阿拉善雙峰駝直腸電刺激法采精初步探索

孟克巴依爾，朱莉仙，其其格，聶 慧，艾爾青薩仁高娃，烏力吉，莫日根畢力格

（1.阿拉善盟畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣中心，內(nèi)蒙古 阿拉善 750300；2.阿拉善左旗動物疫病預(yù)防控制中心，內(nèi)蒙古 阿拉善 750300）

阿拉善雙峰駝在畜牧業(yè)生產(chǎn)中占有舉足輕重的地位，是阿拉善盟兩大優(yōu)勢畜種之一[1]。連續(xù)干旱、草場退化和破壞、市場價格因素、退牧還林還草和牧民搬遷轉(zhuǎn)移等因素導(dǎo)致出現(xiàn)了“人退帶駱駝退”的情況，受諸多因素影響使得阿拉善雙峰駝數(shù)量急速下降[2]。阿拉善雙峰駝保種工作迫在眉睫，阿拉善雙峰駝被我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部于2006年發(fā)布662號公告重列入國家級畜禽遺傳資源保護(hù)名錄[3]。2008年，阿拉善左旗雙峰駝保護(hù)區(qū)和保種場被確定為國家級保護(hù)區(qū)和保種場。2011年08月17日，“阿拉善雙峰駝”被中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部批準(zhǔn)實施農(nóng)產(chǎn)品地理標(biāo)志登記保護(hù)。2020年7月27日，阿拉善雙峰駝入選中歐地理標(biāo)志第二批保護(hù)名單。政府高度重視阿拉善雙峰駝的保種繁育工作。

國際上，迪拜在單峰駝的采精、精液液化、冷凍保護(hù)劑的配制以及平衡時間等方面技術(shù)成熟。國內(nèi)對雙峰駝電刺激采精精液目前屬于空白，假陰道采精實施相對困難，對于精液冷凍相關(guān)的文獻(xiàn)及報道極少。目前，阿拉善雙峰駝保種最經(jīng)濟(jì)有效的方法是建立阿拉善雙峰駝的胚胎基因庫，關(guān)鍵技術(shù)是胚胎冷凍保存，但有關(guān)阿拉善雙峰駝胚胎冷凍的相關(guān)研究鮮見報道。為了有效保護(hù)好阿拉善雙峰駝品種優(yōu)質(zhì)資源，我們嘗試通過在阿拉善盟內(nèi)選擇優(yōu)秀的種公駝和母駝，采集精液，冷凍精液，利用現(xiàn)代胚胎技術(shù)，通過供體母駝超數(shù)排卵、采集胚胎等一系列生物技術(shù)而達(dá)到生物基因保種的目的。

為充分發(fā)揮優(yōu)秀種公駝的作用，加快良種繁育保種步伐，改良雙峰駝及其產(chǎn)品質(zhì)量，提高絨、肉產(chǎn)量，增加經(jīng)濟(jì)效益，促進(jìn)養(yǎng)駝業(yè)發(fā)展，探索駱駝人工授精技術(shù)，對開拓和實現(xiàn)荒漠地區(qū)畜牧業(yè)現(xiàn)代化有著重要意義[4]。本試驗對種公駝實施直腸電刺激方法采集精液，為下一步精液理化分析進(jìn)行研究以及駱駝?wù)T導(dǎo)超數(shù)排卵特性提供基礎(chǔ)材料。

1 材料與方法

1.1 試驗地點

阿拉善左旗巴彥浩特鎮(zhèn)巴彥霍德嘎查，采精場所寬敞、平坦、安靜、清潔。

1.2 試驗動物

兩峰駱駝都來自阿拉善雙峰駝種駝場。

每天保證3h左右的運動量，集中飼喂，經(jīng)常調(diào)教訓(xùn)練做到人駱駝親和，防止發(fā)生惡癖。

1.3 試驗儀器（型號）

動物電子采精器 PULSATOR IV（規(guī)格35.6cm×26.4cm×15.2cm *）

顯微鏡 鉑特萊

恒溫水浴鍋 上海博迅（HHS-21-6）

保定架 自制

1.4 動物保定

焊接適合駱駝體型的保定架，固定頭部防止駱駝咬人，將駱駝保定成電刺激時呈犬坐姿勢，如圖1。打開左側(cè)上方的護(hù)欄便于操作時觀察陰莖狀態(tài)及射精情況，打開右側(cè)下方護(hù)欄便于采精。

1.5 精液采集方法

擦洗公駝生殖器、肛門后，將涂抹過潤滑劑的直腸電極棒輕輕插入公駝肛門內(nèi)，深度約20～25cm，接通電源，依照電子采精器9檔設(shè)置，遵循手動擋位設(shè)置由低檔到高檔、斷續(xù)刺激的方法，進(jìn)行通電刺激采精。當(dāng)駱駝在某一檔位電壓刺激下射精后可繼續(xù)斷續(xù)刺激直至射精完畢。

將集精杯對準(zhǔn)駱駝的陰莖，不可與公駝陰莖的方向呈太大角度，通電刺激后觀察陰莖勃起及伸長情況，及時采集精液或在電刺激間歇手捋陰莖，捋出精液。

1.6 預(yù)處理

將采集到的鮮精放置37℃恒溫水浴鍋中，鏡檢。

1.7 液化

1.7.1 準(zhǔn)備

凡是接觸精液的器皿和液化液均應(yīng)放在37℃的恒溫箱中，冷凍液置于室溫備用。

1.7.2 液化處理

將采集的精液鏡檢后，與配置好的液化液按照1：1稀釋（圖2），保存在37℃溫箱中30min，期間不斷用移液器輕輕抽取混合液使其充分液化，每隔5分鐘，觀察液化情況，待完全液化，可觀察精子濃度（用血細(xì)胞計）。

1.7.3 鏡檢

取一滴精液于載玻片上，加蓋蓋玻片后在38℃恒溫裝置的顯微鏡上評定活力，鏡檢活力合格者進(jìn)行冷凍。

2 結(jié)果與分析

2.1 種公駝采精時生殖器形態(tài)

雙峰駝生殖器隨著擋位的變化而變化，在電刺激勃起的形態(tài)如圖3，勃起時長度約為12～20cm，陰莖最前端為一向右向下再向左彎（從后面看）的鉤狀構(gòu)造。

2.2 采精結(jié)果

通過保定架固定好駱駝，電刺激后采集精液，參數(shù)及結(jié)果見表1。

2.3 精液觀察

精液乳白色，無云霧狀，含少量膠狀物質(zhì)，無特殊氣味，如圖4。

2.4 精液品質(zhì)

用滴管攪勻并從中取一滴滴在載玻片上，放置在顯微鏡（400X）下觀察，顯微鏡下精蟲游動（非直線運動），活力強(qiáng)，密度較差。精子呈蝌蚪狀，如圖5，圖6。

精液冷凍后解凍品質(zhì)分析結(jié)果見表2。

表2 精液冷凍后解凍品質(zhì)

3 討論

本次采精是在春季、夏季進(jìn)行，并非駱駝發(fā)情期，屬于反季節(jié)采精。由于駱駝排精情況不同，采出的精液質(zhì)量相對不穩(wěn)定。

收集出精液后需將精液置于37℃的恒溫桶中保存，方便觀察，大多情況下，5歲公駝在電刺激下分泌腺液，腺液為黏稠半透明的稀薄液體，是精液的組成成分之一，但在顯微鏡只能觀察出極少數(shù)精子。

采精當(dāng)日灌新鮮雞蛋20顆，是為了增強(qiáng)營養(yǎng)，提高精液質(zhì)量。公駝飼養(yǎng)良好可以適當(dāng)增加采精次數(shù)。但如果隨意增加采精次數(shù)，不但會降低精液的質(zhì)量，而且會對公駝的生殖機(jī)能以及健康狀況帶來不良影響。

電刺激采精儀是利用低電壓小電流交流電刺激駱駝薦錐部低級神經(jīng)中樞，被刺激后駱駝會不自覺地產(chǎn)生射精過程，達(dá)到采集精子的目的[5]。經(jīng)探索研究，電刺激法能夠刺激雙峰駝陰莖勃起和射精，可以應(yīng)用在生產(chǎn)實踐當(dāng)中。

首次使用電刺激方法進(jìn)行采精，超越了傳統(tǒng)假陰道采精方法，這項技術(shù)的掌握，對提高優(yōu)秀種公駝利用率，加快選育步伐[6]，提高阿拉善雙峰駝的生產(chǎn)性能具有重要意義，意味著我盟在雙峰駝人工保種繁育進(jìn)程中邁出了第一步。