深圳某地區3～7歲兒童血清白蛋白參考范圍的建立

陳 相，杜麗偉，蔡珠妹，龔海娜，陳書恩

深圳市羅湖醫院集團醫學檢驗實驗室（深圳市羅湖區婦幼保健院檢驗科），廣東 深圳 518019

白蛋白（ALB）亦稱清蛋白，含580個氨基酸殘基的單鏈單純蛋白質，主要由肝實質細胞合成分泌，是血漿中含量最多的蛋白質，約占血漿總蛋白的57%～68%。維持血液循環膠體滲透壓及血液pH值、保護血管內皮細胞完整性及在出凝血中發揮重要的生理功能，還參與炎癥反應、抗氧化、修復損傷等。同時白蛋白是體內重要的營養蛋白，其濃度水平不僅與疾病狀況相關，也和性別、年齡、不同地區的生活水平及習慣相關。目前，臨床各實驗室測定ALB的方法有電泳法、免疫法、染料結合法，各種檢測方法學間差異較大，且兒童正常參考范圍沒有統一，多數沿用成人的參考范圍，存在很大局限性。本實驗室ALB檢測方法學由染料結合法更改為免疫法，因而急需建立新的參考范圍。本研究以本地區托幼機構健康體檢兒童為調查對象，應用免疫比濁法檢測ALB，以求建立適合本地區本實驗室的3～7歲兒童ALB參考范圍，現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 調查對象

選取2019年7—9月來深圳市羅湖醫院體檢適齡入院入學的健康兒童作為研究對象，按照國家臨床實驗室標準委員會（NCCLS）關于健康者的原則要求，選取其中肝腎功能正常、血尿常規正常、乙肝表面抗原（HbsAg）陰性及其他體檢結論為“健康”的3～7歲兒童采集外周靜脈血，檢測血清白蛋白結果進行統計分析。本研究經樣本醫院醫學倫理委員會批準、入選者家長簽署知情同意書；分為3～5歲、6～7歲，以男童、女童分組分別統計結果。

1.2 儀器與試劑

儀器為BECKMAN AU-680全自動生化分析儀；試劑為芬蘭Orion公司生產的生化液體雙試劑盒及配套標準品（國械注進20172401012），按照試劑說明書的要求設置儀器測定參數，采用免疫比濁法。室內質控血清為朗道雙水平質控品。

1.3 方法

質量控制室內質控為朗道雙水平質控，每天ALB CV＜2.5%，累積室內質控CV＜5%，室間質評（EQA計劃）ALB項目（廣東省室間質量評價、衛生部室間質評價）均為優秀。檢測方法由護士按要求采集在本地區托幼機構入院入學3～7歲兒童靜脈血液標本（剔除溶血、脂血及黃疸樣本）［1-2］，標本凝集后3 000轉離心10 min，并在實驗室2 h內完成檢測。

1.4 統計學方法

采用SPSS 17.0軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗。計數資料以例數和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 1 792例兒童血清ALB測定值

各年齡組血清ALB測定值均符合正態分布，男童3～5歲年齡組平均白蛋白水平范圍40.01～45.79 g/L，平均值為42.9 g/L；6～7歲年齡組平均白蛋白水平范圍40.72～46.48 g/L，平均值為43.6 g/L；女童3～5年齡組平均白蛋白水平范圍41.56～47.24 g/L，平均值為44.4 g/L；6～7歲年齡組平均白蛋白水平范圍41.03～46.77 g/L，平均值為43.9 g/L，見表1。

表1 1 792例兒童血清ALB測定值（±s）

表1 1 792例兒童血清ALB測定值（±s）

性別男女年齡組3～5歲6～7歲3～5歲6～7歲例數（例）130 849 119 694 ALB水平42.9±2.89 43.6±2.88 44.4±2.84 43.9±2.87

2.2 不同性別兒童間ALB結果

男童3～5歲、6～7歲兩年齡組間比較，差異有統計學意義（P＜0.05），女童3～5歲、6～7歲兩年齡組間比較，差異無統計學意義（P＞0.05），女童取消年齡分組；在男女童3～5歲組及6～7歲組間ALB結果比較，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 不同性別兒童間ALB結果（±s）

表2 不同性別兒童間ALB結果（±s）

性別男女t值P值3～5歲組42.9±2.89 44.4±2.84-4.107 0 6～7歲組43.6±2.88 43.9±2.87 2.499 0.014

2.3 深圳羅湖地區1 792例健康3～7歲兒童ALB參考范圍

男童3～5歲年齡組95%的參考區間37.24～48.56 g/L；6～7歲年齡組37.95～49.25 g/L；女童3～7歲年齡組白蛋白95%參考區間38.37～49.63 g/L，見表3。

表3 1 792例3～7歲兒童ALB參考范圍（±s）

表3 1 792例3～7歲兒童ALB參考范圍（±s）

性別男女年齡組3～5歲6～7歲3～7歲例數（例）130 849 813 ALB（g/L）42.9±5.66 43.6±5.65 44.0±5.63

2.4 常用ALB參考范圍

免疫比濁法檢測ALB結果參考范明顯低于溴甲酚綠法，可能與兩種方法的檢測原理不同相關，見表4

表4 常用ALB參考范圍（±s）

表4 常用ALB參考范圍（±s）

ALB文獻來源本研究年齡3～5歲6～7歲成人（免疫比濁法）成人（溴甲酚綠法）男37.2～48.6 37.9～49.3女38.4～49.6本試劑廠家衛生行業標準總體37.9～49.4 38.1～49.4 35～50 40～55

3 討論

ALB是血漿中含量最多的蛋白質，幾乎全部在肝臟合成，飲食中的蛋白水平能直接影響清蛋白的合成，ALB是體內重要的營養蛋白，參與維持血漿膠體滲透壓、酸堿平衡等內環境穩定，也是血漿中多種物質的主要轉運蛋白。血清蛋白的檢測結果對相關疾病的診斷沒有特異性，但結合臨床癥狀，可用于判斷疾病的發展狀況，同時可預測肝臟疾病的關鍵指標。近年來，有最新研究表明［12］ALB在膿毒血癥預后或疾病嚴重度分層，是一項容易獲得及敏感指標。隨著經濟發展和人民生活水平的提高，飲食習慣的變化，ALB不僅在兒童營養狀況的改善及對兒童健康狀況的評估作為一個重要指標，隨著對ALB研究的深入，還在其他疾病當中的應用及疾病的預后也有重要的意義。

參考范圍是對95%健康人群中各項檢測指標及其檢測結果進行多樣本統計數值分析，參照相關標準所設定，隨著檢測方法學的改變及人體生理狀況的變化，其具體的指標也會發生相應的改變［11］。目前白蛋白常用的檢測方法有染料結合法、電泳法、免疫比濁法。本實驗室因ALB測定試劑更換，ALB測定方法學由原來的溴甲酚綠法改變為免疫比濁法，因而在使用新的試劑過程中發現試劑提供的參考范圍及衛生行業標準［3-6］提供的ALB參考范圍不適合醫院特殊就診人群，且其參考范圍主要來自成人，沒有明確顯示可適用于兒童，同時，醫院臨床醫生也對本實驗室檢測結果提出質疑，反應強烈，影響到臨床醫生對入幼、入學兒童的健康的診斷。因此本實驗室急需建立適合本地區醫院特殊就診人群的ALB參考范圍。

在本研究中，男童3～5歲、6～7歲兩個年齡分組中，ALB檢測數據相比較與郭存九等［10］研究（ALB為溴甲酚紫法）的成人年齡分組一樣，均有較大差異，說明在不同地區、不同年齡段、性別因素對ALB參考范圍的建立有明顯影響，研究者推測這可能與人群生活習慣、生活方式等不同相關。而目前衛生行業標準中提供的參考范圍沒有年齡分組，在引用時也需要做相關的驗證，提示在實際工作中要根據不同檢測項目的檢測方法學、不同人群、建立適合本地區本實驗室參考范圍。

在本研究中，男、女童ALB參考范圍低限值均低于衛生行業標準而高于試劑廠家提供的標準，高限值均低于衛生行業標準（ALB為溴甲酚綠法）及試劑廠家提供的參考范圍，推測這可能與兒童的生理發育狀況和成人不同相關；可能與兒童在不同地區的生活條件、營養狀況和飲食結構改善有關；可能與不同的檢測方法學檢測原理不一致相關。提示ALB項目檢測應建立不同檢測方法學的適于3～7歲的兒童健康、診斷的參考范圍，以供臨床醫生參考。

溴甲酚綠法的檢測原理主要是白蛋白在pH值4.2的緩沖液中帶正電荷，與帶負電荷的染料溴甲酚綠結合形成藍綠色復合物，但溴甲酚綠法特異性差，溴甲酚綠不僅與白蛋白反應，還可與球蛋白、運鐵蛋白、結合珠蛋白反應，導致檢測結果產生偏差。免疫比濁法檢測原理是采用單克隆抗體技術，使抗白蛋白抗體與血清中的白蛋白特異性結合，通過測定抗原抗體復合物的濁度從而得出血清白蛋白的含量，重復性、準確性均有明顯提高。同時，檢驗醫學溯源聯合委員會（JCTLM）也將免疫比濁法作為參考方法。在本研究中檢測ALB應用的免疫比濁法，在和溴甲酚綠法相比較時，參考范圍明顯偏低［10-11］，表明了方法學檢測原理之間的明顯差異，與劉非等［13］研究相一致。這提示研究者在實際工作中更換檢測方法學后應驗證和重新制定相適應的參考范圍。

本研究中因客觀條件所限，未能再次細化每一個年齡階段及不同方法學的兒童白蛋白參考區間的分析，同時當前在細化各人群及年齡段的檢測項目參考范圍相關報道較少，這方面這也是以后努力的方向和目標，也是對不同醫院、不同地區的檢驗結果相互承認提供科學的實驗依據，也期待有其它地區相關的實驗研究報道。

綜上所述，本研究中在3～7歲兒童的ALB參考范圍在性別、年齡組間的差異的分析能夠真實反映深圳羅湖地區3～7歲健康兒童人群的血清白蛋白濃度水平情況。同時也驗證了同一項目在不同醫院面對不同人群時要及時修訂相適應的參考范圍。也證明了檢測方法更改后應重新制定相適應的正常人群的參考范圍必要性［14］。因此，建議實驗室按照CLSI［7］要求，根據性別、年齡、檢測方法學建立各自的參考范圍。為臨床診斷、治療、監測提供科學的實驗依據。