探討細(xì)菌性食物中毒患者病原學(xué)情況及微生物檢驗(yàn)效果

朱曉

（江蘇省邳州市疾病預(yù)防控制中心 檢驗(yàn)科,江蘇 邳州 221300）

0 引言

食物中毒指食入帶有致病菌的食物, 或經(jīng)某一途徑導(dǎo)致致病菌進(jìn)入口腔, 引起機(jī)體的中毒反應(yīng)[1]。該病是食源性疾病中最常見(jiàn)的一種, 具有明顯的人群廣泛性特點(diǎn)[2]。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示, 近些年我國(guó)食品安全問(wèn)題頻頻發(fā)生, 導(dǎo)致食物中毒事件的發(fā)生率隨之升高, 引起了社會(huì)的高度重視, 也成為了一種主要的社會(huì)問(wèn)題[3]。該病的潛伏期短, 發(fā)病急促, 短時(shí)間內(nèi)可能出現(xiàn)多個(gè)患者同時(shí)發(fā)病, 患者病后也常在短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)明顯的惡心、嘔吐、腹瀉、腹痛、暈厥等癥狀, 嚴(yán)重者會(huì)出現(xiàn)脫水, 若不積極治療, 還可能引起更嚴(yán)重的并發(fā)癥, 繼而危及生命安全[4-5]。食物中毒根據(jù)病原物質(zhì)的差異, 可分為細(xì)菌性與非細(xì)菌性?xún)深?lèi), 以前者更為多見(jiàn)；二者相比, 細(xì)菌性食物中毒的病程更短, 恢復(fù)更快, 預(yù)后更好[6]。而對(duì)于細(xì)菌性食物中毒患者的治療, 找準(zhǔn)病原菌是準(zhǔn)確制定治療方案的基本前提[7]。病原學(xué)微生物檢驗(yàn)可通過(guò)微生物檢驗(yàn)技術(shù), 對(duì)細(xì)菌性食物中毒性質(zhì)進(jìn)行查驗(yàn), 能夠及時(shí)找到確切的致病菌種, 且有助于了解生物性有害物質(zhì)的食品種類(lèi)與污染狀況, 可為疾控中心及早防控措施提供參考依據(jù)[8]。基于此, 本研究為了進(jìn)一步探討細(xì)菌性食物中毒患者病原學(xué)情況及微生物檢驗(yàn)效果, 就邳州市疾控中心由于細(xì)菌性食物中毒的60例患者的檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析, 報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 基本資料

選取2020年1月至2021年12月邳州市疾控中心由于細(xì)菌性食物中毒的60例患者作為研究案例, 其中男33例, 女27例；年齡18～59歲, 平均（33.62±7.23）歲；病程4～68h, 平均（27.23±10.11）；體質(zhì)指數(shù)18～26kg/m2, 平均（22.15±1.36）kg/m2；食物類(lèi)型：畜肉類(lèi)與其制品23例, 蛋類(lèi)19例, 奶類(lèi)及其制品11例, 其他7例。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）案例信息完整；（2）年齡18～59歲；（3）經(jīng)相關(guān)檢查證實(shí), 滿(mǎn)足細(xì)菌性食物中毒的診斷規(guī)定, 出現(xiàn)一定程度的惡心、嘔吐、腹瀉、腹痛、暈厥等癥狀；（4）清醒, 配合采樣；（5）本研究符合倫理要求, 并獲得單位批準(zhǔn)。患者及家屬對(duì)研究知情且同意。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）免疫缺陷疾病；（2）血液系統(tǒng)疾病；（3）惡性腫瘤；（4）意識(shí)不清；（5）精神疾病、認(rèn)知功能障礙；（6）孕產(chǎn)婦；（7）不愿意采樣。

1.3 方法

1.3.1 樣本來(lái)源

對(duì)所有患者進(jìn)行檢驗(yàn)和分析, 包括患者的糞便、嘔吐物、肛拭子、手拭子、食品、食品操作間（刀具、砧板、餐具等）的檢驗(yàn)。由醫(yī)院專(zhuān)業(yè)的醫(yī)護(hù)人員采集樣本, 嚴(yán)格遵照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)匯編GB4789系列》《臨床微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化操作》的有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。樣本采集后置于無(wú)菌、陰涼干燥的環(huán)境下進(jìn)行儲(chǔ)存, 盡快送至本疾控預(yù)防中心進(jìn)行檢驗(yàn)。

1.3.2 儀器與試劑

主要儀器：保溫箱、冰箱、恒溫水浴箱、電子天平、菌落計(jì)數(shù)器、PCR（熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）儀、顯微鏡、SC（亞硝酸鹽胱氨酸增菌液）, 20E、HE（瓊脂）平板、MMA（甲基丙烯酸甲酯）平板、兔血漿平板等。

主要試劑：3%的H2O2（過(guò)氧化氫）, 動(dòng)力硝酸鹽培養(yǎng)基, 乳糖膽鹽發(fā)酵管, 緩沖葡糖糖蛋白陳水, 肉湯培養(yǎng)基, 瓊脂培養(yǎng)基等。

1.3.3 檢驗(yàn)方法

參照相關(guān)按照標(biāo)準(zhǔn), 對(duì)樣本進(jìn)行大腸埃希菌、蠟樣芽胞桿菌、變形桿菌、志賀菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌、沙門(mén)菌等的檢驗(yàn), 測(cè)定菌落群數(shù)、菌群數(shù)量。將樣本置于大小適宜的漿罐內(nèi), 添加酸堿值為7的無(wú)菌氯化鈉溶液, 充分混勻無(wú)菌氯化鈉溶液及樣本, 使用勻漿儀、嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作原則執(zhí)行。混合液加入至45℃的培養(yǎng)基內(nèi)。采取倒置法進(jìn)行培養(yǎng), 3d后于高倍顯微鏡下觀察樣本中的細(xì)菌。檢驗(yàn)過(guò)程實(shí)施嚴(yán)格的質(zhì)量控制, 確保檢驗(yàn)操作規(guī)范。檢驗(yàn)結(jié)果根據(jù)患者的就餐史、飲食情況以及細(xì)菌性食物中毒的常發(fā)季節(jié)進(jìn)行綜合性分析。

1.4 觀察指標(biāo)

（1）分析樣本采集情況：（2）觀察統(tǒng)計(jì)檢出的病原菌情況, 包括大腸埃希菌、蠟樣芽胞桿菌、變形桿菌、志賀菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌、沙門(mén)菌；（3）分析血清型（大腸埃希菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌、沙門(mén)菌）的分布情況。

1.5 數(shù)據(jù)分析

應(yīng)用SPSS 22.0軟件, 計(jì)數(shù)資料以%表示, 行χ2檢驗(yàn), P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 樣本采集情況

共采集9 0份樣本, 其中糞便樣本4 2份（46.67%）, 嘔吐物5份（5.56%）, 肛拭子22份（24.44%）, 手拭子16份（17.78%）, 食品3份（3.33%）, 食品操作間2份（2.22%）。

2.2 檢出的病原菌情況

90例患者中, 致病菌的檢出率為53.33%（48/90）, 其中糞便、嘔吐物、肛拭子、手拭子、食品、食品操作間的檢出率依次為73.81%、60.00%、45.45%、12.50%、33.33%、50.00%；以糞便中的致病菌檢出率最高, 對(duì)比其他樣本的檢出率, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。致病菌中, 構(gòu)成比從高到低依次為副溶血性弧菌（18.89%）、沙門(mén)菌（13.33%）、大腸埃希菌（11.11%）、蠟樣芽胞桿菌（4.44%）、變形桿菌（3.33%）、志賀菌/金黃色葡萄球菌（1.11%）；副溶血性弧菌的構(gòu)成比明顯高于其他致病菌的構(gòu)成比, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 檢出的病原菌情況[n(%)]

2.3 血清型的分布情況

對(duì)17株副溶血性弧菌、12株沙門(mén)菌、10株大腸埃希菌、1株金黃色葡萄球菌進(jìn)行分離, 根據(jù)血清學(xué)檢查結(jié)果分析型的分布情況, 結(jié)果顯示, 副溶血性弧菌中O4：K8 型1株, O3：K6 型有13株, 其他3株；沙門(mén)菌中鼠傷寒沙門(mén)菌3株, 腸炎沙門(mén)菌9株；大腸埃希菌中侵襲性大腸細(xì)菌2株, 產(chǎn)毒性大腸埃希菌3株, 致病性大腸桿菌5株；金黃色葡萄球菌為A型。見(jiàn)表2。

表2 血清型的分布情況[n(%)]

3 討論

食品安全關(guān)乎國(guó)民健康, 也與國(guó)家的長(zhǎng)治久安息息相關(guān)。盡管我國(guó)的食品安全水平逐漸提升, 但食物中毒事件依然時(shí)常發(fā)生。因此食品安全問(wèn)題仍然是我國(guó)的社會(huì)問(wèn)題, 需要引起全社會(huì)的關(guān)注與監(jiān)督。細(xì)菌性食物中毒不但和食物的生產(chǎn)、保存、運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)有關(guān), 也和患者的飲食方式、結(jié)構(gòu)及衛(wèi)生有關(guān)。細(xì)菌性食物中毒一年四季都可發(fā)生, 但秋季最為高發(fā), 原因與夏季溫度升高, 食物易變質(zhì), 秋季食入這些變質(zhì)食物則可能引起食物中毒。細(xì)菌性食物中毒的食物來(lái)源一般是餐飲業(yè), 占比高達(dá)40%以上, 其后是家庭自制、街頭食物, 其中肉類(lèi)、海鮮類(lèi)食物最易造成食物中毒。細(xì)菌性食物中毒嚴(yán)重時(shí)會(huì)危及生命安全, 一旦發(fā)生, 應(yīng)立刻送醫(yī)救治。對(duì)于表現(xiàn)輕微的惡心、嘔吐、腹瀉患者而言, 一般予以基礎(chǔ)對(duì)癥治療；對(duì)于癥狀嚴(yán)重, 出現(xiàn)中毒、水電解質(zhì)紊亂、嚴(yán)重脫水者, 應(yīng)及時(shí)進(jìn)行鑒別診斷[9]。臨床實(shí)踐也證實(shí), 在采取治療措施前, 準(zhǔn)確的診斷是基本前提[10]。微生物檢驗(yàn)是“醫(yī)生的醫(yī)生”, 可為臨床各種病菌性疾病的診治提供指導(dǎo), 能夠在一定程度上提升診斷率, 減少漏診、誤診, 讓患者得到及時(shí)、正確的治療。微生物檢驗(yàn)?zāi)軌驗(yàn)槭澄镏卸驹\斷提供重要的參考依據(jù), 對(duì)治療方案的制定也有指導(dǎo)作用。微生物檢驗(yàn)還能夠明確病原菌, 找到引起食物中毒的具體原因, 且能更全面的掌握疾病的發(fā)生規(guī)律, 有助于病情的有效控制, 繼而改善患者預(yù)后[11]。微生物檢驗(yàn)同時(shí)具有操作簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)實(shí)用的特點(diǎn), 采集較多的具有針對(duì)性的樣本后, 在嚴(yán)格質(zhì)控的情況下進(jìn)行檢驗(yàn), 可獲得較高的準(zhǔn)確率。

微生物檢驗(yàn)的主要流程包括采集樣本、觀察并培養(yǎng)樣本菌落, 再觀察其發(fā)展過(guò)程。微生物檢驗(yàn)可檢出多種致病菌種, 并能明確菌群的種類(lèi)、數(shù)目。在樣本的采集中, 應(yīng)盡可能多的采集樣本, 任何可能性的樣本均不可放過(guò), 如患者的嘔吐物、食物、糞便、肛拭子等, 多樣本檢驗(yàn)?zāi)軌蚱鸬铰?lián)合診斷的目的, 因?yàn)榭蔀榕R床診斷提供更詳細(xì)的參考依據(jù)[12]。本研究對(duì)患者采集糞便、嘔吐物、肛拭子、手拭子、食品、食品操作間（刀具、砧板、餐具等）樣本進(jìn)行檢驗(yàn), 結(jié)果顯示, 糞便的致病菌檢出率（73.81%）最高, 其后依次是嘔吐物、肛拭子、手拭子、食品、食品操作間, 因此臨床上針對(duì)細(xì)菌性食物中毒的微生物檢驗(yàn), 應(yīng)優(yōu)先采集糞便, 配合嘔吐物、肛拭子的檢驗(yàn)結(jié)果以明確診斷。值得一提的是, 對(duì)于嘔吐物的檢驗(yàn), 可能會(huì)存在患者將食物全部吞咽或食物已受污染的情況, 這會(huì)大大降低檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性[13]。致病菌種中, 當(dāng)前認(rèn)為副溶血性弧菌、沙門(mén)菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄是細(xì)菌性食物中毒的主要致病菌, 且不同致病菌感染患者的臨床癥狀存在一定的差異[14]。本研究結(jié)果顯示, 副溶血性弧菌是造成細(xì)菌性食物中毒最常見(jiàn)的病菌, 其構(gòu)成比為18.89%, 明顯高于沙門(mén)菌、大腸埃希菌、蠟樣芽胞桿菌、變形桿菌、志賀菌/金黃色葡萄球菌, 提示副溶血性弧菌是造成細(xì)菌性食物中毒的高危菌種, 應(yīng)加強(qiáng)其監(jiān)測(cè)。從血清學(xué)檢查結(jié)果分析發(fā)現(xiàn), 副溶血性弧菌以O(shè)3：K6 型最常見(jiàn), 占比76.47%, 沙門(mén)菌以腸炎沙門(mén)菌（75.00%）多見(jiàn), 大腸埃希菌以致病性大腸桿菌（50.00%）最多見(jiàn)。

細(xì)菌性食物中毒的危害性大, 會(huì)對(duì)患者的身心健康構(gòu)成不良影響, 應(yīng)積極防治。總結(jié)相關(guān)文獻(xiàn), 認(rèn)為應(yīng)從如下幾方面做起：（1）對(duì)細(xì)菌性食物中毒患者及時(shí)進(jìn)行微生物檢驗(yàn), 快速找出病原菌。進(jìn)行微生物檢驗(yàn)樣本的采集時(shí), 應(yīng)做到“全面”和“量多”, 盡量將檢驗(yàn)范圍覆蓋到全部可能引發(fā)細(xì)菌性食物中毒的病菌感染源。標(biāo)本采集后應(yīng)盡快送檢, 無(wú)法立即送檢時(shí), 并根據(jù)規(guī)范要求妥善儲(chǔ)存。從檢驗(yàn)前的準(zhǔn)備到檢驗(yàn)結(jié)果分析, 形成一套滿(mǎn)足臨床實(shí)踐的質(zhì)控管理制度, 以提高檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性, 且應(yīng)嚴(yán)格按照相關(guān)規(guī)定進(jìn)行檢驗(yàn), 做好操作流程、環(huán)節(jié)的質(zhì)控, 以避免檢驗(yàn)結(jié)果的誤差[15]；（2）副溶血性弧菌是造成細(xì)菌性食物中毒的高危菌種, 應(yīng)加強(qiáng)食物加工質(zhì)量方面的宣教工作, 盡量不食入大量的生冷食物與海鮮食品。近幾年因大腸埃希菌感染引起的細(xì)菌性食物中毒也較常見(jiàn), 應(yīng)強(qiáng)化對(duì)食品經(jīng)營(yíng)機(jī)構(gòu)的衛(wèi)生管控, 制定完善的整治、管理制度, 一旦發(fā)現(xiàn)衛(wèi)生不合格、質(zhì)量不過(guò)關(guān), 應(yīng)讓其在限期內(nèi)做好整頓, 整頓后再次檢查, 合格后方可重新?tīng)I(yíng)業(yè)。

綜上所述, 對(duì)較多的樣品進(jìn)行有針對(duì)性的微生物檢驗(yàn), 有助于對(duì)細(xì)菌性食物中毒患者病原菌種類(lèi)和血清型的判斷, 能夠提高污染源控制效果；因此需要積極對(duì)微生物進(jìn)行檢驗(yàn)。