加壓毛細管電色譜分離氫溴酸樟柳堿等三種生物堿類成分*

2022-12-22 12:33:16張瀟晗張曉蕾牛麗穎畢曉東

廣州化工 2022年21期

張瀟晗，張曉蕾，牛麗穎,2,3，畢曉東,2,3

(1 河北中醫學院，河北石家莊 050091；2 河北省中藥配方顆粒創新中心，河北石家莊 050091；3 河北省中藥材品質評價與標準化工程研究中心，河北石家莊 050091)

氫溴酸樟柳堿作為M膽堿受體阻斷劑, 具有較強的中樞和外周抗膽堿活性, 能夠解除血管痙攣[1], 改善微循環, 還有平喘、解痙、散瞳、抑制唾液分泌、對抗有機磷中毒、抑制血小板活性等作用, 其安全性高于其他同類藥物，將樟柳堿的氫溴酸鹽作為臨床用藥, 研究開發得到的包括注射液、片劑等劑型也已成功應用于臨床[2]。氫溴酸樟柳堿是天然提取的托品烷類生物堿，存在莨菪堿、山莨菪堿和阿托品等結構類似的活性物質，在藥物分析中需要進行分離和鑒別。常用的分析方法有薄層色譜、電泳、液相色譜等方法，本實驗采用新型高效環保的加壓毛細管電色譜法[3-4]，對氫溴酸樟柳堿等三種生物堿類成分進行分離。

1 實驗

1.1 儀器試劑

TriSepTM-2100加壓毛細管電色譜，上海通微分析技術有限公司；UV-2102PC 型紫外-可見分光光度計，上海尤尼柯儀器有限公司；超聲波清洗器；旋渦混合器；濾頭，注射器；純水機。

氫溴酸樟柳堿、氫溴酸東莨菪堿、氫溴酸山莨菪堿標準品(純度)；甲醇(分析純);乙腈(色譜純)；實驗用水為RO級別用水;所有試劑和溶液在進樣器前都需要用0.2 μm濾膜過濾，流動相需超聲除氣。

1.2 實驗方法

準確稱取氫溴酸樟柳堿、氫溴酸東莨菪堿、氫溴酸山莨菪堿標準品4 mg，置離心管中，加適量甲醇溶解，配置成2 mg/mL的氫溴酸樟柳堿、氫溴酸東莨菪堿、氫溴酸山莨菪堿的標準儲備液，超聲10 min，備用。精密吸取三種標準儲備液各200 μL于3個離心管中，加甲醇1800 μL，用旋渦混合器震蕩搖勻，作為標準品溶液。精密吸取三種標準儲備液各100 μL于1個離心管中，加甲醇2700 μL，用旋渦混合器震蕩搖勻，作為混標。

pCEC-UV色譜條件，毛細管填充柱(EP-100-20/45-3-C18，內徑 100 μm，總長度 45 μm，有效長度20 cm，ODS填料內徑3 μm)；流動相：乙腈-50 mmol/L磷酸二氫鉀(含0.08%三乙胺)=15:85；流動相的流速為0.07 mL/min,分離電壓為0 KV，紫外檢測波長為210 nm。進樣量 2 μL；電壓施加在毛細管的出口端，進口端接地。

2 結果與討論

2.1 流動相的優化

本實驗對流動相的體積分數進行了優化，有機相乙腈的比例的改變，會改變樣品在固定相和流動相之間的分配比例，從而改變分離度[5]。本實驗考察了乙腈的體積分數為10%，15%，20%時的分離效果。當乙腈體積分數為10%時不出峰，隨著乙腈體積分數的增加到20%，氫溴酸樟柳堿、氫溴酸東莨菪堿、氫溴酸山莨菪堿不能完全達到基線分離。當乙腈體積分數選擇15%時，出峰良好，基本達到基線分離，因此本實驗選擇15%乙腈為有機流動相。本實驗同時考察了三乙胺對氫溴酸樟柳堿的分離影響。實驗發現，三乙胺的加入可明顯改善峰形，提高靈敏度，因此實驗選擇加入0.08%的三乙胺。

2.2 流動相流速的選擇

流速的大小直接改變柱壓，從而影響出峰時間以及分離度，本實驗考察了(0.05，0.07 mL/min)兩種流速對氫溴酸樟柳堿三種生物堿的分離效果。實驗表明在壓力允許的范圍內，流速的增大，可減小分離時間，縮短單個組分的出峰時間。因此本實驗選擇0.07 mL/min。圖1，圖2分別為流速0.05，0.07 mL/min，進樣量2 μL混標的分離情況，峰1，2，3，分別為氫溴酸樟柳堿、氫溴酸山莨菪堿、氫溴酸東莨菪堿。

圖1 混標電色譜圖(流速0.05 mL/min，進樣量2 μL)

圖2 混標電色譜圖(流速0.07，進樣量2 μL)

2.3 分離電壓的選擇

電壓的增加會改變電滲流的大小，從而影響各組分之間的保留情況。本實驗考察了不同電壓(+6，+15，0，-6，-15 kV)下對氫溴酸樟柳堿等三種生物堿的分離效果。由圖3～圖6可知，在毛細管出口端施加正電壓或負電壓，都對氫溴酸樟柳堿、氫溴酸山莨菪堿、氫溴酸東莨菪堿三種生物堿的出峰時間無顯著影響，也無改善峰形等影響效果。并且隨著電壓的增大，電流持續時間增長，會出現焦耳熱，從而增加基線的平衡時間。對比不加電壓的情況，綜合選擇0 kV為分離電壓。