家畜口蹄疫的免疫抗體檢測方法

張 夢

貴州省黔西南州興仁市農業農村局，貴州黔西南 562300

口蹄疫主要發生于偶蹄動物，因此家畜的發病概率較高，給養殖戶帶來較大的經濟損失。目前該病主要發生在寒冷的冬季和初春，死亡率比較高，已經被世界衛生組織認定為烈性動物傳染病。目前主要采用疫苗免疫來進行該病的防控，借助于免疫抗體檢測能夠更準確的掌握家畜的免疫效果，以便可以及時查漏補缺，降低口蹄疫對家畜的影響，保障養殖戶的經濟效益不受損害。

1 口蹄疫以及免疫抗體檢測概述

口蹄疫是由口蹄疫病毒所引起的偶蹄動物共患的急性、熱性、接觸性傳染病，在家畜養殖中，口蹄疫的發生以牛為首（外來種奶牛、黃牛、牦牛皆極易感染，水牛稍次），其次為豬，再次為綿羊、山羊和駱駝。其中犢牛和仔豬不但易感且死亡率也較高，而且口蹄疫的毒力強弱也會受到季節、氣溫、地理環境、自然條件等因素的影響，差異比較明顯，就當前的獸醫臨床實踐來看，在口蹄疫流行的情況下，牛群的發病率為90%～100%，病毒通過豬3代后發病率高達50%～100%，而羊群發病率較低，為20%～50%，同樣癥狀也會比較輕。

在口蹄疫防控中所采取的主要手段就是疫苗免疫，已經研發成功的口蹄疫疫苗種類主要包括常規滅活疫苗、基因工程疫苗、DNA 疫苗、合成肽疫苗、重組活載體疫苗、可飼疫苗等，其中滅活疫苗是我國重要采取的免疫措施，而我國實行的是強制免疫，每年都需要投入大量的人力、物力、財力等進行免疫工作。但實際上，由于口蹄疫病毒的免疫原性比較弱，再加上受到其他多種因素的影響，因此，臨床中免疫效果不理想甚至免疫失敗的現象屢見不鮮。而免疫抗體檢測能夠充分掌握動物機體內的抗體水平，從而更好的評估免疫工作的效果，對基層工作部門來說也能夠及時掌握免疫注射工作的成效，衡量區域內的疫情風險水平等，從而做好該病的預防工作，降低口蹄疫對家畜養殖產業的負面影響，為養殖戶的經濟效益獲得提供堅實的保障[1]。

2 家畜口蹄疫的免疫抗體檢測方法

2.1 中和抗體

當病原微生物入侵機體中的細胞時，病原體自身表達的特定分子首先會與細胞上的受體結合，以此起到感染細胞的作用，并且還能夠在細胞中進一步進行擴增，B 淋巴細胞會產生中和抗體，這樣在病原微生物侵入機體時就能夠及時產生相應的抗體來改變病毒表面構型，從而阻止病毒吸附于易感細胞，以此可以有效的組織病毒進入到健康的細胞中。同時巨噬細胞還能夠吞噬并清除病毒與中和抗體形成的免疫復合物，如果是有包膜的病毒表面抗原與中和抗體結合后也會激活補體，最終會使得病毒溶解。采用病毒中和試驗來進行免疫抗體檢測也是世界動物衛生組織所推薦的標準防范，但是該實驗中所使用的病毒必須是具有感染性的活病毒。

2.2 結構蛋白抗體

動物機體的免疫系統會識別進入機體的異己蛋白質，并會產生相應的抗體，從而阻斷病原微生物，通過注射滅活疫苗主要就是通過改造已經沒有了病毒的毒性，但實際上并非所有的結構抗體都有抗病毒的作用。以此為基礎可以采用以下幾種方式進行免疫抗疫檢測。

2.2.1 液相阻斷ELISA 抗體檢測試驗（國際貿易指定法）

口蹄疫液相阻斷ELISA 抗體檢測技術具有良好的敏感性、快速診斷性和可重復性,與攻毒保護有很好的相關性,現被廣泛應用于口蹄疫免疫抗體水平的檢測過程中，其在實際應用中還展現出安全性高、適用范圍廣等優勢，能夠擺脫對細胞培養和實驗動物的依賴，因此普通的應用實驗室就可以進行該實驗。其在實際應用中主要有兩個作用：一是可以檢測口蹄疫非免疫動物特異性抗體；二是可以監測免疫抗體，評價口蹄疫疫苗的免疫效力，從而為免疫工作的開展提供科學的依據[2]。

2.2.2 正向間接血凝試驗

正向間接血凝試驗簡單易行，適合基層單位應用。在實際應用中，抗原與其對應的抗體相遇且會在一定的條件下形成抗原抗體復合物，其分子團很小，肉眼看不見，然后需要將抗原吸附(致敏)在紅血球表面，再與抗體結合，這時候可以發現紅血球出現凝集現象，其靈敏度比較高，用于檢測動物血清中的口蹄疫抗體水平有著較高的準確度。

2.2.3 VP1 結構蛋白抗體檢測試驗

當口蹄疫合成肽疫苗免疫后進行抗體檢測時可采用VP1 結構蛋白抗體檢測試驗，其具有高效、特異、快捷及強悍的生物安全性等優點，但其在實際應用中與液相阻斷ELISA 抗體檢測結果存在差異。

3 家畜口蹄疫的免疫抗體檢測流程

3.1 材料與方法

3.1.1 樣品來源

檢測血清主要來源于已經成功注射牛羊o 型-亞洲I 型口蹄疫雙價滅活疫苗的牛血液樣品與羊血液樣品，在21 d 左右的時間進行血樣提取，然后在實驗中需要隨機抽取檢測血清，其中牛羊血清各抽取100 份。進行血清分離，并將其置于4 ℃左右的冰箱保存。注意嚴格分類存放，避免樣品受到污染。

3.1.2 診斷試劑

選用診斷試劑為同一生產批號的口蹄疫O 型正向血凝抗原、陽性血清、陰性血清、稀釋液以及O型口蹄疫液相阻斷ELISA 檢測試劑盒。

3.1.3 檢測方法及結果判定

進行正向間接血凝試驗，選取羊的血清，將抗原(或抗體)包被于紅細胞表面，成為致敏的載體，然后與相應的抗體(或抗原)結合，從而使紅細胞拉聚在一起，這時候會出現可見的凝集反應，如果抗體的效價高于1:32，即可視抗體為合格；按照O型口蹄疫液相阻斷試驗進行操作，如果被檢血清的OD 值高出臨界值，那么為陰性孔，如果低于臨界值，就為陽性孔，需要注意的是，陽性孔的最高稀釋度就是血清的抗體效價，如果高于1:64，可以認為抗體合格[3]。

3.2 結果

通過正向間接血凝檢測，發現抽取的牛羊樣本中，口蹄疫的免疫合格率分別為88%和86%，也就是說在所抽取的100 頭牛和100 只羊中，分別有88 頭和86 只羊的抗體檢測是合格的。

3.3 分析

通過采用正向間接血凝檢測以及液體阻斷檢測方法可以發現，此次檢測結果基本相符，試驗結果科學、可靠。

4 家畜口蹄疫的預防建議

口蹄疫對家畜危害較大，養殖戶在養殖期間也需要加強預防工作，提高對口蹄疫的認識，降低該病的影響。一是要加強飼養管理工作，在養殖期間要為家畜營造一個良好的生長環境，制定科學的衛生消毒制度，保持干凈的衛生，在寒冷的季節尤其要做好保溫工作；二是要嚴格按照家畜的生長階段提供營養充分且均衡的飼料，提高其自身的疫病抵抗能力；三是要重視疫苗免疫，養殖戶應該結合養殖場的實際制定科學的免疫程序，在實際工作中，需要在每年夏秋對豬、牛、羊等家畜進行疫苗免疫，針對外來引種的家畜或者是流動的家畜也需要進行強制性的免疫工作，接種期間還需要做好疫苗過敏反應的處理，從而提高疫苗免疫效果。目前在免疫環節中，由于防疫員因文化、年齡等各方面的差異，或者是設備等方面的問題經常會導致免疫工作達不到預期效果，因此還需要村級動物防疫員充分發揮作用，按照免疫要求及時申報資金，以便進行免疫注射器械和疫苗冷藏設備的更新等。在防疫結束后組織人員對各鄉鎮進行防疫檢測，保證免疫效果，為養殖戶的健康養殖提供保障；四是要加強巡視工作，一旦發生疫情要及時上報，病死家畜要及時進行無害化處理，并使用2%火堿，或10%石灰水，或30%熱草木灰水對被病畜污染的用具、場所等進行全面徹底的消毒；五是要加強藥物預防，比如可以使用一些中草藥進行該病的預防，使用筋骨草、蒲公英、黃花稔、一點紅各120 g，加水煎煮夠灌服給家畜即可取得較好的預防效果[4]。

5 結語

綜上所述，口蹄疫的死亡率較高，一旦形成大規模的流行會給養殖戶造成嚴重的經濟損失，而且其作為一種人畜共患病，對人的健康也有較大的危害，為了保障免疫預防的效果，必須要重視起口蹄疫的免疫抗體檢測工作，嚴格按照相關要求選擇合適的檢測方法，形成對免疫工作的全面監測，保證免疫效果，從而為養殖戶的養殖工作提供保障。