血管內皮生長因子A在中重度炎癥性腸病患者中的表達及其臨床意義

程海燕，沈哲

炎癥性腸病（IBD）是一組反復發作的慢性炎癥性腸道疾病，主要包括潰瘍性結腸炎（UC）和克羅恩病（CD）。既往研究證實，血管內皮生長因子（VEGF）參與腫瘤血管形成，與腫瘤的發生及發展關系密切[1]。研究發現，VEGF家族與酪氨酸激酶受體結合而調節血管生成的效應，同樣在IBD的發病中可能起著重要作用，而起主要作用的因子為VEGF-A。當腸道黏膜受到缺氧等刺激后，可促使內皮細胞、成纖維細胞、單核細胞、平滑肌細胞及活化的血小板產生大量的VEGF-A[2]，它可促進炎性細胞的遷移、浸潤，導致炎性反應持續存在，損傷腸道屏障，破壞腸道細胞間的緊密連接，從而促進IBD的發生及發展[3]。本研究擬探討VEGF-A在中重度IBD患者中的表達及其臨床意義，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2016年1月至2020年9月浙江省紹興第二醫院收治的30例中重度IBD患者（CD活動指數評分＞450分，UC改良梅奧評分＞6分）的病變結腸黏膜標本及其外周血（觀察組），均符合2018年中華醫學會消化病學分會IBD協作組推薦的診斷標準[4]，其中男20例，女10例；年齡14～74歲，平均（35.9±14.8）歲；中度18例，重度12例。同期選擇30例健康志愿者的正常結腸黏膜標本及其外周血作為正常對照組，其中男14例，女16例；年齡23～51歲，平均（38.3±14.6）歲。兩組性別比及年齡差異均無統計學意義（均P＞0.05）。研究獲得浙江省紹興第二醫院醫學倫理委員會審核批準，受試者均簽署知情同意書。

1.2 酶聯免疫吸附測定（ELlSA）對照組在體檢時空腹，觀察組治療前及治療6個月后清晨空腹，均抽取肘靜脈血2 ml置于促凝管中，自然凝固后，1 500 r/min離心15 min，取血清保存于－80℃冰箱待檢。嚴格按照試劑盒說明書進行ELISA操作，于450 nm處測量吸光度值，使用相關軟件繪制標準曲線并計算血清樣本中VEGF-A含量。

1.3 免疫組化染色 對照組在體檢時，觀察組治療前及治療6個月后，均取內鏡活檢標本2塊，40%甲醛固定后石蠟包埋，全部石蠟標本均行5 mm連續切片，常規脫蠟，水洗，室溫下3%甲醇過氧化氫孵育30 min去除內源性過氧化氫酶，EDTA修復，正常羊血清室溫下封閉，加入即用型鼠抗人VEGF-A單抗，4℃冰箱過夜，PBS清洗，加入二抗，溫育0.5 h，沖洗后DAB顯色，蘇木精對比染色，中性樹膠封片。

結果分析標準：陽性細胞所占的百分比＜25%記1分，26%～50%記2分，＞50%記3分；淺黃色記1分，中等強度黃色記3分，深黃或棕色記5分；按陽性細胞所占的百分比及顯色情況所得分相乘的分值判定各指標表達情況：1～2分判定為低表達（+），3～4分判定為中表達2（+），＞5分判定為高表達3（+）。

1.4 統計方法 數據采用SPSS 21.0軟件分析，計量資料采用均數±標準差表示，采用t檢驗；等級資料采用秩和檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清VEGF-A表達水平比較 觀察組治療前血清VEGF-A表達水平為（381.56±31.21）pg/ml，6 個 月 后 為（250.46±18.97）pg/ml；對 照 組 為（108.76±9.23）pg/ml。觀察組治療前血清VEGF-A表達水平明顯高于對照組（t=13.83，P＜0.05）；觀察組治療后血清VEGF-A表達水平明顯低于治療前，高于對照組（t≥28.46，均P＜0.05）。

2.2 腸黏膜組織VEGF-A表達水平比較 觀察組治療前腸黏膜組織VEGF-A表達水平為3（+）27例，（+）～2（+）3例；治療6個月后為3（+）8例，（+）～2（+）22例。對照組均為（+）～2（+）。觀察組治療后腸黏膜組織VEGF-A表達水平明顯低于治療前，高于對照組（2=41.71、49.10，均P＜0.05）。見封三彩圖5～7。

3 討論

IBD是一類慢性反復發作的疾病，特別是對于存在嚴重活動性炎癥的患者，不僅影響生活質量，而且威脅生命[5]。腫瘤壞死因子（TNF）-抗體對IBD患者有明顯療效，且已被廣泛應用于臨床，但仍有部分患者出現原發無應答或繼發性失效等情況[6]。因此，尋找更有效的靶向治療是當今國內外學者研究的熱點。研究發現，腸道炎癥與VEGF-A密切相關。Algaba等[6]學者研究發現在實驗性結腸炎小鼠受累的炎性腸段中，黏膜下血管數量增多，并檢測到VEGF-A及其受體高表達。Cromer等[7]發現IBD中血管密度的增加可提示疾病的嚴重程度加重。在人體實驗中，有學者發現在活動期潰瘍性結腸炎患者的血清和血漿中，VEGF-A的表達水平均明顯升高，并且檢測到其受體VEGF-1的表達也增加[4]。Strunk等[8]發現銀屑病和類風濕關節炎患者用類克治療后能顯著降低血清中VEGF-A的表達水平。

本研究探討在IBD患者治療前后及對照組是否也存在VEGF-A的表達水平的改變。研究結果發現，在IBD患者治療前，患者血清中及病變腸道組織VEGF-A的表達水平相對較高，經強的松、硫唑嘌呤及類克等藥物治療6個月后，患者血清及病變腸道組織VEGF-A的表達水平較治療前明顯下降，健康志愿者較治療后患者血清及病變腸道組織VEGF-A的表達水平更低。提示血管生成參與整個疾病的發生發展過程，而血管生成是IBD主要病理學改變之一，VEGF-A介導的血管內皮通透性增加參與了IBD的重要發病機制[9]。