皮膚鱗狀細(xì)胞癌73例血清膜聯(lián)蛋白A2的表達(dá)水平及與預(yù)后的關(guān)系

黃友光

作者單位：濟(jì)寧市皮膚病防治院檢驗(yàn)科，山東 濟(jì)寧 272007

皮膚鱗狀細(xì)胞癌（CSCC）是一種起源于皮膚表皮或表皮附屬角質(zhì)層形成細(xì)胞的一種非黑色素瘤皮膚癌癥之一［1］。CSCC好發(fā)于皮膚白皙、易曬黑人種，發(fā)病率僅次于基底細(xì)胞癌，占所有皮膚惡性腫瘤的15%~25%，此種疾病好發(fā)于老年人，50歲以上較多，但最常見于70歲，且男性患病率是女性的2倍［2-3］。該腫瘤呈逐級(jí)發(fā)展演變進(jìn)程，臨床表現(xiàn)多樣，具有侵襲性，可通過淋巴結(jié)、血液途徑轉(zhuǎn)移，研究顯示，大多原發(fā)性病灶，5年復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率分別為5%和8%，死亡率約1%，其中頭面部CSCC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)比其他部位高，且近來頭面部CSCC病人呈增加趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅病人生命健康［4-5］。膜聯(lián)蛋白是一類鈣磷脂結(jié)合蛋白超家族，其中膜聯(lián)蛋白A2是A家族一個(gè)重要成員，主要存在于人來組織器官中，參與細(xì)胞增殖、凋亡及分化，在外陰硬化性苔蘚疾病及外陰鱗癌、結(jié)直腸癌、肝癌、胰腺導(dǎo)管腺癌、上皮性卵巢癌等惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用［6-10］。然而關(guān)于膜聯(lián)蛋白A2在CSCC中的作用研究較少，因此本研究擬探究CSCC病人血清膜聯(lián)蛋白A2表達(dá)水平及其與預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料根據(jù)樣本量計(jì)算公式：n=Z2×［P×（1-P）］/E2計(jì)算樣本量，其中n為樣本量，Z為置信區(qū)間，P為概率值，E為誤差值，設(shè)定P=0.5，設(shè)定E=10%，設(shè)定Z=1.64，得出本研究所需樣本量為73例。本研究通過對(duì)2011年10月至2014年3月濟(jì)寧市皮膚病防治院收治的CSCC病人根據(jù)上述公式隨機(jī)數(shù)字表法抽取73例且均符合此次研究的納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，其中年齡范圍36~82歲，年齡（63.57±10.41）歲；男性48例，女性25例；發(fā)病于頭部者48例，于面部者25例；根據(jù)原發(fā)灶類型分為瘢痕組織12例，局部腫塊47例，其他類型14例；根據(jù)有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分為有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者10例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者63例；根據(jù)癌組織分化程度分為低分化者12例，中分化者15例，高分化者46例；根據(jù)癌組織侵犯深度分為表皮40例，真皮20例，皮下組織13例。另取同時(shí)期門診健康體檢者血清標(biāo)本73例為對(duì)照組，年齡范圍35~83歲，年齡（64.19±10.35）歲，男性46例，女性27例。兩組受試者年齡、性別比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。收集受試者所有臨床資料，本研究經(jīng)過濟(jì)寧市皮膚病防治院道德倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過（14-0635），所有樣品采集及資料調(diào)查均取得病人及其近親屬知情同意并簽字確認(rèn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn)：①在該院住院治療并經(jīng)病理檢查確診為CSCC病人；②均行手術(shù)切除病灶；③臨床資料及隨訪資料完整；④自愿配合參加本次調(diào)查研究并遵循醫(yī)囑配合治療者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤或癌癥轉(zhuǎn)移病人；②有頭部或面部手術(shù)史者；③隨訪過程中死于其他疾病或意外者；④患有遺傳性疾病或傳染性疾病者。

1.3 血清膜聯(lián)蛋白A2水平檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）檢測(cè)受試者血清膜聯(lián)蛋白A2水平（美國(guó)Invitrogen，貨號(hào)03-4400），具體操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 隨訪每月對(duì)術(shù)后CSCC病人進(jìn)行電話或入院復(fù)查隨訪，共隨訪5年，以2019年7月31日為隨訪截止日期，死亡或復(fù)發(fā)病人以死亡、復(fù)發(fā)日期為截止日期。采用臨床視診、初診及影像學(xué)檢查等方法對(duì)病人進(jìn)行隨訪復(fù)查，根據(jù)隨訪結(jié)果，其中死亡、局部復(fù)發(fā)、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者為預(yù)后不良組共19例，未發(fā)生死亡、復(fù)發(fā)或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者為預(yù)后良好組共54例。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布計(jì)量資料以±s表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA檢驗(yàn)），方差分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義者再進(jìn)一步采用SNK-q進(jìn)行檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Cox回歸模型進(jìn)分析影響CSCC病人不良預(yù)后的危險(xiǎn)因素。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CSCC組與對(duì)照組血清膜聯(lián)蛋白A2水平比較CSCC組病人血清膜聯(lián)蛋白A2（64.78±6.23）μg/L水平顯著高于對(duì)照組（16.45±5.64）μg/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=49.14，P<0.001）。

2.2 血清膜聯(lián)蛋白A2水平與皮膚鱗狀細(xì)胞癌（CSCC）病人臨床病理參數(shù)的關(guān)系血清膜聯(lián)蛋白A2水平與CSCC病人年齡、性別、發(fā)病部位、原發(fā)灶相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、侵犯深度有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05），詳見表1。

表1 血清膜聯(lián)蛋白A2水平與CSCC病人臨床病理參數(shù)的關(guān)系/±s

表1 血清膜聯(lián)蛋白A2水平與CSCC病人臨床病理參數(shù)的關(guān)系/±s

參數(shù)年齡≤50歲50~65歲≥65歲性別男 女發(fā)病部位頭部面部原發(fā)灶瘢痕局部腫塊其他淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有 無分化程度低中高侵犯深度表皮真皮皮下例數(shù)16 23 34 48 25 48 25 12 47 14 10 63 12 15 46 40 20 13膜聯(lián)蛋白A2/（μg/L）63.54±10.03 65.42±10.26 65.47±10.53 66.08±10.25 65.39±10.42 64.75±10.72 65.48±10.65 66.12±9.68 65.23±10.32 64.91±10.24 75.84±10.13 60.42±10.06 70.52±10.11 65.97±9.26 60.15±8.43 62.53±9.34 69.84±10.42 76.95±11.06 t（F）值（0.21）0.27 0.28（0.05）4.50（7.51）（11.34）P值0.808 0.787 0.783 0.951<0.001 0.001<0.001

2.3 不同預(yù)后結(jié)局CSCC病人血清膜聯(lián)蛋白A2水平比較與預(yù)后良好組（60.09±10.25）μg/L比較，預(yù)后不良組CSCC病人血清膜聯(lián)蛋白A2（69.67±10.62）μg/L水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.47，P<0.001）。

2.4 Cox分析影響CSCC病人不良預(yù)后的危險(xiǎn)因素以CSCC病人預(yù)后結(jié)局為因變量，以年齡、性別、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵犯深度及血清膜聯(lián)蛋白A2水平為自變量，單因素分析發(fā)現(xiàn)，分化程度高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵犯深度及血清膜聯(lián)蛋白A2水平高是影響CSCC病人預(yù)后的危險(xiǎn)因素（P<0.05）。Cox多因素分析發(fā)現(xiàn)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵犯深度及血清膜聯(lián)蛋白A2水平高是影響CSCC病人預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因 素［HR=2.547、2.726、3.520；95%CI：（1.518，3.274）、（2.035，3.652）、（1.701，7.284），均P<0.001］。詳見表2。

表2 影響皮膚鱗狀細(xì)胞癌（CSCC）病人不良預(yù)后的Cox回歸分析

3 討論

膜聯(lián)蛋白A2又名p36，該基因定位于15號(hào)染色體，包含13個(gè)外顯子和12個(gè)內(nèi)含子，是Annexin超家族中一個(gè)重要成員，具有鈣磷脂結(jié)合特性，廣泛分布于細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜中［9］。研究發(fā)現(xiàn)，膜聯(lián)蛋白A2可促進(jìn)細(xì)胞DNA合成及RNA的翻譯過程，還可通過Toll樣受體4與巨噬細(xì)胞、β2糖蛋白I共同作用影響纖溶酶系統(tǒng)，參與纖維酶的形成，加速局部基質(zhì)降解，促進(jìn)新生血管芽生及血管外基質(zhì)重建，在腫瘤血管生成、侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用［11］。牛廣旭等［12］研究報(bào)道，膜聯(lián)蛋白A2在肝細(xì)胞癌組織中呈高表達(dá)，且與肝癌病人腫瘤長(zhǎng)徑、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移有關(guān)。陳雪等［13］研究發(fā)現(xiàn)，膜聯(lián)蛋白A2在人宮頸癌組織及細(xì)胞中表達(dá)水平高于正常宮頸組織及永生化上皮宮頸細(xì)胞。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，CSCC血清膜聯(lián)蛋白A2水平顯著升高，提示血清膜聯(lián)蛋白A2水平升高可能與CSCC發(fā)生有關(guān)。

CSCC致病因素復(fù)發(fā)多樣，常見有日光照射、人乳頭瘤病毒感染、慢性炎癥、免疫抑制等，其發(fā)生發(fā)展一個(gè)逐級(jí)連續(xù)漸進(jìn)性過程，主要包括癌前病變、原位癌、浸潤(rùn)性CSCC及轉(zhuǎn)移性CSCC［14］。研究報(bào)道，膜聯(lián)蛋白A2在多種癌癥中過表達(dá)，且可與腫瘤表面纖溶酶關(guān)聯(lián)，介導(dǎo)細(xì)胞外機(jī)制降解，促進(jìn)血管生成，從而促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)［15-16］。Wu等［17］研究報(bào)道，膜聯(lián)蛋白A2在非小細(xì)胞肺癌中高表達(dá)，與病人臨床高分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及5年總生存率低有關(guān)，且下調(diào)膜聯(lián)蛋白A2表達(dá)可抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖和上皮細(xì)胞間質(zhì)化轉(zhuǎn)移過程。He等［6］研究報(bào)道，膜聯(lián)蛋白A2在結(jié)腸癌組織中過表達(dá)，下調(diào)膜聯(lián)蛋白A2可抑制結(jié)腸癌caco2細(xì)胞及肝癌SMMC7721細(xì)胞活力，其偽足、絲足發(fā)育及微絲和微管聚合明顯受到抑制。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血清膜聯(lián)蛋白A2水平與CSCC病人分化程度高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度增加及預(yù)后不良有關(guān)，提示膜聯(lián)蛋白A2可能與CSCC發(fā)展進(jìn)程及嚴(yán)重程度及預(yù)后有關(guān)，可能通過增加細(xì)胞活力，在CSCC浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中起一定作用，推測(cè)可能是由于膜聯(lián)蛋白A2具有一定的膜磷脂結(jié)合性，其能與細(xì)胞外基質(zhì)如膠原蛋白、肌動(dòng)蛋白及肌腱蛋白C等結(jié)合參與黏附，從而導(dǎo)致CSCC發(fā)生后促進(jìn)腫瘤細(xì)胞黏附而發(fā)生浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移的情況。雖然目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于CSCC與膜聯(lián)蛋白A2發(fā)生關(guān)系尚無研究，但是從上述研究及本研究結(jié)果，認(rèn)為膜聯(lián)蛋白A2在CSCC的表達(dá)或是在分子水平上評(píng)估CSCC發(fā)生以及浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的可能性還是較大的，關(guān)于此結(jié)論還需要進(jìn)一步深入分析。還有研究顯示，復(fù)發(fā)性CSCC相對(duì)于原發(fā)病灶，侵襲性更加明顯，復(fù)發(fā)性CSCC病人病灶轉(zhuǎn)移率為25%~30%，嚴(yán)重影響病人生存質(zhì)量［4］。潘騰等［18］研究報(bào)道，復(fù)發(fā)入院、發(fā)病至就診時(shí)間長(zhǎng)、分化程度低是影響CSCC病人預(yù)后的危險(xiǎn)因素。邱禹杉等［11］研究報(bào)道，膜聯(lián)蛋白A2是肝癌、非小細(xì)胞肺癌、胃癌等多種癌癥細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，且與其癌細(xì)胞發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵犯深度及血清膜聯(lián)蛋白A2水平高是影響CSCC病人預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示檢測(cè)血清膜聯(lián)蛋白A2可能對(duì)CSCC病人預(yù)后評(píng)估有一定指導(dǎo)意義。此外，膜聯(lián)蛋白A2水平與輸卵管癌病人生存率有關(guān)，并且是影響輸卵管癌病人預(yù)后的影響因素［19］。

綜上所述，血清膜聯(lián)蛋白A2水平表達(dá)上調(diào)與CSCC病人淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、侵犯深度有關(guān)，是影響CSCC病人不良預(yù)后的危險(xiǎn)因素。但由于本研究樣本量少，存在不足，另關(guān)于膜聯(lián)蛋白A2在CSCC中具體作用機(jī)制尚不清楚，有待進(jìn)一步增加樣本量、深入探索。