胃癌患者ANXA2、ANXA7水平的變化及其與臨床病理因素和腫瘤標(biāo)志物水平的關(guān)系

阮穩(wěn)穩(wěn)，陳永軍，黃咪

1.安康市人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，陜西 安康 725000；

2.空軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院整形外科，陜西 西安 710000；

3.安康市人民醫(yī)院消化內(nèi)科，陜西 安康 725000

胃癌常發(fā)于胃黏膜上皮，居于消化道惡性腫瘤首位，在胃各個(gè)部位均能發(fā)生病變[1]。胃癌早期多無(wú)明顯癥狀，只有輕微上腹部疼痛，多數(shù)患者表現(xiàn)出食欲減退，部分患者進(jìn)食過(guò)多腹部脹痛明顯[2]。病癥到達(dá)晚期時(shí)，癌腫擴(kuò)散，患者會(huì)出現(xiàn)持續(xù)性劇烈疼痛，可放射至腰背部，患者全身癥狀進(jìn)一步加重，日漸消瘦、疲乏、貧血，嚴(yán)重危害機(jī)體健康[3-4]。膜聯(lián)蛋白A2(annexin A2，ANXA2)在外周血中分泌，是一種外分泌形式蛋白，在病毒感染與膽囊腺癌診斷中有一定價(jià)值[5]。膜聯(lián)蛋白A7(annexin A7，ANXA7)為具有相結(jié)合型的蛋白，能夠與Ca2+相結(jié)合產(chǎn)生對(duì)磷脂的依賴性，其亞細(xì)胞水平異常結(jié)合與很多腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移以及浸潤(rùn)有著密切關(guān)系，其能夠促進(jìn)癌細(xì)胞增生，癌腫的分化程度越低，ANXA7表達(dá)水平越少[6]。腫瘤標(biāo)志物是細(xì)胞在血液里釋放出來(lái)的物質(zhì)，每一種腫瘤都有相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物，當(dāng)人體內(nèi)出現(xiàn)惡性腫瘤時(shí)，其水平會(huì)升高，對(duì)于癌腫的預(yù)測(cè)有很好的價(jià)值。基于此，本研究對(duì)胃癌患者ANXA2、ANXA7表達(dá)水平的變化及其與臨床病理因素和腫瘤標(biāo)志物水平的關(guān)系進(jìn)行研究，以期為胃癌的診斷與后續(xù)治療提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料選取安康市人民醫(yī)院2019年6月至2021年6月收治的80例胃癌患者作為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)過(guò)臨床診斷，病理組織檢查確診為胃癌者；(2)既往從未治療，首次在本院開(kāi)始治療者；(3)臨床資料完整者；(4)患者及其家屬均簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他惡性腫瘤者；(2)精神異常無(wú)法配合者；(3)不同意提供其癌旁組織標(biāo)本者；(4)合并有感染性疾病者。80例胃癌患者中男性46例，女性34例；年齡54～75歲，平均(58.46±6.20)歲；癌腫直徑≥5 cm 35例，＜5 cm 45例；組織分化程度：高分化12例，中分化25例，低分化43例；TNM分期Ⅰ～Ⅱ期32例，Ⅲ～Ⅳ期48例。所有患者均行手術(shù)治療，術(shù)中取胃癌癌腫組織標(biāo)本作為癌癥組，同時(shí)取癌旁組織標(biāo)本作為癌旁組。另選取同時(shí)間來(lái)我院體檢的健康者80例作為對(duì)照組。對(duì)照組中男性45例，女性35例；年齡53～76歲，平均(57.64±7.01)歲。觀察組和對(duì)照組受檢者的性別和年齡比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 ANXA2、ANXA7表達(dá)水平測(cè)定觀察組檢測(cè)癌組織標(biāo)本與癌旁組織標(biāo)本，對(duì)照組健康群體僅檢測(cè)血清。癌組織標(biāo)本、癌旁組織標(biāo)本經(jīng)過(guò)4%的中性緩沖甲醛浸泡，浸泡之后用常規(guī)的石蠟包埋，所有標(biāo)本均要裹上石蠟，包埋之后加入多克隆抗體進(jìn)行克隆，按照1∶400的比例進(jìn)行稀釋后用免疫組SP法染色試劑盒相關(guān)操作說(shuō)明進(jìn)行染色，以磷酸鹽緩沖液(PΒS)替代一抗作為陰性去對(duì)照。結(jié)果判讀：利用顯微鏡隨機(jī)用5個(gè)視野來(lái)觀察，利用陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞的著色強(qiáng)度，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞百分率。陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞著色強(qiáng)度：沒(méi)有著色-0分，淺黃色-1分，棕黃色-2分，棕褐色-3分；百分率：陽(yáng)性細(xì)胞＜25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，76%以上為4分，兩種標(biāo)準(zhǔn)相乘結(jié)果＞1為陽(yáng)性，≤1為陰性。

1.2.2 腫瘤標(biāo)志物水平測(cè)定在清晨空腹抽取所有患者(治療前)外周血5 mL，對(duì)照組于體檢當(dāng)日清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取外周血5 mL，所有血液標(biāo)本通過(guò)離心分離出血清，用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清中ANXA2、ANXA7、癌胚 抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)、甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)、糖抗原19-9(carbohydrate antigen 19-9，CA19-9)及 糖抗原24-2(carbohydrate antigen 24-2，CA24-2)。

1.3 觀察指標(biāo)(1)比較癌癥組和癌旁組標(biāo)本的ANXA2、ANXA7表達(dá)水平；(2)分析胃癌組織ANXA2、ANXA7表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系；(3)比較觀察組和對(duì)照組血清ANXA2、ANXA7表達(dá)水平及腫瘤標(biāo)志物水平的差異；(4)分析胃癌患者血清ANXA2、ANXA7水平與腫瘤標(biāo)志物的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，等級(jí)資料比較采用秩和檢驗(yàn)；計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；血清ANXA2、ANXA7與腫瘤標(biāo)志物的關(guān)系采用Pearson相關(guān)性分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組標(biāo)本的ANXA2、ANXA7表達(dá)水平比較癌癥組標(biāo)本ANXA2、ANXA7的陽(yáng)性率明顯高于癌旁組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組標(biāo)本的ANXA2、ANXA7表達(dá)水平比較[例(%)]

2.2 胃癌組織ANXA2、ANXA7表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系A(chǔ)NXA2、ANXA7表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤直徑均無(wú)關(guān)(P＞0.05)，與腫瘤分化程度、TNM分期有關(guān)(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

表2 胃癌組織ANXA2、ANXA7表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系(例)

2.3 兩組受檢者的血清ANXA2、ANXA7和腫瘤標(biāo)志物水平比較觀察組患者血清ANXA2、ANXA7水平與CEA、AFP、CA19-9、CA24-2水平明顯高于對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表3。

表3 兩組受檢者的血清ANXA2、ANXA7和腫瘤標(biāo)志物水平比較(±s)

表3 兩組受檢者的血清ANXA2、ANXA7和腫瘤標(biāo)志物水平比較(±s)

組別觀察組對(duì)照組t值P值例數(shù)80 80 ANXA2(μg/L)23.1±6.2 4.3±1.8 26.046 0.001 ANXA7(ng/L)75.2±16.4 61.3±13.2 5.906 0.001 CEA(μg/L)9.7±2.4 2.8±1.3 22.611 0.001 AFP(μg/L)17.2±7.3 13.9±6.8 2.959 0.004 CA19-9(U/mL)48.4±6.3 27.5±5.4 22.529 0.001 CA24-2(U/L)3.3±1.5 2.1±1.6 4.894 0.001

2.4 血清ANXA2、ANXA7水平與腫瘤標(biāo)志物的相關(guān)性將胃癌患者血清ANXA2、ANXA7與CEA、AFP、CA19-9、CA24-2水平進(jìn)行Pearson相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，血清ANXA2、ANXA7水平與CEA、AFP、CA19-9、CA24-2呈正相關(guān)(P＜0.01)，見(jiàn)表4。

表4 ANXA2、ANXA7水平與腫瘤標(biāo)志物的相關(guān)性

3 討論

胃癌多發(fā)于45歲以上人群，可按照其形態(tài)特點(diǎn)和浸潤(rùn)方式分為四種類型：Ⅰ型，結(jié)節(jié)型，呈菜花樣；Ⅱ型，潰瘍局限性，似胃潰瘍；Ⅲ型：浸潤(rùn)潰瘍型，占50%；Ⅳ型：彌漫浸潤(rùn)型，胃壁顯著增厚變硬[7-8]。胃癌主要治療手段是手術(shù)切除，輔以化學(xué)療法和放射療法。免疫治療是臨床常用療法之一，能夠有效提高癌細(xì)胞擴(kuò)散抵抗力[9-10]。由于胃癌早期無(wú)明顯癥狀，當(dāng)疾病被檢出時(shí)，癌腫已發(fā)生擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致手術(shù)療效差，蛋白水平變化在多種惡性腫瘤早期診斷與預(yù)后評(píng)估中發(fā)揮了重要作用，將蛋白水平與胃癌相關(guān)生物因素結(jié)合或可為疾病診斷與治療提供支撐[11-12]。

既往有研究發(fā)現(xiàn)ANXA2、ANXA7等蛋白生物分子可用于胃癌的診斷，而國(guó)內(nèi)對(duì)于蛋白類研究甚少[13-14]。ANXA7的表達(dá)缺失與腫瘤發(fā)展有著密切的關(guān)系，在胃癌中分化越差A(yù)NXA7表達(dá)越少[15]。ANXA2是一種有著多種生物效能的蛋白質(zhì)，能夠與細(xì)胞跨膜實(shí)現(xiàn)運(yùn)輸，與細(xì)胞外受體產(chǎn)生一定活性，還有信號(hào)之間轉(zhuǎn)換傳導(dǎo)功能[16-17]；謝小龍等[18]研究胰腺癌患者血清ANXA2及與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)，胰腺癌患者血清ANXA2水平異常升高，血清ANXA2在評(píng)估病情程度和預(yù)后中具有一定價(jià)值，這與本研究結(jié)論相符合。本研究結(jié)果中，癌癥組的ANXA2、ANXA7的陽(yáng)性率(62.5%、65.9%)高于癌旁組(21.3%、18.8%)，說(shuō)明ANXA2、ANXA7在胃癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率占比很大。萬(wàn)愛(ài)民等[19]研究提出臨床病理因素、癌腫的大小、其所在位置、組織學(xué)類型、病理分期以及淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移與胃癌標(biāo)本的生存和預(yù)后有著密切關(guān)系。本研究中發(fā)現(xiàn)，ANXA2、ANXA7表達(dá)水平與患者性別、年齡、腫瘤直徑均沒(méi)有關(guān)系，與腫瘤分化程度、TNM分期有關(guān)，這說(shuō)明腫瘤的分化程度越高，TNM分期越高，ANXA2、ANXA7越高，說(shuō)明ANXA2、ANXA7高表達(dá)影響著胃癌發(fā)生、蔓延、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。

此外，CEA、AFP、CA19-9、CA24-2是腫瘤明顯標(biāo)志物。在本研究中，觀察組患者血清ANXA2、ANXA7水平高于對(duì)照組，進(jìn)一步證實(shí)了ANXA2、ANXA7對(duì)早期胃癌的檢測(cè)有著極大的意義。同時(shí)，本研究采用Pearson相關(guān)結(jié)果顯示，胃癌患者血清ANXA2、ANXA7水平與CEA、AFP、CA19-9、CA24-2呈明顯正相關(guān)，這說(shuō)明ANXA2、ANXA7或可與腫瘤標(biāo)志物相同，在胃癌診斷與評(píng)估中發(fā)揮一定價(jià)值。

綜上所述，胃癌患者血清ANXA2、ANXA7存在異常高表達(dá)，與血清腫瘤標(biāo)志物水平有一定聯(lián)系。同時(shí)，與癌旁組織相比，胃癌患者癌組織中ANXA2、ANXA7陽(yáng)性率更高，其表達(dá)與腫瘤分化程度、TNM分期等臨床病理因素有關(guān)。但本研究不足之處在于未對(duì)ANXA2、ANXA7表達(dá)進(jìn)行多因素分析，未排除其他影響ANXA2、ANXA7表達(dá)的因素，仍有待后期完善研究再進(jìn)一步加以證實(shí)。