高效液相色譜法檢測貢梨中甲基硫菌靈 及其代謝物多菌靈殘留量

◎ 黃丹萍，熊曉輝，陳 斌，黃 宙

（1.國家輕工業食品質量監督檢測南京站，江蘇 南京 210009；2.南京工業大學 食品與輕工學院，江蘇 南京 210009）

隨著科技的進步和人們生活水平的日益提高，社會對分析研究的需求不斷上升，分析檢測的靈敏度和速度一直是研究者們追求的目標。液相色譜法被廣泛用于食品安全質量控制，因此建立一種高靈敏度、快速、多組分和高通量的農藥殘留定性定量檢測技術是非常必要的[1-4]。高效液相色譜法以其良好的分離效果深受檢測人員的偏愛，在熟悉常規檢測流程的同時也應努力尋找更加完善的實驗方法，并充分掌握與利用這一技術，進而為食品質量安全檢測提供高效、快速、簡便的技術支持[5-7]。本研究基于實驗以及數據分析，探索一種貢梨中甲基硫菌靈及其代謝物多菌靈農藥殘留的測定分析方法。

1 材料與方法

1.1 材料

貢梨，超市采購。

1.2 試劑與儀器設備

乙腈、甲醇，西格瑪奧德里奇（上海）貿易有限公司；PSA粉、無水硫酸鎂、氯化鈉，西隴科學股份有限公司；甲酸，天津市致遠化學試劑有限公司；乙酸，天津市致遠化學試劑有限公司；活性炭粉，天津市北晨方正試劑場；甲基硫菌靈[編號GBW（E）082389]、多菌靈[編號GBW（E）081407]，上海安譜。

液相色譜儀，Waters沃特世科技有限公司；離心機，上海安亭科學儀器廠；分析天平，賽多利斯科學儀器（北京）有限公司；渦旋振蕩器，海門市其林貝爾儀器制造有限公司；氮吹儀，上海安譜科學儀器有限公司；0.22 μm微孔濾膜，上海安譜實驗科技股份有限公司；2 mL一次性醫用滅菌注射器，常州市康復萊醫療用品有限公司；50 mL離心管，上海安譜實驗科技股份有限公司；1.5 mL進樣小瓶，上海安譜實驗科技股份有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 溶液配制

（1）甲基硫菌靈和多菌靈混合標準儲備液 （100 mg·L-1）配制。準確稱量甲基硫菌靈和多菌靈標準品各10 mg，用乙腈溶解并稀釋至100 mL，振蕩搖勻，制備成質量濃度為100 mg·L-1的標準儲備溶液。

（2）甲基硫菌靈和多菌靈混合標準工作溶液 （10 mg·L-1）配制。吸取1 mL濃度為100 mg·L-1的甲基硫菌靈和多菌靈混合標準儲備溶液，用乙腈稀釋至100 mL，制備成10 mg·L-1的甲基硫菌靈和多菌靈混合標準工作液。

（3）混合基質標準工作溶液（1 mg·L-1）配制。吸取甲基硫菌靈和多菌靈標準工作溶液，以乙腈為稀釋液，配 制成質量濃度為0.2 μg·kg-1、0.5 μg·kg-1、 1.0 μg·kg-1、10.0 μg·kg-1、20.0 μg·kg-1和50.0 μg·kg-1的混合基質標準工作溶液。

（4）甲基硫菌靈和多菌靈混合標準使用溶液 （10 μg·L-1）配制。吸取1 mL濃度為1 mg·L-1的甲基硫菌靈和多菌靈混合標準儲備溶液，用乙腈稀釋至100 mL。

1.3.2 樣品前處理

（1）試樣制備。將樣品每個個體按中軸線分成四等分，取相對的兩份，放入勻漿機中制成勻漿，無需去皮。制成勻漿后的樣品，放入已貼有樣品標簽的容器中，待測。

（2）提取。準確稱取試樣5 g，置于50 mL離心管中，加20 mL水，使用超聲儀加熱提取20 min，置室溫冷卻5 min后，再加入10 mL 1%冰乙酸-乙腈試劑，渦旋2 min，然后在樣品溶液中加入1 g氯化鈉和4 g無水硫酸鎂，渦旋2 min，以10 000 r·min-1離心 5 min，靜置，上清液等待凈化。

（3）凈化。使用移液槍準確吸取1 mL上清液，轉移到裝有55 mg PSA粉末、55 mg C18粉末的2 mL聚丙烯離心管中，渦旋均質1 min，以10 000 r·min-1的速度離心5 min，然后用無菌注射器吸取上清液 0.5 mL，過微孔濾膜（0.22 μm），用于上機測定。

1.3.3 液相色譜參數條件

聚苯乙烯柱：C18，7.8×100 mm，10 μm；流動相：甲醇∶水（體積比）=7∶3；進樣量：10 μL；柱溫：35 ℃；流速：0.4 mL·min-1；梯度洗脫。

2 結果與分析

2.1 方法優化

2.1.1 液相色譜條件的優化

轉移2 mL甲基硫菌靈和多菌靈混合標準使用溶液于進樣小瓶中，通過液相色譜儀檢測，結果見表1，流動相及梯度洗脫條件見表2。

表1 多反應檢測條件表

表2 流動相及梯度洗脫條件表

2.1.2 提取溶劑的優化

乙腈較丙酮和甲醇提取效率更好，適當加入乙酸后的提取效率更高，因此本實驗選擇超純水和1%冰乙酸-乙腈作為本次提取溶劑。

2.1.3 提取溶劑用量的優化

分 別 用5 mL、10 mL、20 mL、30 mL和40 mL的1%冰乙酸-乙腈提取經過超純水初步處理的含一定量標準物質的貢梨樣品，測定其回收率。結果表明，提取液體積為5 mL時，回收率為54.5%～83.2%；提取液體積為10 mL時，回收率為72.6%～94.1%；提取液體積為20 mL時，回收率為73.1%～99.7%；提取液體積為30 mL時，回收率為74.8%～99.9%；提取液體積為40 mL時，回收率為75.2%～101.6%。綜合效率和節約試劑兩方面考慮，選用提取溶劑用量 為10 mL。

2.2 方法的線性范圍、檢出限和定量限

甲基硫菌靈和多菌靈在濃度0.2～50.0 μg·kg-1呈良 好的線性關系，甲基硫菌靈線性方程為Y=-8 150+27 000X， 相關系數R2=0.999 8；多菌靈線性方程為Y=3 970+34 400X， 相關系數R2=0.999 9。采用低濃度標準品加入法，甲基硫菌靈加標后樣品含量為0.1 mg·kg-1，對應的信噪比為693，計算得到檢出限為0.000 4 mg·kg-1，定量限為0.001 4 mg·kg-1。

2.3 回收率及精密度實驗

實驗選擇加標濃度為100 μg·kg-1、500 μg·kg-1、 2 200 μg·kg-1的甲基硫菌靈標準品，測定貢梨樣品中甲基硫菌靈回收率；另選擇加標濃度為26 μg·kg-1、 500 μg·kg-1、2 000 μg·kg-1的多菌靈標準品，測定貢梨樣品中的多菌靈回收率。甲基硫菌靈以及多菌靈的回收率的測定結果分別見表3、表4。由表3、表4可知，甲基硫菌靈以及多菌靈的回收率分別為90.5%～103.4%和92.0%～101.6%。甲基硫菌靈的平均回收率為93.3%～100.2%，相對標準偏差為1.8%～2.4%；多菌靈的平均回收率為94.5%～99.1%，相對標準偏差為1.9%～2.9%。甲基硫菌靈和多菌靈的平均回收率和相對標準偏差均達到國家標準。

表3 甲基硫菌靈回收率測定結果和精密度結果表（n=6）

表4 多菌靈回收率測定結果和精密度結果表（n=6）

3 結論

本文確定以1%冰乙酸-乙腈為提取劑，氯化鈉和無水硫酸鎂輔助水相和有機相分離，使用QuEChERs的方法（C18粉末、PSA粉末、無水硫酸鎂混合）凈化上清液，外標法定量，借助高效液相色譜儀對樣品中甲基硫菌靈及其代謝物多菌靈農藥殘留量進行研究。結果表明，甲基硫菌靈及其代謝物多菌靈的線性關系良好，相關系數、檢出限范圍、定量限范圍、平均回收率和相對標準偏差均達到了GB/T 27404—2008的要求。按照本研究方法，實際檢測樣品的甲基硫菌靈及其代謝物多菌靈農藥殘留量檢出率和超標率為0，說明甲基硫菌靈及其代謝物多菌靈在貢梨中的使用是安全的。