食管癌中Cdh1蛋白的表達與臨床病理特征的相關性

羅 沖 張向東 劉曉政 夏永欣

食管癌是一種臨床常見惡性腫瘤，調查研究顯示，中晚期食管癌患者5年內生存率在13%左右[1]。早期食管癌患者5年內生存率高達89%，但是臨床首次確診早期食管癌患者僅占4%[2]。Cdh1蛋白在介導上皮細胞以及維持組織的正常結構狀態中有著至關重要的作用，有關資料顯示，Cdh1蛋白在甲狀腺癌患者、胃癌患者以及乳腺癌患者等癌組織中呈現異常表達[3]。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月至2019年1月本院收治的72例食管癌患者為研究對象，手術中切取癌組織及癌旁組織，并分別作為實驗組和對照組。72例食管癌患者中男性50例、女性22例，平均年齡為(57.7±5.8)歲；腫瘤部位：18例上段、30例中段、24例下段；分化程度：62例中低分化、10例高分化；TNM分期：33例Ⅰ期～Ⅱ期、39例Ⅲ期～Ⅳ期。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學分析方法 將研究對象的組織做成石蠟切片(置于烘箱中烘120 min，再用磷酸鹽緩沖液沖洗3次，每次沖洗3 min)，取一定量檸檬酸鹽緩沖液，加入微波盒中，加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于高溫切片架上，放入已經沸騰的緩沖液中；自然冷卻后取出玻片。每張切片在室溫下孵育，去除磷酸鹽緩沖液，在玻片上加以相應稀釋倍數的抗體，再在室溫下孵育120 min。去除磷酸鹽緩沖液加入1滴酶標抗鼠或兔聚合物，再在室溫下孵育0.5 h。去除磷酸鹽緩沖液，在切片上加入DAB(二氨基聯苯胺)液，再在顯微鏡下觀察5 min。

1.2.2 實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測方法 將研究對象的組織(10 mg)置于離心管中，采用RNA提取試劑盒反轉錄試劑盒(購自大連寶生物公司)將RNA轉化為cDNA(采用分光光度儀檢測)。根據Cdh1蛋白mRNA序列，分析特異性。建立實時熒光定量聚合酶鏈反應體系，根據需要配置合適的體系，實時熒光定量聚合酶鏈反應結束后建立熔解曲線，再在儀器上直接讀數，分析Cdh1蛋白mRNA水平。

1.3 觀察指標

分析2組食管癌患者的Cdh1蛋白表達(采用免疫組織化學和實時熒光定量聚合酶鏈反應)以及與臨床病理特征的相關性。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 2組Cdh1蛋白表達陽性率比較

實驗組Cdh1蛋白的陽性率為20.8%(15/72)，對照組的陽性率為100%(72/72)，實驗組Cdh1蛋白表達陽性率低于對照組(χ2=6.5541，P=0.0218)。

2.2 Cdh1蛋白表達與食管癌臨床病理特征的相關性分析

Cdh1蛋白表達與患者的年齡、腫瘤位置、性別等沒有相關性(P>0.05)，Cdh1蛋白表達與淋巴結轉移、TNM分期和浸潤程度密切相關(P<0.05)，見表1。

2.3 Cdh1蛋白不同表達患者的生存情況

72例患者均隨訪3年，其中45例患者無腫瘤復發或轉移，27例發生腫瘤復發和轉移死亡，Cdh1蛋白表達與患者的生存時間有直接性的關系(P<0.05)，見表2。

表1 Cdh1蛋白表達與臨床病理特征的相關性分析(例，%)

表2 Cdh1蛋白不同表達患者的生存圖相關性分析/例

3 討論

食管癌是一種常見的消化道腫瘤，確切病因不明，現認為其發生是多因素共同作用的結果，包括易感因素，遺傳因素、環境因素等等。食管癌的人群分布與年齡和職業以及生活習慣等密切相關，早期食管癌患者臨床癥狀不典型。現階段來看，治療食管癌患者尚未有特效藥物，因此，闡述食管癌的發生和發展機制對實現靶向精準治療、降低死亡率有重要的臨床意義。

Cdh1蛋白是一種經典鈣黏蛋白家族中的一員，是位于16號染色體的基因，該基因與16號染色體上鈣黏著蛋白家族的其他成員一起存在于一個基因簇中。Cdh1蛋白在維系細胞間連接生物學功能方面具有重要意義，其基因的突變與胃癌，乳腺癌，結腸直腸癌，甲狀腺癌和卵巢癌有關。Cdh1蛋白表達低下導致復合物功能障礙，繼而影響到細胞粘附，Cdh1蛋白基因功能的喪失被認為通過增殖、侵襲和/或轉移來促進癌癥進展。有關資料顯示，Cdh1蛋白被認為與食管癌患者的預后效果密切相關[4]。國內大量研究資料顯示，Cdh1蛋白在胃癌和膀胱癌患者中存在低表達，并且發現Cdh1蛋白與食管癌患者的預后密切相關[5]。

本文主要從Cdh1蛋白(上皮型鈣黏蛋白)的表達進行研究，結果表明：所有組織中Cdh1蛋白均有表達，但是在癌組織中表達明顯降低，表達陽性率要低于癌旁組織和正常組織，說明了Cdh1蛋白表達下降有可能促進腫瘤的發生和發展，因此分析兩者之間的關系具有重大作用。而且本文研究結果還顯示Cdh1蛋白表達與患者的年齡、腫瘤位置、性別等未有相關性(P>0.05)，Cdh1蛋白表達與患者的淋巴結轉移、TNM分期和浸潤程度密切相關(P<0.05)。上述研究結果顯示，Cdh1蛋白表達水平在腫瘤的分化程度和是否有淋巴轉移的病例上呈現反比性關系即腫瘤分化程度越低，Cdh1蛋白表達越低；臨床分期越高，Cdh1蛋白表達越低；出現淋巴結轉移食管癌患者的Cdh1蛋白表達水平明顯低于未出現淋巴結轉移食管癌患者。

在腫瘤組織實現淋巴或血道轉移過程中，腫瘤細胞間識別粘附作用缺陷可能與Cdh1蛋白密切相關(也就是Cdh1蛋白在腫瘤組織的高表達密切相關，有可能是粘附蛋白分子復合物缺陷所致)。研究顯示，Cdh1蛋白的高表達改變不良粘附機制缺陷[6]。腫瘤浸潤程度以及腫瘤分化程度以及淋巴結轉移以及腫瘤的具體部位等臨床病理特征是影響食管癌患者預后效果的重要影響因素。Cdh1蛋白被認為與腫瘤的發生和轉移浸潤等密切相關，Cdh1蛋白是一種腫瘤轉移抑制因子。腫瘤細胞在分化時，分化程度越低將會喪失組織積極性，極易發生細胞轉移，導致預后效果不良。有學者認為[7]，食管癌患者的預后效果比較差，上述研究結果顯示，Cdh1蛋白表達與患者的生存時間有直接性的關系(P<0.05)，陰性率越高，患者的生存時間越短，預后也就越差。深入分析Cdh1蛋白的表達水平能夠作為食管癌患者預后效果診斷的輔助檢測指標[8]。

綜上所述，食管癌中Cdh1蛋白的表達呈下降趨勢，與患者的淋巴結轉移以及TNM分期和浸潤程度等病理特征密切相關。Cdh1蛋白作為基因編碼鈣粘蛋白超家族的一員，Cdh1蛋白表達在食管癌中降低，可能與 SMO 形成的復合體發生改變，繼而誘發信號通路異常激活有關，這可能是引起食管癌的機制之一，其檢測有可能成為新的臨床診斷食管癌的標志物或者治療食管癌的新靶點。