六神丸抗腫瘤作用研究進(jìn)展

韓珊珊 劉寨東

（1.山東中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，山東濟(jì)南 250014；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，山東濟(jì)南 250014）

六神丸出自“雷允上誦芬堂”[1]，由珍珠粉、牛黃、麝香、雄黃、蟾酥、冰片配制而成。方中牛黃、珍珠粉清熱化痰涼血；蟾酥解毒消腫止痛；雄黃辟穢解毒散結(jié)；冰片、麝香解毒消腫開竅。諸藥合用，共奏清熱解毒、消腫止痛之效。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，六神丸中有效成分主要為蟾蜍二烯內(nèi)酯類成分及其代謝產(chǎn)物、牛黃中的膽酸類成分、麝香和冰片中的揮發(fā)性成分及雄黃和珍珠中的礦物質(zhì)成分[2]。近年來六神丸廣泛運(yùn)用于多種惡性腫瘤的治療，如血液系統(tǒng)腫瘤、胃腸道腫瘤、呼吸系統(tǒng)腫瘤、婦科腫瘤等[3]，均有較好的療效。筆者查閱并歸納近10年來關(guān)于六神丸抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)和臨床研究相關(guān)文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)六神丸在多個(gè)方面發(fā)揮著抗腫瘤作用，現(xiàn)將其主要抗腫瘤成分及作用機(jī)制介紹如下。

1 六神丸主要抗腫瘤成分研究

1.1 蟾酥 蟾酥屬攻毒殺蟲止癢藥，主要化學(xué)成分為蟾蜍二烯羥酸內(nèi)酯、膽固醇、多肽類、吲哚生物堿等。蟾蜍二烯羥酸內(nèi)酯及其代謝產(chǎn)物是主要的抗腫瘤成分，其中脂蟾毒配基、蟾毒靈和華蟾蜍精具有抑制或直接殺傷腫瘤細(xì)胞、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞多藥耐藥性等作用[4]。陳稀煩等[5]研究發(fā)現(xiàn)，華蟾素可通過調(diào)控PI3K/AKT信號(hào)通路，從而抑制肺癌移植瘤的生長(zhǎng)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，改善機(jī)體免疫狀態(tài)。徐瑞成等[6]發(fā)現(xiàn)蟾毒靈可通過上調(diào)細(xì)胞周期素依賴性蛋白激酶抑制因子的表達(dá)、下調(diào)增殖細(xì)胞核抗原表達(dá)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的分化與凋亡。此外，脂蟾毒配基類物質(zhì)具有較強(qiáng)的麻醉止痛作用，臨床上常用于癌痛的治療[7]。

1.2 牛黃 牛黃屬息風(fēng)止痙藥，來源于牛干燥的膽結(jié)石，主要化學(xué)成分為膽紅素、膽汁酸類、膽固醇、多種氨基酸及無機(jī)元素。研究發(fā)現(xiàn)，牛黃膽酸可降低肝癌細(xì)胞尿激酶型纖溶酶原活化劑受體活性表達(dá)，從而抑制肝癌細(xì)胞HepG轉(zhuǎn)移[8]。黃芳[9]研究發(fā)現(xiàn)，一定濃度的牛黃可抑制人胃癌細(xì)胞BGC-823增殖并誘導(dǎo)其凋亡，聯(lián)合化療藥物可增強(qiáng)抑制作用。

1.3 雄黃、珍珠粉 雄黃屬硫化物類礦物藥，四硫化四砷是雄黃主要藥效物質(zhì)之一。四硫化四砷可通過下調(diào)B淋巴細(xì)胞瘤-2蛋白（Bcl-2）的表達(dá)和/或上調(diào)Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bax）的表達(dá)、降解早幼粒細(xì)胞白血病-維甲酸受體α（PML-RARα）融合蛋白、降低存活蛋白survivin的表達(dá)、降低斷點(diǎn)集簇區(qū)-abl原癌基因（BCR-ABL）融合蛋白水平等多個(gè)途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[10]。另外，雄黃還具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖和分化、抑制腫瘤血管形成、直接殺傷腫瘤細(xì)胞等作用[10]。珍珠粉屬息風(fēng)止痙藥，富含氨基酸、生物鈣和多種微量元素，鈣為其主要成分，可減輕毛細(xì)血管壁的通透性，減少滲出，促進(jìn)新鮮肉芽生長(zhǎng)；鉀、鈉維持細(xì)胞內(nèi)外液的濃度梯度，具有消炎、防腐等作用；鋅是多種酶的構(gòu)成物質(zhì)，可加速組織修復(fù)[11]。

1.4 麝香、冰片 麝香和冰片均屬于芳香開竅藥，常配伍使用。麝香主要活性物質(zhì)為麝香酮，通過抑制腫瘤新生血管生長(zhǎng)達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞增殖、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的目的[12]，還可通過提高機(jī)體的非特異性免疫功能，抑制腫瘤細(xì)胞增殖[13]。冰片可雙向調(diào)節(jié)血-腦屏障通透性，增強(qiáng)化療藥物在腦內(nèi)的生物利用度，常用于腦膠質(zhì)瘤的輔助治療。此外，冰片還可通過抑制核轉(zhuǎn)錄因子（NF）-κB、線粒體膜電位、p38-MAPK信號(hào)通路等途徑抑制腫瘤的增殖侵襲[14]。

2 六神丸抗腫瘤作用機(jī)制研究

2.1 抑制腫瘤細(xì)胞增殖 陳琦等[15]通過檢測(cè)六神丸醇提上清液和水提上清液對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2和人正常肝細(xì)胞L02生存的影響，發(fā)現(xiàn)六神丸能選擇性抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，以醇提上清液體外抗肝癌活性效果最強(qiáng)。蔡國(guó)琴等[16]研究發(fā)現(xiàn)，六神丸對(duì)小鼠S180實(shí)體瘤、人移植性肝癌瘤的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用。新生血管生成是腫瘤生長(zhǎng)的必要條件，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的過表達(dá)可促進(jìn)腫瘤的血管生成，微血管密度（MVD）與腫瘤血管生成的程度密切相關(guān)[17]。張慧等[18]對(duì)比六神丸高、中、低劑量組以及順鉑組人食管癌裸鼠移植瘤模型內(nèi)MVD、VEGF的表達(dá)，結(jié)果表明六神丸可通過下調(diào)腫瘤組織MVD、VEGF的表達(dá)以抑制食管癌移植瘤的生長(zhǎng)。齊元富等[19]檢測(cè)不同濃度的六神丸含藥血清對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的影響，結(jié)果顯示六神丸含藥血清對(duì)肺癌A549細(xì)胞的增殖具有抑制作用，且抑制程度與濃度呈正相關(guān)，其作用機(jī)制與六神丸下調(diào)VEGF的表達(dá)有關(guān)。研究表明Wnt/β-catenin信號(hào)通路在腫瘤形成、侵襲、轉(zhuǎn)移和耐藥方面起著至關(guān)重要的作用[20]。蔡杰等[21]研究發(fā)現(xiàn)六神丸可抑制炎癥相關(guān)性結(jié)腸癌的形成，其可能通過抑制β-catenin的表達(dá)從而抑制腸組織的惡性增殖。另有研究表明，六神丸通過抑制腫瘤壞死因子（TNF）-α、NF-κB炎癥因子達(dá)到抑制食管腫瘤生長(zhǎng)的效果[22]。

2.2 促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡 細(xì)胞凋亡包括多個(gè)途徑，凋亡基因Bcl-2家族是其中線粒體凋亡途徑的主要調(diào)節(jié)因子，它影響一系列下游基因參與調(diào)控整個(gè)細(xì)胞凋亡[23]。天冬氨酸半胱氨酸酯特異性蛋白酶家族caspase-9能激活caspase-3，是細(xì)胞凋亡的啟動(dòng)因子；caspase-3的活化是細(xì)胞凋亡的中心環(huán)節(jié)，是細(xì)胞凋亡的最終執(zhí)行者[24]。研究表明，六神丸可降低凋亡基因Bcl-2 和Bcl-wmRNA、與耐藥相關(guān)ABC轉(zhuǎn)運(yùn)載體超家族G亞家族第2 號(hào)（ABCG2）、VEGF mRNA的表達(dá)，誘導(dǎo)人肝癌Hep3B細(xì)胞凋亡[25-27]。鄒瑜等[28]探討六神丸逆轉(zhuǎn)人結(jié)腸癌耐阿霉素細(xì)胞株Lovo/Dox的機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)，六神丸可通過上調(diào)相關(guān)凋亡蛋白caspase-3、caspase-9、Cytochrome C和抑癌蛋白p53的表達(dá)而引起細(xì)胞株凋亡，從而逆轉(zhuǎn)人結(jié)腸癌耐阿霉素細(xì)胞株Lovo/Dox的耐藥蛋白P-gp表達(dá)。李秀榮等[29]研究不同濃度六神丸含藥血清與順鉑對(duì)肺癌A549細(xì)胞的作用，結(jié)果顯示caspase-3陽性率與六神丸含藥濃度呈正相關(guān)，survivin基因表達(dá)與六神丸含藥濃度呈負(fù)相關(guān)，考慮六神丸通過上調(diào)caspase-3表達(dá)、下調(diào)survivin表達(dá)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

2.3 抗腫瘤血管生成 VEGF、血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF）均為主要的促血管生成因子，通過抑制VEGF、PDGF表達(dá)可有效抗腫瘤血管生成[17]。齊元富等[30]研究發(fā)現(xiàn)，六神丸組、順鉑組及聯(lián)合組相較于對(duì)照組均能有效抑制H22肝癌荷瘤小鼠PDGF與VEGF表達(dá)，且聯(lián)合組抑制作用更強(qiáng)。黃利敏[31]通過體外實(shí)驗(yàn)觀察六神丸含藥血清對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的作用，發(fā)現(xiàn)其可通過抑制Ras→Raf→MEK→MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑而實(shí)現(xiàn)降低肺癌A549細(xì)胞VEGF的表達(dá)，從而達(dá)到抑制腫瘤血管生成的目的。

2.4 抗腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移 Sestrin 2在多種腫瘤中表達(dá)的降低可導(dǎo)致mTOR信號(hào)通路過度激活，導(dǎo)致細(xì)胞代謝和氧化應(yīng)激失衡，從而促進(jìn)腫瘤的增殖、生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移[32]。鄢文等[33]發(fā)現(xiàn)六神丸通過激活Sestrin 2信號(hào)通路，抑制miR-19誘發(fā)的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，從而抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）是一種細(xì)胞有絲分裂原和促血管生成因子，與腫瘤生長(zhǎng)分化、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移及血管生成密切相關(guān)，MVD能反映腫瘤血管生成以及血管生成的活躍程度，二者均是預(yù)測(cè)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)和預(yù)后的重要指標(biāo)。黃利敏等[34]研究發(fā)現(xiàn)，六神丸可降低移植瘤組織bFGF、MVD的CD34表達(dá)，抑制Lewis肺癌自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移的發(fā)生及原發(fā)腫瘤、肺轉(zhuǎn)移瘤的生長(zhǎng)。細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）是癌細(xì)胞浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移必須突破的組織屏障，張遠(yuǎn)[35]研究發(fā)現(xiàn)，六神丸可通過抑制腫瘤細(xì)胞對(duì)ECM的破壞而發(fā)揮抑制食管癌細(xì)胞浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的作用。另有研究表明，SRC-3/miR-497/Cyclin D2介導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）可能是結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移機(jī)制之一，高表達(dá)類固醇受體輔助活化因子-3（SRC-3）可以促進(jìn)腫瘤組織的増殖和肝轉(zhuǎn)移，而六神丸可下調(diào)細(xì)胞中SRC-3蛋白的表達(dá)[36]。

2.5 逆轉(zhuǎn)耐藥性 多藥耐藥基因MDR1表達(dá)的膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白P-糖蛋白參與的化療藥物逆向轉(zhuǎn)運(yùn)是多藥耐藥發(fā)生的重要機(jī)制之一[37]。李海燕[38]以六神丸及其成分蟾酥的含藥血清作用于人紅白血病耐阿霉素細(xì)胞株（K562/DOX細(xì)胞），結(jié)果表明其皆可通過下調(diào)MDR1 mRNA表達(dá)以逆轉(zhuǎn)K562/DOX細(xì)胞的耐藥性。

2.6 緩解放化療損傷 在殺滅腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，化療也會(huì)導(dǎo)致諸多不良反應(yīng)和并發(fā)癥，包括全身性損害、血液系統(tǒng)損害、呼吸系統(tǒng)損害、神經(jīng)系統(tǒng)損害、肝腎功能損害等[39]。陶珊珊等[40]研究發(fā)現(xiàn)六神丸含服可有效改善紫杉醇化療引起的神經(jīng)病理性疼痛反應(yīng)，且明顯緩解大鼠肝臟炎癥，減少化療藥物對(duì)肝組織的損傷。放射性肺損傷是胸部腫瘤放療后常見的并發(fā)癥，鄭琦等[41]研究發(fā)現(xiàn)六神丸可下調(diào)血清TNF-α及白細(xì)胞介素（IL）-1β水平以減輕放射性肺炎大鼠局部肺損傷的程度。

3 六神丸抗腫瘤作用臨床研究

3.1 抑制腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移 郝桂瑩[42]發(fā)現(xiàn)六神丸聯(lián)合化療在抑制腫瘤轉(zhuǎn)移方面效果優(yōu)于單純化療，有顯著的抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用，且顯著提高了患者生存率和生活質(zhì)量，改善了患者身體狀況，并減少不良反應(yīng)的發(fā)生。劉恭喜[43]發(fā)現(xiàn)六神丸聯(lián)合干擾素和羥基脲治療慢性粒細(xì)胞性白血病可明顯抑制骨髓增殖和降低Ph染色陽性率，改善患者的臨床癥狀及提高生活質(zhì)量。

3.2 緩解放化療不良反應(yīng) 齊元富等[44]運(yùn)用六神丸聯(lián)合化療治療非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）可有效減輕化療引起的如惡心嘔吐、白細(xì)胞減少等不良反應(yīng)。王秀娟[45]運(yùn)用六神丸聯(lián)合奧沙利鉑+亞葉酸鈣+氟尿嘧啶方案治療中晚期胃癌可明顯緩解患者腹脹、腹痛、食欲減退、疲倦乏力等癥狀，改善身體狀況并提高生活質(zhì)量。張慧等[46]發(fā)現(xiàn)順鉑+紫杉醇化療方案加用六神丸治療局部晚期食管癌與單用順鉑+紫杉醇化療方案的近期有效率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但聯(lián)合治療組患者生活質(zhì)量有明顯改善，不良反應(yīng)發(fā)生率也明顯降低。詹行聞[47]運(yùn)用人參半夏湯聯(lián)合六神丸治療Ⅲ、Ⅳ期食管癌患者，與單用替吉奧（替加氟、吉美嘧啶、奧替拉西）膠囊治療的對(duì)照組患者進(jìn)行比較，結(jié)果顯示中藥組呃逆噯氣、吞咽梗阻、食欲減退等癥狀緩解程度明顯優(yōu)于對(duì)照組，且在提高患者免疫力、穩(wěn)定并增加體質(zhì)量等方面效果顯著。黃美琴等[48]發(fā)現(xiàn)益氣養(yǎng)陰湯聯(lián)合六神丸能延緩頭頸部惡性腫瘤患者口腔黏膜反應(yīng)的出現(xiàn)，減少放療引起的不良反應(yīng)。

3.3 緩解癌痛 陳立新等[49]在三階梯止痛法基礎(chǔ)上加用六神丸干預(yù)癌痛7 d，結(jié)果表明聯(lián)合治療組疼痛緩解率明顯高于單用三階梯止痛法治療組，不良反應(yīng)發(fā)生率也明顯降低。蔡皎皓等[50]發(fā)現(xiàn)六神丸在減少阿片類藥物使用量、降低疼痛數(shù)字評(píng)分（NRS）、減少不良反應(yīng)發(fā)生、提高生活質(zhì)量等方面具有顯著療效。

4 結(jié)語

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，癌毒是導(dǎo)致惡性腫瘤的病邪之一，清熱解毒、化痰軟堅(jiān)、逐瘀散結(jié)、活血化瘀、利濕消腫等是基于癌毒理論的攻毒之法[51]。六神丸屬于攻毒法的代表方劑，其作用機(jī)制主要有抗腫瘤血管生成、抑制腫瘤細(xì)胞增殖、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡、逆轉(zhuǎn)細(xì)胞耐藥、抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移，并可減輕放化療帶來的不良反應(yīng)，改善患者身體狀況，提高生活質(zhì)量。雖然六神丸在腫瘤治療中應(yīng)用較廣，但因其組成中存在少量毒性成分，尚缺少大樣本臨床隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)評(píng)估其安全用量及用法，且其藥效成分之間的配伍增效及減毒機(jī)制尚缺乏系統(tǒng)研究。因此，本研究團(tuán)隊(duì)將系統(tǒng)研究六神丸各藥味之間的相互藥理學(xué)作用機(jī)制，探索其臨床治療腫瘤的安全用量范圍，為臨床進(jìn)一步應(yīng)用提供參考。