道中有效定植。干酪乳桿菌YYL3能夠促進斑點叉尾鮰的生長，提高免疫，提高抗愛德華氏菌的感染能力。干酪乳桿菌YYL3和植物乳桿菌YYL5能夠調節腸道菌群結構，而兩種乳桿菌對腸道菌群的調節有很大的差異性。干酪乳桿菌YYL3通過腸道中代謝功能基因富集，促進斑點叉尾鮰的生長和免疫水平。

許禔森在草魚幼魚中投喂添加由單一短乳酸桿菌制備的微生態制劑和黃霉素，在60d的投喂期內，采用平板計數法檢測好氧性異養菌的總數、總弧菌數和短乳酸桿菌的數量。結果表明，在投喂菌液和凍干菌粉后，養殖水體和草魚腸道的短乳酸桿菌數均呈上升趨勢，在30d后數量達到穩定并在腸道內定植。同時，由于短乳酸桿菌的抑制作用，弧菌的數量下降，以腸道中的弧菌最明顯。乳酸菌對養殖水體和草魚腸道的好氧性異養菌沒任何影響。乳酸菌對養殖水體和腸道菌群的影響與抗生素具有相近的效果，表明乳酸菌作為飼料添加劑可以取代抗生素應用在草魚的養殖中。

2 乳酸菌在魚類腸道上的作用

乳酸菌作為魚體內的正常的微生物能定植于魚類消化道，拮抗革蘭氏陰性致病菌，維持腸道正常的微生態平衡；同時乳酸菌能降低腸道pH值，抑制有害菌的生長；乳酸菌還能刺激動物的體液免疫和細胞免疫增強機體的免疫調節活性對維持宿主的健康起著重要的作用，此外乳酸菌還能為宿主的生長發育提供豐富的營養物質促進動物生長；乳酸菌可以增加腸道絨毛膜的稠密度和褶皺度，增加腸道的厚度，降低餌料系數和腸炎疾病的發生率。

2.1 定植腸道，增加有益菌群的競爭

腸道內的乳酸菌主要來自于飼料和添加劑，在常規的養殖過程中，魚體只能簡單地從水體中或者飼料中攝食乳酸菌，由于飼料經過高溫以后，菌種含量極少，已經無法滿足魚體的需要，如果不能從外界添加輔助的乳酸菌，直接導致魚體的微生物失衡，有益菌減少，導致魚體發生腸炎，餌料系數提高，影響了魚的機體性能。腸道中添加乳酸菌，可以擴大有益菌群的競爭優勢，擠占有害菌的生存空間。乳酸菌還可以分泌乳酸和乙酸抑制病原菌，加大乳酸菌在腸道的定植數量，不僅抑制病原菌的生長，還可以直接影響腸道的消化吸收功能，提高消化吸收的效率，減少養殖成本，降低發病的幾率。

2.2 改善腸道亞健康的狀態，提高魚體抗病能力

由于集約化的高度發展，水產養殖的密度越來越大，水體環境也越來越差，加上飼料發展的畸形，導致了魚體始終處于亞健康的狀態。據統計，在華中區域的四大家魚養殖過程中，有80.22%的魚處于亞健康的狀態，而在這一數據里面，有90.7%的魚體患有不同程度的腸炎。在飼料或者水體中添加乳酸菌，可以有效緩解這一問題。徐晟云在研究不同環境下養殖和野生鱧腸道微生物群落結構特征、以及添加乳酸菌對鱧腸道微生物和生長的影響中，用高通量測序方法檢測飼料投喂中添加乳酸菌后雜交鱧腸道內微生物群落結構變化情況，結果表明：OTU分析和Venn圖發現，全雄雜交鱧組和普通雜交鱧組OTU數都有少量增加，表明微生物多樣性都發生了改變；Chao和Ace值均升高，Simpson值降低，Shannon值上升，說明添加乳酸菌投喂能增加微生物豐富度以及多樣性；該研究還通過乳酸菌對全雄雜交鱧生長的影響以及全雄雜交鱧和普通雜交鱧的生長對比，得出了全雄雜交鱧（LAB）和全雄雜交鱧的平均日增重、體長相對增長率、體重相對增重率以及餌料系數，全雄雜交鱧組（LAB）對于飼料的利用率優于全雄雜交鱧組，并且生長速度高12%±2.3%（F＞F crit，P＜0.05），餌料系數降低約10%，乳酸菌能增強魚體抵抗力，提高成活率。比較存活率發現乳酸菌還能增強魚體抗病力、降低發病率和提高成活率。

2.3 免疫激活，增強魚體體質

作為益生菌的重要成員，乳酸菌對于宿主的先天免疫系統和維持其機體的免疫穩態有著重要的作用，其主要是通過增強或恢復腸道穩態來發揮作用，有能作為粘膜免疫載體的潛能，同時乳酸菌也是良好的免疫激活劑，能夠激發和觸動魚體內的免疫系統，增強魚體的抗病能力！

任真真為了研究不同乳酸菌對宿主的黏附能力與提高免疫性能的聯系，以及乳酸菌對宿主腸道粘膜免疫屏障和對宿主的免疫力提高的作用的可能機制，本研究利用斑馬魚為模型，研究芽孢乳酸菌09.712（B.coagulans09.712）和植物乳桿菌08.923 （L.plantarum08.923）在體內的定植情況，并與商業菌株鼠李糖乳桿菌CGMCC 1.3724（L.rhamnosusCGMCC 1.3724）、嗜熱鏈球菌CGMCC 1.2471（S.thermophilusCGMCC 1.2471）、長雙歧桿菌嬰兒亞種CGMCC 1.2202（B.infantisCGMCC 1.2202）進行比較。研究顯示了不同乳酸菌的黏附能力，采用動物組織染色法探討了五種乳酸菌對斑馬魚腸道黏膜屏障的保護作用以及乳酸菌增強腸道免疫屏障從而發揮強保護作用。

2.4 調節腸道pH值，抑制有害菌的繁殖

乳酸菌在代謝過程中產生乳酸、乙酸等有機酸可降低消化道pH值。因為多數致病菌難以在低pH值環境中生長良好，因此乳酸菌造成的這種低pH值環境能抑制病原菌的生長和繁殖。

3 影響乳酸菌在魚類腸道作用的因素

乳酸菌作為有益菌中應用在水產養殖上最多的菌種之一，其水產養殖上的重要性不言而喻，但是在實踐過程中，我們理想上希望發揮其最大的作用，可是有很多的因素會影響乳酸菌的作用力度。其中包括飼料的加工工藝，選擇的菌種，營養配方，環境影響等因素，如何解決我們在生產上應用乳酸菌遇到的問題，也是值得研究和探討的。

3.1 飼料生產工藝

在飼料生產過程中，一般采用的是高溫壓制顆?；蛘吒邷嘏蚧?，在飼料中添加乳酸菌的時候，經過高溫的蒸煮，其效果會大打折扣，所以在制作工藝上，還需要改進，現在有新的制備工藝，采取后真空噴涂的方式，這樣的方式會改善乳酸菌受影響的問題，是值得推廣的。

3.2 飼料的營養配方

魚體主要是靠攝食餌料生長，飼料的營養成分會直接影響腸道微生物，從而影響魚體的生長情況。飼料的主要成分主要是蛋白質、脂肪、糖類以及微量元素和部分常量元素，而這些元素都會對于腸道微生物產生影響。

孫夢潔以俄羅斯鱘（Acipenser gueldenstaedti）為研究對象，在基礎飼料中添加殼寡糖，測定其對免疫、抗菌感染及腸道菌群的影響，分析在飼料中添加殼寡糖的可行性，并確定殼寡糖的最佳添加劑量和最佳飼喂時間，其研究結果表明殼寡糖可以改善俄羅斯鱘的免疫功能，改變腸道菌群的分布，提高其生存率，且質量添加比為1.50%效果最佳。

唐凌等在對甘露寡糖對水生動物腸道菌群和免疫功能的影響的研究中，表明甘露寡糖能抑制水生動物腸道有害菌大腸桿菌的生長，促進有益菌雙歧桿菌和 乳酸桿菌的生長從而優化腸道菌群結構。

3.3 養殖過程中抗生素的使用以及水體消毒殺菌

在養殖過程中，魚體會因為各種原因誘發疾病，在疾病的診療過程中，一般會使用外用消毒劑和內服抗生素搭配進行治療，這個時候，不僅僅會迫害水體里的有益菌，還會殺滅掉腸道的有益菌，所以在治療之后，基本上都會選擇向池塘投放有益菌進行補充，在飼料里添加有益菌進行補充。

3.4 鹽度

大量的研究顯示鹽度對魚腸道微生物有一定的影響。但是有關鹽度對乳酸菌影響的研究僅有一篇報道。Ringo等報道嘉魚飼養于海水中其腸道內容物中乳酸桿菌的數量減少明串珠菌和鏈球菌數量則保持不變。但是作者并沒有研究鹽度對嘉魚不同腸段乳酸菌的影響。目前國內有許多育種專家試圖利用淡水來養殖某些名貴海水魚種這無疑會影響到魚類的腸道微生物菌群自然也會影響到魚類的健康，因此今后應當加強鹽度對魚類消化道微生物及健康的影響研究，為海水魚類的淡水養殖提供理論基礎。

4 乳酸菌在實踐上的應用數據

本數據主要采集于湖南漁美康生物技術集團有限公司，其中數據產品為漁美康肝腸健，其主要成分為：包膜乳酸菌、豬膽粉、維生素等；漁美康美康1號，其主要成分為：包膜乳酸菌。本實踐生產數據以華中區域四大家魚養殖集中區域為主要實驗產區，本實驗數據采取橫向對比對比的方式，直觀地顯示出以乳酸菌為主要成分的產品，在實踐生產中的實際作用。

5 乳酸菌未來的發展

乳酸菌作為魚類胃腸道固有菌群的重要組成部分，其在胃腸道中發揮的作用正逐漸得到人們的重視。在養殖環境和養殖資源越來約具有挑戰性的未來，如何利用好乳酸菌，是一個長遠而且有必要的工作。乳酸菌不僅僅可以挑選適合的菌株應用于飼料上，還可以應用于水體環境的改良，但是每一種菌種都有雙面性，在開發利用的時候，也要注意保護好生物的多樣性和安全性，未來的乳酸菌，一定會造福水產，造福人類！（參考文獻略）