漳州市葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥篩查情況及其分子遺傳學特征

陳寶英 劉文煌 陳田田 林巧云 許德南

福建省漳州市婦幼保健院檢驗科，福建漳州 363000

葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（glucose 6-phosphatede hydrogenase，G6PD）缺乏癥屬于臨床患病率較高的人類酶缺陷遺傳病，感染、藥物、食用蠶豆等均是誘發該病發生的主要因素，其主要臨床表現為高膽紅素血癥及急性溶血性貧血，疾病發生后有較大的幾率會誘發新生兒發生病理性黃疸，病情嚴重者還會造成核黃疸發生，導致兒童智力發育障礙[1,2]。漳州市自2017 年開始全面開展G6PD 缺乏癥的篩查與確診工作，并對其分子遺傳學特征進行分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年1 月至2021 年12 月在漳州市出生的30 000 例新生兒為研究對象，其中男17 355 例，女12 645 例；采集新生兒足跟血，進行濾紙干血片G6PD 熒光斑點法測定。本研究經漳州市婦幼保健院倫理委員會審批通過，入選新生兒家長均對本研究知情同意。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 根據《新生兒疾病篩查管理辦法》[3]，對出生3d 的新生兒采集其足跟外側血滴在采血濾紙片（浙江博圣生物技術股份有限公司生產）上，使血滴自然滲透，收集4 個血斑。將濾紙片水平放置在室內，做到避光處理，避免臭氧、紫外線的影響，在自然通風條件下晾干。用塑料袋將晾干的血片封裝保存，2～8℃冰箱冷藏，送至漳州市新生兒疾病篩查中心進行統一檢測。

1.2.2 標本篩查 G6PD 測定試劑盒（熒光斑點法，浙江博圣生物技術股份有限公司）及全自動熒光免疫分析儀[珀金埃爾默醫學診斷產品（上海）有限公司]對G6PD 酶活性進行測定。參考值范圍：女28.5U/GHB，男22.5U/GHB。如低于上述范圍則屬于初篩陽性，需聯系患兒進一步篩查確診。

1.2.3 確診方法 ①基因診斷法確診[4]：G6PD 基因突變檢測試劑盒（廈門至善生物科技有限公司），SLAN-96S 型全自動醫用聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）分析系統（上海宏石醫療科技有限公司），采用熒光PCR 溶解曲線法檢測。試劑盒內有9 種我國主要類型的致病性變異。②G6PD酶活性測定法[5]：取患兒靜脈血2ml 置入酶法試劑盒（北京利德曼生化公司）中，采用008AS 全自動生化分析儀（日立公司）進行連續監測速率法檢測。參考值范圍：G6PD 酶活性值低于1300U/L 即可確診。上述兩種方式任一種診斷陽性即可確診，而對第二種檢測方式診斷陽性而第一種檢測方式診斷陰性者，應給予一代基因序列測定探尋有無新的突變位點。

1.2.4 致病性變異分類標準 分為Ⅰ～Ⅳ類[6,7]：Ⅰ類指酶活性測定結果低于正常值下限的10%，屬于酶活性嚴重缺乏，同時患兒存在先天性非球形細胞溶血性貧血；Ⅱ類指酶活性測定結果低于正常值下限的10%，屬于酶活性嚴重缺乏，但未伴有上述類型貧血；Ⅲ類指酶活性測定結果在正常值下限的10%～60%，屬于酶活性中度缺乏；Ⅳ類指酶活性測定結果在正常值下限的60%～150%，屬于酶活性輕度缺乏。其中酶活性正常參考值為：男≥22.5U/dl，女≥28.5U/dl。

1.3 觀察指標

記錄30 000 例新生兒中G6PD 缺乏癥初篩陽性率及確診陽性率，分析確診陽性患兒的分子遺傳學特征。

1.4 統計學方法

采用SPSS 26.0 統計學軟件對數據進行分析和處理，計量資料以均數±標準差（）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以例數（百分率）[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 30 000 例新生兒中G6PD 缺乏癥初篩陽性率及確診陽性率情況

2018 年1 月至2021 年12 月間漳州市出生的30 000 例新生兒全部接受濾紙干血片G6PD 熒光斑點法測定，初篩陽性新生兒1522 例，初篩陽性率5.07%。1522 例初篩陽性新生兒全部回院接受基因檢測及G6PD 活性酶學診斷，最終確診1321 例，其中男962 例，女359 例，確診率4.40%。

2.2 確診陽性患兒的分子遺傳學特征分析

1321 例確診患兒中，共檢出9 種基因突變型，分別為c.517T>C、c.95A>G、c.487G>A、c.1024C>T、c.1376G>T、c.1388G>A、c.392G>T、c.1360C>T、c.871G>A ；其中以c.1024C>T、c.1376G>T、c.1388G>A 為檢出率最高的三種基因突變類型，致病性分類情況經Kruskal-WallisH檢驗，得出三項對酶活性影響差異有統計學意義（P<0.05）；對應患兒數分別為250例、330例、410例，共990例，占比74.94%。c.487G>A、c.1360C>T 兩種基因突變類型女性占比高于男性，其余基因突變類型均為男性占比高于女性，差異有統計學意義（P<0.05），酶活性呈輕中度缺乏，見表1。

表1 陽性患兒的分子遺傳學特征[n（%）]

2.3 確診陽性患兒致病性變異分類特點

按照致病性變異分類標準，對確診的1321 例患兒分類后發現以Ⅳ類為主，共861 例，占比65.18%（861/1321）。女患兒以Ⅳ類居多，男患兒為Ⅱ～Ⅳ類，但以Ⅲ～Ⅳ類為主，見表2。

表2 確診陽性患兒致病性變異分類特點

3 討論

紅細胞膜的G6PD 缺陷造成還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸合成量降低，該磷酸是谷胱甘肽還原酶輔酶，是紅細胞戊糖磷酸途徑的重要物質，對紅細胞膜的穩定性具有直接的影響作用，還原型谷胱甘肽生成量不足，導致機體無法抵抗氧化損傷，紅細胞受到破壞誘發溶血[8,9]，臨床將該病稱為G6PD缺乏癥，屬于臨床常見遺傳病[10-13]。

G6PD 缺乏癥是因調控G-6-PD 的基因突變所致，呈現X 連鎖不完全顯性遺傳的特征。由于該病缺乏有效的治療方法，因此患者應注意避免導致該病發作的誘因，如伯氨喹啉型藥物的使用，新生兒疾病篩查是用于該疾病早期診斷的主要方式。

本研究對2018 年1 月至2021 年12 月漳州市出生的30 000 例新生兒進行篩查，最終確診G6PD缺乏癥患兒1321 例，確診率4.40%；且男性新生兒患病率高于女性，故早期疾病篩查至關重要[14]，與其他地區G6PD 缺乏患病率相比，漳州市新生兒患病率較高，考慮與G6PD 在胚胎早期生物合成中有重要的參與作用有關。G6PD 具有提高細胞對病毒感染敏感度、加速細胞衰老、調節細胞增殖等對胚胎發育造成損害的作用，進而對有核細胞病理生理過程造成影響。同時，本市人口流動性大也是引發患病率增高的主要因素。對1321 例確診患兒進行的基因檢測發現，以c.1024C>T、c.1376G>T、c.1388G>A 為檢出率最高的三種基因突變類型，三種基因型是導致漳州地區G6PD 缺乏癥發生的主要基因型，與我國常見的3 種突變類型c.1376G>T、c.1388G>A、c.95A>G 有少許差異，考慮與地區差異性有關。基因突變類型中c.1388G>A 占比28.42%（270/950），在所有基因突變中占比最高。因此在兒童基因型篩查中需重視對上述基因型的篩查。從不同性別的患兒基因特征來看，女性 c.487G>A、c.1360C>T 兩種基因突變占比高于男性，其余基因突變類型均為男性占比高于女性，因此上述兩種基因突變雖然在整體突變中占比較少，但對女性患兒要給予足夠重視，與張玲等[15]的觀點一致。按照致病性變異分類標準對1321 例確診患兒分類后發現以Ⅳ類為主，共861 例，占65.18%，說明總體發病情況較輕，重癥率低。

綜上所述，做好G6PD 缺乏癥篩查對漳州市新生兒意義重大。隨著對遺傳病認知的加深，我國目前已增加對先天性基因疾病的防控力度，了解本地G6PD 缺乏癥的發病特點和基因型特性，有利于推動本地G6PD 缺陷新生兒防控工作的順利進行。