雞關節炎病的辨別診斷技術

張春燕，馮金玲，徐美玉，趙 燁

1.鶴崗市動物疫病預防控制中心，黑龍江鶴崗 154106；2.中國農業大學畜禽疫病診斷研究中心，北京 100193；3.中國農業大學動物醫學院，北京 100193

1 主要致病因素及癥狀

雞關節性疾病的致病因素很多，臨床時做好致病因素診斷，分清疾病類型難度較大。隨著動物營養研究的深入，飼料科技的創新發展，飼料配方配比較以往更科學合理，因B 族維生素、錳等營養元素缺乏和不均衡導致的營養性關節炎在臨床已較為少見。目前，雞關節性疾病的主要病因是感染性因素，病原體主要有葡萄球菌、大腸桿菌、呼腸孤病毒、支原體等[1]。雞關節性疾病主要的臨床癥狀為病雞食欲不振，精神萎靡，單或雙側關節跛行，跗、趾等部位關節腫脹，嚴重時不能站立，呈蹲伏姿勢。剖檢時可見腫脹的關節腔內有黃色漿狀的滲出物。

1.1 細菌性疾病

1.1.1 大腸桿菌型關節炎

大腸桿菌型關節炎是由禽致病性大腸桿菌（APEC）引發的一種條件性細菌病。內臟器官的組織一般不會出現較為明顯的生理病變，只會在關節部位發生一定的病變，一般表現為兩側跗關節明顯腫脹、發熱，內有黃色積液，滑膜囊內有淡紅色或灰白色干酪樣狀的滲出物。大腸桿菌型病一般在臨床還會出現臍炎、腹膜炎、氣囊炎、輸卵管炎、肉芽腫、眼炎等其他多種癥狀[2]。

1.1.2 葡萄球菌型關節炎

對家禽有致病性的葡萄球菌僅有金黃色葡萄球菌（SA）一種，SA 可感染各種禽類，主要的感染途徑為創傷、接觸及空氣傳播。SA 感染在我國家禽中最為常見，可引起化膿性關節炎、禽類腱鞘炎、敗血癥、腳墊腫、臍炎、眼炎等多種疾病[3]，在40 ～60 d 的雛雞中最為常見。患雞多為一側關節腫大，有熱痛感，局部呈紫紅色，甚至黑紫色，破潰以后會形成黑色的結痂或趾瘤。

APEC 和SA 廣泛存在于自然界及雞的體表、腸道和糞便中，能引起多種疾病，其癥狀及病變表現具有多樣性。APEC 會顯著的降低雞的孵化率，雛雞原發性感染的死亡率極高，中大雞原發感染較少，多為因繼發感染或混合感染[4]。臨床上APEC 和SA多發生于飼養環境較差的雞舍，混合感染現象也較常見。

1.2 病毒性關節炎

病毒性關節炎是因感染禽呼腸孤病毒（ARV）引發的一種傳染病，蛋雞、肉雞均可感染，患雞跗關節上方腱囊會出現雙側性的腫脹，發熱。切開可見關節上方腓腸肌腱呈明顯水腫，骨干增生，跗骨脛骨與股骨關節損傷等，滑膜內會有充血或點狀的出血，關節腔內有滲出物，常發生腓腸肌腱的斷裂。有時可見脾臟出現白色壞死灶[5]。ARV 感染后可引起免疫抑制，進而導致宿主對其他病原體的易感性明顯增加。

1.3 雞滑液囊支原體病

雞滑液囊支原體病是雞因感染雞滑液囊支原體(MS)產生的急性或慢性傳染病，可引起傳染性滑膜炎和呼吸道癥狀[6]。早期通常是關節、腱鞘處嚴重的滑膜炎，滑液囊腫脹，分泌物明顯增多且變的渾濁，分泌物一般是灰白色膿性黏液或黃白色纖維素狀干酪樣的物質[7]，并伴有肝臟、脾臟和腎臟腫大。鼻腔、氣管一般無明顯病變，有時可見輕度的氣囊炎[8]。

以上幾種疾病感染后均存在關節腫大，有明顯滲出物為特征的臨床癥狀，根據臨床癥狀及剖檢病理的變化可做出初步的診斷，但最終確診還需采用病毒分離、血清測定等分子生物學方法。

2 實驗室檢測技術

2.1 分子生物學檢測

隨著分子生物學研究的不斷進步，聚合酶鏈反應核酸擴增儀、實時熒光定量PCR 系統及全自動核酸提取儀的普及，以及靈敏快捷的診斷產品的成功研發。聚合酶鏈式反應（PCR）以靈敏度高、特異性強、對標本純度要求相對較低，且簡便快速等特點，成為病原檢測的最佳方法。該方法無需分離病毒或細菌，也無需培養細胞，DNA 粗制品和總RNA 都可以作為擴增模板，直接用于體腔液、血液、組織細胞等臨床標本。無菌采集發病初期的病變部位的關節液、組織，使用商品化熒光定量PCR 試劑盒或普通PCR 設計引物的聚合酶鏈式反應、凝膠電泳技術可以快速對APEC、SA、MS、ARV 進行PCR/RT-PCR 檢測和鑒別診斷。

2.2 血清學檢測方法

血清學檢測方法有快速平板凝集實驗（SPA）、血凝抑制實驗（HI）及酶聯免疫吸附試驗（ELISA），ELISA 更特異、更敏感，也大大提高了檢測效率，大批量開展血清樣品抗體檢測，不僅可以作為臨床診斷方法，還可以用于其他多種病原流行病學的調查，監測血清中相應抗體的水平等。目前市場上存在多種商品化的APEC、SA、MS、ARV 診斷試劑盒可供選擇使用。

3 細菌的分離、鑒定及藥敏試驗

3.1 APEC 與SA 的分離鑒定及藥敏試驗

3.1.1 鏡檢

無菌取病死雞關節液及小號針筒無菌取帶病雞關節液涂片、染色、鏡檢細菌菌落，SA 為革蘭氏陽性菌，可見大量散落或葡萄串狀分布的藍紫色球菌；APEC 為兩端鈍圓的革蘭氏陰性桿菌[9]。

3.1.2 分離培養與鑒定

無菌取病死雞關節液接種在鮮兔血平板和普通瓊脂平板上，37 ℃培養箱孵育24 h，菌落較厚，且光澤，呈圓形的凸起，在血平板菌落的周圍會形成透明狀溶血環，結合鏡檢可判定為SA；如是透明淺灰色的濕潤菌落，接種到麥康凱培養基上，長出呈粉紅色的菌落，結合鏡檢可確定為APEC[10]。

3.1.3 藥敏試驗

用酒精燈灼燒滅菌后的常溫接種環，將待測細菌均勻涂布在平板上，也可挑取待測細菌，于少量生理鹽水中制成細菌懸浮液，再用消毒棉簽均勻涂布在平板培養基的表面，取藥敏片貼到平板培養基表面。將平板培養基在37 ℃培養箱中培養24 h，觀察效果。APEC 和SA 對抗生素有不同程度的耐藥現象，雞場分離的APEC 和SA 對抗生素的敏感性不同。

3.2 MS 的分離鑒定及藥敏試驗

3.2.1 分離培養與鑒定

在無菌狀態下采集相關部位（腫脹的跗關節、爪掌及滑液囊等）的液體內容物，然后在37 ℃，每分鐘150 轉的Frey 氏液體培養基中震蕩培養，當培養基中液體的顏色變成橘黃色時，立即傳代接種到新的Frey 氏液體培養基中，并進行培養物的涂片，姬姆薩染色，油鏡下詳細觀察記錄菌體的形態。同時，在Frey 氏培養平板上將新接種的培養物培養3 ～7 d，而后在低倍鏡下觀察，若見針尖一樣大小，圓潤且無色透明的菌落，即為陽性[11]。

3.2.2 藥敏試驗

不同地區、不同品種的雞對不同種類抗生素（氨基糖苷類、四環素類、林可胺類、大環內酯類、酰胺醇類、喹諾酮類及截短側耳素類等）的敏感性差異較大[12]，需進行相關的藥敏試驗。一般在無菌情況下，通過配制藥物推薦使用濃度8 倍量的溶液進行相關的藥敏試驗。

總之，引起雞關節炎的因素很多，病原也是多樣性的，癥狀也大多較相似，臨床診斷確實存在一定難度。生產實踐中一旦發生發現雞關節病，應通過實驗室最新的檢測技術盡早確定病原，為該病的有效防控、合理用藥提供科學依據。