豬瘟病毒致病機制及豬瘟診斷防控

滕祥

（廣西南寧市興寧區(qū)三塘鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站，廣西南寧 530216）

豬瘟（Classical swine fever，CSF）是由豬瘟病毒（引起的一種急性、烈性、高度接觸性傳染病，各年齡段和品種的豬均可感染發(fā)病。該病毒既可通過直接接觸感染豬的分泌物等方式感染，在豬群中水平傳播擴散，也可通過胎盤垂直傳，引起妊娠母豬流產(chǎn)、免疫抑制、容易繼發(fā)感染其他疾病，給世界各地的生豬養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。典型豬瘟感染后臨床癥狀明顯，可以通過隔離、撲殺、緊急免疫等方式有效阻斷病原傳播。但隨著疫苗的使用，規(guī)模化養(yǎng)豬場內(nèi)潛伏感染、慢性感染及持續(xù)感染現(xiàn)象頻發(fā)，這種新的流行特點，給豬瘟的防治與凈化工作的實施帶來了更大的困難和挑戰(zhàn)。本文從豬瘟的致病機理、臨床診斷及科學防控3 個方面展開論述，以期為廣大養(yǎng)殖戶提供科學指導(dǎo)。

1 豬瘟病毒的生物學特性

豬瘟病毒是一種有囊膜的單股正鏈的圓形RNA病毒，屬于黃病毒科，瘟病毒屬。該病毒的遺傳特性相對穩(wěn)定，變異程度低，只有一個血清型，對酸性環(huán)境耐受性強，對熱比較敏感，56℃加熱1h 或60℃加熱10min 即可滅活[1]。根據(jù)豬感染后的病程長短，可分為急性型、亞急性型、慢性型和持續(xù)感染型。根據(jù)豬瘟病毒間毒力的差異，可分為強毒株、中等毒力毒株和無致病力毒株，其中強毒株感染后會在全身迅速擴散，病程短，病豬通常無明顯癥狀就突然死亡，死亡率高。中等毒力毒株感染主要呈現(xiàn)急性型的臨床癥狀，體溫升高、精神沉郁、嗜睡腹瀉、結(jié)膜炎、神經(jīng)癥狀、繁殖障礙等特征性癥狀明顯。而弱毒株僅在特定的靶器官內(nèi)復(fù)制，臨床上以慢性感染和持續(xù)性感染為主，病程較長，臨床癥狀不明顯，剖檢無典型的病理變化，但可以長期存活于豬體內(nèi)，通過口鼻分泌物持續(xù)排毒，感染同群豬，嚴重制約養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展[2]。同時有研究發(fā)現(xiàn)，豬瘟感染后病程受感染豬品種、年齡、性別、免疫狀態(tài)、病毒毒力、數(shù)量等因素影響[2]。豬瘟在感染過程中會抑制宿主的免疫應(yīng)答反應(yīng)，進而維持其持續(xù)性感染狀態(tài)。因此，深入研究豬瘟病毒與宿主免疫應(yīng)答間的相互作用，有助于進一步理解宿主抵抗豬瘟病毒的機制，以及豬瘟病毒逃逸宿主天然免疫應(yīng)答的機理，從而為豬瘟的防控奠定理論基礎(chǔ)。

2 豬瘟病毒的致病機理

豬瘟感染過程更像是與宿主免疫系統(tǒng)進行博弈的一個過程。天然免疫系統(tǒng)作為機體防御微生物感染的第一道防線，在病毒感染早期，可以通過細胞內(nèi)的模式識別受體，特異性地識別病原相關(guān)分子模式，繼而激活I(lǐng)RF3、IRF7 等干擾素調(diào)節(jié)因子及NF-κ B 的表達，調(diào)控干擾素及促炎因子的轉(zhuǎn)錄過程，干擾素的產(chǎn)生又能促進下游一系列干擾素刺激基因（Interferon-stimulated genes，ISGs）的表達，從而抵抗病毒感染[1]。盡管病毒感染能激活宿主天然免疫應(yīng)答反應(yīng)，但豬瘟病毒作為一種免疫抑制病毒，已進化出多種機制逃避宿主的天然免疫應(yīng)答。如豬瘟病毒可以通過將自身分泌的蛋白Erns釋放到細胞外，降解細胞外的dsRNA 和單鏈RNA 分子，或者通過網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進入細胞，在病毒RNA 激活I(lǐng) 型IFN 信號通路前，將病毒RNA 在溶酶體內(nèi)降解，逃避宿主天然免疫反應(yīng)；此外，Erns蛋白還可有效阻止?jié){細胞樣樹突狀細胞與感染豬瘟病毒細胞接觸時的活化作用，致使淋巴細胞凋亡，從而將病毒傳染到以內(nèi)皮細胞、淋巴細胞、巨噬細胞、某些類型的上皮細胞及神經(jīng)細胞中，最后通過誘導(dǎo)細胞自噬或調(diào)控NF-κB 信號通路等方式，導(dǎo)致白細胞、B 細胞、CD4+、CD8+T 細胞數(shù)明顯減少，破壞宿主免疫系統(tǒng)，以此逃避宿主的免疫應(yīng)答反應(yīng)，為維持自身持續(xù)感染創(chuàng)造條件，這也是豬瘟病毒導(dǎo)致豬只急性死亡的主要原因。其二，豬瘟病毒的Npro蛋白可以通過與IRF3 相互作用，誘導(dǎo)IRF3 的泛素化和蛋白酶體降解，抑制IFN-β 和IFN-α的產(chǎn)生，或者通過抑制細胞凋亡反應(yīng)，實現(xiàn)對單核巨噬細胞和血管內(nèi)皮細胞等親嗜性細胞的持續(xù)感染與病毒的大量增殖[1-3]。

豬瘟病毒通常最先侵害病豬的扁桃體，吸附于細胞表面，之后通過細胞膜融合或經(jīng)受體介導(dǎo)的胞飲作用進入感染細胞，經(jīng)淋巴循環(huán)傳播到周圍淋巴組織中，產(chǎn)生強烈的免疫抑制作用。感染早期，豬瘟病毒在淋巴組織基質(zhì)的單個或成團細胞中復(fù)制增殖[3]。隨著被感染細胞的增多，通過外周血液循環(huán)，進一步在脾臟、骨髓、內(nèi)臟淋巴結(jié)等組織的全部基質(zhì)細胞中定植、增殖。然后，豬瘟病毒侵入皮膚生發(fā)層、舌的中間層、舌涎腺，扁桃體中的類RE 細胞、腦中的神經(jīng)元及膠質(zhì)細胞、外周單核白細胞、枯否氏細胞及血管竇狀隙等不斷復(fù)制增殖，導(dǎo)致高水平病毒血癥的發(fā)生，病豬出現(xiàn)抽搐、顫抖等神經(jīng)癥狀。病毒感染過程中還會巨噬細胞過度激活，分泌各種誘導(dǎo)細胞凋亡的細胞因子[2]。在感染晚期，病豬扁桃體淋巴結(jié)出現(xiàn)出血、腫大、壞死等病理變化，扁桃體潰爛、壞死。腸系膜淋巴結(jié)和扁桃體也會出現(xiàn)類似的病理變化，小腸和大腸中有纖維性滲出物，黏膜及黏膜下層出現(xiàn)紐扣狀潰瘍甚至壞死，脾臟梗死。除此之外，病豬內(nèi)皮細胞會對各種促炎因子、促凝血因子產(chǎn)生強烈的免疫應(yīng)答，導(dǎo)致凝血系統(tǒng)失常，細胞間的縫隙鏈接被抑制，血管通透性改變，皮膚內(nèi)出血變色，嚴重者全身各處均可見出血灶，最后導(dǎo)致病豬死亡[4,5]。基于豬瘟病毒致病機理、傳播機制的研究，有利于更好地診斷、防控該病毒，促進養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。

3 豬瘟病毒常見的診斷方法

對于典型豬瘟病毒，臨床通常通過觀察感染豬的特征性臨床癥狀和病理變化進行初步診斷，但隨著集約化養(yǎng)殖的不斷發(fā)展，非典型、溫和型豬瘟感染不再表現(xiàn)典型的臨床癥狀。因此，需要借助實驗室診斷方法進行確診，常見的實驗室診斷方法包括病毒分離培養(yǎng)、兔體交互實驗、血清學診斷和分子生物學診斷方法。血清學診斷方法主要包括免疫熒光、酶聯(lián)免疫吸附試驗、間接血凝實驗[4,5]。其中免疫熒光實驗可用于檢測豬內(nèi)臟器官中是否存在豬瘟病毒，且操作簡單、檢測成本低，對豬瘟病毒的早期診斷具有重要意義，是豬瘟病毒最常用的診斷方法，酶聯(lián)免疫吸附試驗是規(guī)模化豬場使用最廣的檢測方法，具有靈敏度高、特異性強、操作簡單和檢測時間短等優(yōu)點。間接血凝實驗通常用于免疫抗體的檢測，敏感度相對較低。反轉(zhuǎn)錄-聚合鏈式酶反應(yīng)、熒光定量PCR 技術(shù)及核酸探針等分子生物學實驗也可用于豬瘟病毒的診斷。相較于血清學診斷，基于病毒核酸的分子生物學診斷方法靈敏度更高，特異性也更強，常用于鑒別診斷[5]。此外，還可采集病死豬淋巴結(jié)、脾臟、腎等部位的病料組織，研磨后接種健康家兔，7d 后接種豬瘟兔化弱毒疫苗，豬瘟兔化弱毒苗會引起實驗兔體溫升高，而豬瘟病毒感染并不會導(dǎo)致實驗兔體溫的變化，可以通過監(jiān)測實驗兔的體溫變化狀況進行臨床診斷，此方法稱為兔體交互實驗[6]。

4 豬瘟的科學防控

目前，市場上并沒有針對豬瘟病毒的特效藥物，我國主要采取疫苗接種和撲殺相結(jié)合的綜合防控措施預(yù)防該病的流行，規(guī)模化養(yǎng)豬場更是要全面貫徹落實“預(yù)防為主，防重于治”的方針理念。在飼養(yǎng)過程中，加強飼養(yǎng)管理，保證充足、清潔的飲水，飼喂營養(yǎng)豐富無霉變的飼料，必要時可添加安全、無毒副作用的中草藥制劑等抗病毒藥物，通過藥物預(yù)防，提高仔豬抗病能力。但要注意合理使用抗生素，避免因抗生素濫用或使用違規(guī)藥物導(dǎo)致的豬免疫力下降。此外，及時清理畜舍內(nèi)的糞污垃圾，保持墊草整潔，定期消毒，有效殺滅環(huán)境中的病原微生物，夏天要注意防暑降溫、保證畜舍通風良好，秋冬等寒冷季節(jié)要做好保暖工作，定期消毒，有效殺滅環(huán)境中的病原微生物。此外，減少規(guī)模化養(yǎng)豬場內(nèi)抗生素的使用，避免因濫用抗生素或因使用違規(guī)藥物導(dǎo)致的免疫力下降情況的發(fā)生[7]。

定期對豬場進行豬瘟病原及免疫抗體檢測，種豬和后備豬要逐頭檢測，其他豬群按比例抽測[5]。隱性感染的母豬要及時淘汰，若發(fā)現(xiàn)疑似病例，應(yīng)立即采集病料送有關(guān)部門或?qū)嶒炇疫M行緊急化驗，一旦確診應(yīng)及時報告當?shù)孬F醫(yī)主管部門，隱性感染的母豬要及時淘汰、必要時可以采取撲殺措施，無害化處理病死豬或被撲殺的豬的尸體，對于同群健康豬要進行緊急免疫接種，對所有被污染的場地、用具全面徹底消毒。

規(guī)模化養(yǎng)豬場要堅持“自繁自養(yǎng)，全進全出制”的防控原則。若確實需要引種，引種前應(yīng)對引種地進行實地考察及流行病學調(diào)查，引進后進行隔離飼養(yǎng)2個月，確認健康后方可進場，場內(nèi)采取分群飼養(yǎng)的管理模式。

“疾病防控千萬條，生物安全第一條”。特別是規(guī)模化養(yǎng)豬場在建場選址時要遠離居民區(qū)、屠宰場等場所，養(yǎng)殖場入口要設(shè)立車輛消毒通道及緩沖區(qū)，場區(qū)內(nèi)要進行科學合理的設(shè)計，將生活區(qū)、辦公區(qū)、生產(chǎn)區(qū)分開，生產(chǎn)區(qū)建在下風向，生活區(qū)要位于上風向，生產(chǎn)區(qū)內(nèi)分舍飼養(yǎng)，場內(nèi)執(zhí)行嚴格的防疫制度，加強從業(yè)人員的專業(yè)技術(shù)培訓，從思想上提高其對防疫的認知和重視，疫苗接種或生產(chǎn)時注意消毒，防止交叉感染，努力構(gòu)建“疫病防控為核心，安全生產(chǎn)為目的”的養(yǎng)殖模式。

最后，豬場管理人員應(yīng)根據(jù)豬場內(nèi)抗體水平，制定合理的免疫程序，進行免疫接種。通常仔豬在20、60 日齡各接種1 次；育肥豬5 周齡首免，9 周齡時二免；后備母豬23 周齡免疫1 次；生產(chǎn)母豬分娩前4周免疫1 次，5 胎以上的母豬同樣進行免疫；種公豬每4 月免疫1 次；免疫后動態(tài)監(jiān)測抗體水平，降低豬群感染風險，避免妊娠傳播，污染嚴重的豬場可通過超前免疫抵抗自然感染[8]。接種前還要確認是否存在圓環(huán)病毒等其他免疫抑制病毒感染，避免因免疫抑制，導(dǎo)致免疫失敗的發(fā)生。免疫過程中堅持“一豬一針頭”的原則，避免因免疫時操作不當導(dǎo)致的交叉感染現(xiàn)象。目前市場上常見的疫苗主要包含豬瘟滅活疫苗、弱毒疫苗、亞單位疫苗、活載體疫苗及核酸疫苗等新型疫苗。其中應(yīng)用最多的是豬瘟兔化弱毒苗，該種疫苗對扁桃體中的病毒具有良好的抑制作用，同時還能通過妊娠母豬的胎盤，在不感染胎兒的情況下提高母豬和仔豬的免疫力[5]。

5 展望

豬瘟病毒傳播速度快、流行范圍廣，我國作為世界第一養(yǎng)豬大國，養(yǎng)殖密度大，但集約化程度低，大多數(shù)小型養(yǎng)殖場生物安全意識不夠，場區(qū)內(nèi)設(shè)施落后、飼養(yǎng)環(huán)境差等問題突出，一旦出現(xiàn)陽性病例，感染率極高，導(dǎo)致豬瘟至今難以被徹底消滅。因此，一方面，相關(guān)部門要加強豬瘟病毒的宣傳力度，提高廣大養(yǎng)殖戶的生物安全意識，加強專業(yè)技能培訓，提升養(yǎng)殖戶的綜合養(yǎng)殖能力。另一方面，科研人員要建立非典型豬瘟、溫和型豬瘟的快速診斷和凈化方法，淘汰陽性豬群，凈化母豬群，減少仔豬感染率，加緊研發(fā)新型豬瘟疫苗的研發(fā)速度，雙管齊下，在有效范圍內(nèi)控制豬瘟病毒，推動全國養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展，為實現(xiàn)我國食品安全提供保障。