雞大腸桿菌病診斷

趙永平

（四川省南充市高坪區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 南充 637000）

雞大腸桿菌病是由大腸桿菌引起的，表現(xiàn)為大腸桿菌性敗血癥、大腸桿菌性肉芽腫、氣囊病、蜂窩織炎、腫頭綜合征、腹膜炎、輸卵管炎、滑膜炎、全眼球炎和臍炎。

1 流行病學(xué)

幼齡雞對(duì)本病最易感，發(fā)病率可達(dá)30%～60%，病死率可達(dá)100%，其常發(fā)生于3～6周齡幼雛；成年蛋雞往往在開(kāi)產(chǎn)階段發(fā)病，其生產(chǎn)性能受影響；種雞發(fā)生本病時(shí)影響種蛋孵化率、出雛率，造成死胚和毛蛋增多，健雛率降低。該病不僅能導(dǎo)致雞發(fā)育不良、生長(zhǎng)遲緩、生產(chǎn)性能下降，還可造成死淘率增高等。

大腸桿菌耐藥菌株較多，耐藥譜較廣，個(gè)別菌株表現(xiàn)出極強(qiáng)的耐藥性。在臨床防治中，應(yīng)選擇敏感藥物預(yù)防和治療本病。

2 臨床癥狀

病雞精神萎頓，不喜活動(dòng)，食欲下降，羽毛松亂，兩翅下垂，閉目呆立，腹瀉，糞便呈灰白色或灰黃色，少數(shù)為黃棕色，肛門(mén)周?chē)患S便污染，有的泄殖腔紅腫、外翻，發(fā)生臍炎，腹部膨脹。

患雞平衡失調(diào)，爪部干縮，呼吸困難，發(fā)啰音，部分雞在昏迷狀態(tài)中死亡，有的死前倒地，仰臥，兩腿向后伸張，拍打翅膀掙扎。病程稍長(zhǎng)的出現(xiàn)眼球炎，其上下眼瞼嚴(yán)重腫脹，結(jié)膜發(fā)炎，角膜混濁，部分病雞失明。

3 剖檢變化

病死雞氣囊壁混濁、增厚，并有黃白色纖維絮狀物附著，部分雞氣囊腔內(nèi)有干酪樣物；心包混濁、變厚，其上也附有白色纖維樣物，少數(shù)雞心包腔內(nèi)有數(shù)量不等的淡黃色積液，心包膜與心外膜黏連；心臟表面有出血點(diǎn)；肝稍腫大、瘀血、質(zhì)脆，邊緣呈黃色，表面有白色纖維素膜附著，易剝離；膽囊腫大；輸卵管明顯增粗，內(nèi)積黃白色干酪樣滲出物，嚴(yán)重者輸卵管阻塞。

4 實(shí)驗(yàn)室檢查

4.1 分離培養(yǎng) 取5 份病料接種于普通瓊脂平板、麥康凱培養(yǎng)基，置37 ℃培養(yǎng)24 h。通過(guò)分離培養(yǎng)分離出1 株大腸桿菌，5 個(gè)普通瓊脂培養(yǎng)基上的菌落均為直徑2～3 mm，中等大小，圓形，微突起，表面光滑、濕潤(rùn)，半透明，邊緣整齊，在陽(yáng)光下呈鉛灰色。麥康凱培養(yǎng)基上的菌落呈磚紅色，大小不一，表面光滑、濕潤(rùn)、微隆起，從培養(yǎng)基側(cè)面觀察單個(gè)菌落可見(jiàn)紐扣樣結(jié)構(gòu)，其中間部位凹陷，周?chē)黄稹?/p>

分離菌在營(yíng)養(yǎng)肉湯中培養(yǎng)24 h 后均勻混濁，管底有灰白色沉淀，沉淀振蕩后呈云霧狀散開(kāi)并有糞臭味，液面管壁有菌環(huán)，符合大腸桿菌特征。

4.2 純培養(yǎng) 無(wú)菌選取普通瓊脂平板上的單個(gè)可疑菌落，劃線接種到麥康凱瓊脂上，37 ℃培養(yǎng)24 h 后，挑取麥康凱瓊脂平板上單個(gè)紅色的菌落再接種于麥康凱瓊脂平板上，37 ℃培養(yǎng)24 h，如此反復(fù)純化3 次，選擇純培養(yǎng)菌落接種到營(yíng)養(yǎng)肉湯中，置4 ℃條件保存?zhèn)溆谩?/p>

4.3 染色鏡檢 挑取純培養(yǎng)的單個(gè)菌落少許制片，革蘭氏染色，鏡檢。

4.3.1 制片過(guò)程 取玻片用95%的酒精棉揩擦后，在酒精燈燈焰上輕拖幾次；用滅菌接種環(huán)從營(yíng)養(yǎng)肉湯中取3 環(huán)置于玻片中央，均勻涂布成適當(dāng)大小的薄層后自然干燥；干燥后將涂抹面向上，玻片背面在酒精燈燈焰上來(lái)回通過(guò)數(shù)次，每次過(guò)焰后以不燙手為度，進(jìn)行固定。

4.3.2 革蘭氏染色步驟 在干燥、固定好的抹片上滴加草酸銨結(jié)晶紫溶液，經(jīng)2 min水洗，加革蘭氏碘溶液于抹片上媒染，作用3 min，加95%酒精于抹片上脫色，1 min 后水洗；加稀釋的石炭酸復(fù)紅復(fù)染30 s，水洗，吸干。

4.3.3 鏡檢 顯微鏡下見(jiàn)到染為紅色的桿菌，其兩端鈍圓，散在、成對(duì)或成叢存在，偶爾有3 個(gè)連在一起的，無(wú)芽孢。

4.4 生化鑒定 生化試驗(yàn)表明所分離的菌株對(duì)葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇均產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不發(fā)酵蔗糖，MR試驗(yàn)陽(yáng)性、VP試驗(yàn)陰性、靛基質(zhì)試驗(yàn)陽(yáng)性、枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)陰性、三糖鐵試驗(yàn)陰性。試驗(yàn)結(jié)果符合大腸桿菌的特性。

4.5 動(dòng)物試驗(yàn) 將18只37日齡健康雛雞隨機(jī)分為A、B 二組，每組9 只。A 組頸部皮下接種致病菌0.2 mL/只，B 組頸部皮下接種相同劑量的滅菌生理鹽水作對(duì)照。接種后的雛雞按正常標(biāo)準(zhǔn)隔離飼養(yǎng)，喂給不含藥物的飼料，每天上、下午各記錄一次雞的死亡情況及發(fā)病癥狀，對(duì)病死雞可刮取腸黏膜染色、涂片、鏡檢，并采集心血進(jìn)行細(xì)菌分離、生化鑒定，直到接種后7 d為止，若A組中仍有雞存活，對(duì)其進(jìn)行捕殺，觀察病變。10 d后對(duì)B組雞進(jìn)行剖檢，觀察有無(wú)病變。

接種后A 組雞均發(fā)病，主要表現(xiàn)為精神沉郁，呼吸困難，喘氣，垂翅，豎毛，縮頸，飲食欲下降或廢絕，死亡高峰在發(fā)病12～24 h，病死雞病變主要見(jiàn)于心包、氣囊、肝，其心包積液，氣囊混濁和肝臟腫大、瘀血，典型病變出現(xiàn)于接種48 h后，可見(jiàn)死亡雞纖維素性心包炎、肝周炎，氣囊上有多量干酪樣滲出物。對(duì)照組雞均健活，捕殺時(shí)未見(jiàn)眼觀病變，心、肝等也未分離出細(xì)菌。

刮取接種后死亡雞的腸黏膜染色、涂片，進(jìn)一步接種麥康凱培養(yǎng)基，并進(jìn)行生化鑒定試驗(yàn)，結(jié)果證實(shí)為大腸桿菌。

4.6 藥敏試驗(yàn) 用無(wú)菌棉拭子蘸取致病菌液，在普通瓊脂培養(yǎng)基上均勻涂抹后，于室溫放置5 min。將藥敏紙片相隔一定距離均勻貼于平板上，于室溫放置15 min 后將平板倒置，于37 ℃溫箱中培養(yǎng)24 h，觀察記錄結(jié)果。

結(jié)果表明大腸桿菌對(duì)青霉素、強(qiáng)力霉素輕微耐藥，而對(duì)丁胺卡那霉素、磺胺嘧啶敏感。

5 防控措施

為減少細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生，提高療效，應(yīng)合理使用抗菌藥物。用藥時(shí)應(yīng)嚴(yán)格根據(jù)適應(yīng)癥，合理確定用藥劑量與療程，不要長(zhǎng)期使用某幾種藥物，應(yīng)采用聯(lián)合用藥、交叉用藥或輪換用藥等方法。

大腸桿菌病在雞群中的發(fā)生和流行除與天氣變化及大量濫用抗生素導(dǎo)致耐藥菌株產(chǎn)生有關(guān)外，飼養(yǎng)環(huán)境、養(yǎng)殖條件、雞場(chǎng)衛(wèi)生狀況等也是引起發(fā)病的重要因素。減少或者杜絕大腸桿菌病發(fā)生需加強(qiáng)飼養(yǎng)管理、搞好環(huán)境衛(wèi)生、嚴(yán)格消毒并堅(jiān)持自繁自養(yǎng)、全進(jìn)全出，不從有大腸桿菌病感染史的種雞場(chǎng)或孵化室購(gòu)雞，確需購(gòu)買(mǎi)的應(yīng)進(jìn)行大腸桿菌病監(jiān)測(cè)，確定無(wú)病后方可購(gòu)入。雞場(chǎng)應(yīng)控制飼養(yǎng)密度，防止過(guò)分擁擠并保持空氣流通、新鮮，防止有害氣體蓄積，同時(shí)應(yīng)定期消毒雞舍、用具及養(yǎng)殖環(huán)境。■