沉默信息調節因子1、信號轉導與轉錄激活因子3在眼瞼基底細胞癌組織中的表達及其臨床意義

劉法，郝靜，陳志杰

基底細胞癌是全球常見的惡性腫瘤之一，但其極易發生漏診和誤診［1］。基底細胞癌的發病部位主要位于眼瞼和眼周皮膚，其中晚期眼周基底細胞癌可能會導致眼球喪失，嚴重影響病人的生活質量［2-3］。另有報道顯示，眼瞼基底細胞癌死亡率相對較低，但診治不及時將嚴重破壞局部組織，為后期治療帶來挑戰［4］，因此尋找新的有效分子靶標可能有助于預防眼瞼基底細胞癌的預防和治療。信號轉導與轉錄激活因子3（STAT3）是一種轉錄激活子，能夠在多種癌癥類型中被激活，參與腫瘤發生發展［5］。沉默信息調節因子1（SIRT1）能夠通過去乙酰化調控基因表達，促進或抑制腫瘤進展［6-7］。此外，SIRT1和STAT3蛋白表達異常與腫瘤的生物學特性緊密相關，可能是腫瘤預防和治療的潛在靶點［8］。目前，SIRT1和STAT3蛋白表達在眼瞼基底細胞癌病人癌組織的表達情況尚不清楚，本研究擬觀察眼瞼基底細胞癌及皮膚基底細胞乳頭狀瘤組織中SIRT1和STAT3蛋白表達變化，分析其與眼瞼基底細胞癌病人的臨床病理關系，以期為臨床改善眼瞼基底細胞癌的預防和治療提供新思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取二四二醫院2014年2月至2017年8月經病理證實為眼瞼基底細胞癌且經手術切除保留的癌組織蠟塊93例作為觀察組，男性48例，女性45例；年齡范圍42～85歲，年齡（58.97±9.07）歲，腫瘤長徑為（3.16±0.13）cm；另選取60例皮膚基底細胞乳頭狀瘤組織作為對照組，其中男性28例，女 性32例；年 齡 范 圍45～88歲，年 齡（60.37±7.86）歲，兩組具有可比性。納入標準：①符合WHO腫瘤病理學和遺傳學診斷標準；②病人無嚴重精神疾病；③本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》相關要求，病人或其近親屬對研究方案簽署知情同意書。排除標準：資料不完整者。

1.2 主要試劑小鼠抗人SIRT1（MA5-15677）和STAT3（MA1-13042）單抗克隆抗體、山羊抗小鼠IgG（H+L）二級抗體購自美國ThermoFisher Scientific公司；SP檢測試劑盒（SP0041）購自北京Solarbio公司。

1.3 免疫組織化學法采用免疫組化SP法檢測兩組組織中SIRT1和STAT3蛋白表達情況。將保存的各組組織標本制備成4 μm厚度切片，60℃烘箱中烤1 h，經脫蠟，無水乙醇、體積分數為95%、85%和70%乙醇水化后，滴加過氧化氫阻斷過氧化氫酶，PBS清洗后，封閉液封閉，然后分別滴加一抗SIRT1和STAT3，4℃過夜，清洗后，加入二抗孵育45 min，DAB顯色后，經10%蘇木素復染，乙醇脫水后，再經二甲苯透明和封片，顯微鏡下觀察。陰性對照組用PBS替代一抗實現。

1.4 結果判定選取3名病理醫生對染色片獨立評分，以細胞核或細胞質呈棕黃色顆粒為陽性表達，分歧通過協商解決。SIRT1和STAT3的陽性表達通過染色指數（staining index，SI）（染色強度與陽性細胞百分比評分乘積）進行評估，其中染色強度評分標準：無染色，0分；淺黃色，1分；棕黃色，2分；棕褐色，3分；陽性細胞百分比評估標準：陰性，0分；陽性細胞比例≤10%，1分；10%～50%，2分；51%～75%，3分；76%～100%，4分。SI＜3分為陰性（-）；SI=3為弱陽性（+）；3＜SI＜6為中等陽性（++）；SI≥6為強陽性（+++）。其中陰性和弱陽性表示低表達，中等陽性和強陽性表示高表達。

1.5 隨訪對術后病人進行復查或電話隨訪，隨訪病人均有完整隨訪資料，隨訪時間范圍3～24個月，末次隨訪時間截至2019年8月31日。

1.6 統計學方法運用統計學軟件SPSS 19.0對數據進行處理。計數資料以例（%）表示，采用χ2檢驗；計量資料以±s表示，采用t檢驗，Spearman法分析SIRT1和STAT3蛋白表達相關性。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組組織中SIRT1和STAT3蛋白表達情況在眼瞼基底細胞癌組織中SIRT1和STAT3陽性表達率分別為79.57%（74∕93）和76.34%（71∕93），均顯著高于皮膚基底細胞乳頭狀瘤組織（P＜0.05），Spearman法分析眼瞼基底細胞癌組織中SIRT1和STAT3蛋白表達具有正相關性（r=0.72，P＜0.05），見圖1，表1。

表1 不同組別中SIRT1和STAT3蛋白表達情況∕例（%）

2.2 SIRT1、STAT3蛋白表達與眼瞼基底細胞癌病人年齡和性別的關系SIRT1、STAT3蛋白在眼瞼基底細胞癌組織中的表達與病人的年齡有關（P＜0.05），與病人性別無關（P＞0.05），見表2。

表2 SIRT1、STAT3蛋白表達與眼瞼基底細胞癌病人年齡和性別的關系∕例（%）

2.3 SIRT1、STAT3蛋白表達與眼瞼基底細胞癌病人病理指標的關系SIRT1、STAT3蛋白在眼瞼基底細胞癌組織中的表達與病人增殖細胞核抗原（PCNA）增殖指數、腫瘤長徑和組織病理分類有關（P＜0.05），見表3。

表3 SIRT1、STAT3蛋白表達與眼瞼基底細胞癌病人臨床病理指標的關系∕例（%）

2.4 SIRT1、STAT3蛋白表達與眼瞼基底細胞癌復發的關系在眼瞼基底細胞癌組織中SIRT1、STAT3蛋白高表達病人復發率分別為66.67%（6∕9）和44.44%（4∕9），SIRT1、STAT3蛋白低表達病人復發率 分 別 為33.33%（3∕9）和55.56%（5∕9）；SIRT1、STAT3蛋白在眼瞼基底細胞癌組織中的表達與病人是否復發無關（χ2=0.14、2.76，P＞0.05）。

3 討論

目前，用于眼瞼基底細胞癌治療的常規手段包括手術治療、激光治療和光動力療法等，但手術切除是眼瞼基底細胞癌治療的首選方案［9-10］。然而，臨床上對眼瞼基底細胞癌的治療需要考慮腫瘤大小、解剖位置和生長方式等，這為具體實施時的治療策略制定增加了挑戰，而手術中的不完全切除更會導致較高的復發率，嚴重影響病人的眼部功能恢復［11］，因此，迫切需要開發新的治療策略用于改善其臨床治療效果。

STAT3是信號轉導和轉錄激活子轉錄因子家族的七成員之一，能夠調節細胞增殖、分化、血管生成、炎癥和免疫反應，其異常激活可以通過調控基因表達影響腫瘤微環境，導致腫瘤惡化［12］。在肺鱗狀細胞癌中，阻斷STAT3活性能夠抑制小鼠體內脂肪酸誘導的腫瘤球的形成及高脂飲食誘導的腫瘤發生［13］。張少娟等［14］研究發現，STAT3在宮頸癌組織中高表達，與癌癥的形成和惡性進展相關。此外，STAT3在肝癌組織中陽性表達率顯著高于癌旁組織，且能夠增加肝癌細胞的凋亡［15］。本研究結果顯示，眼瞼基底細胞癌組織中STAT3陽性表達率（76.34%）顯著高于皮膚基底細胞乳頭狀瘤組織，提示STAT3在眼瞼基底細胞癌組織中高表達，可能與眼瞼基底細胞癌病人的病情發展有關。SIRT1是包括代謝調節劑在內的多個靶標的賴氨酸脫乙酰基酶，在膀胱癌組織中過表達，對癌細胞增殖和葡萄糖攝取具有促進作用［16］。Choupani等［17］報道顯示，SIRT1可能通過促進上皮間質化作為癌癥轉移的關鍵調節劑。另一方面，SIRT1的激活在維持急性髓細胞性白血病和慢性粒細胞性白血病發展進程中至關重要，可能提供了一種潛在的治療靶標［18］。本研究發現，SIRT1在眼瞼基底細胞癌組織中SIRT1表達率為79.57%，顯著高于皮膚基底細胞乳頭狀瘤組織，提示眼瞼基底細胞癌的發展可能與癌組織中SIRT1陽性表達相關。

Zhang等［8］研究發現，SIRT1和STAT3在胃癌腫瘤組織中協同高表達，預示晚期胃癌病人總體生存率較差，提供了胃癌早期診斷的潛在指標。本研究進一步Spearman法分析發現，眼瞼基底細胞癌組織中SIRT1和STAT3蛋白表達具有正相關性，提示SIRT1可能與STAT3共同作用參與眼瞼基底細胞癌病情發展，可能揭示了眼瞼基底細胞癌預防和診斷的潛在生物標志物。在鼻咽癌組織中，STAT3高表達與腫瘤TNM分期有關［19］。黃雷等［20］發現，STAT3活化水平與胃癌病人的腫瘤浸潤、組織分化程度、臨床分期、腫瘤長徑和淋巴結轉移等臨床病理情況密切相關。而SIRT1在大腸癌組織中高表達，且表達水平與腫瘤浸潤程度、分化程度、腫瘤大小、組織類型、分期和病人年齡等臨床病理有關［21］。此外，SIRT1陽性表達與結直腸癌腫瘤分化程度和淋巴結轉移有相關性，為結直腸癌的個性化治療提供參考［22］。本研究結果顯示，SIRT1和STAT3蛋白在眼瞼基底細胞癌組織中的表達與病人的年齡、PCNA增殖指數、腫瘤長徑和腫瘤病理分型有關，提示SIRT1和STAT3蛋白表達水平與眼瞼基底細胞癌的惡性發展密切相關，推測SIRT1和STAT3可能是眼瞼基底細胞癌診斷和治療的潛在有效參照指標。

綜上所述，SIRT1和STAT3蛋白在眼瞼基底細胞癌組織中高表達，二者呈正相關，與病人年齡、PCNA增殖指數、腫瘤長徑和腫瘤病理分型有關，表明SIRT1和STAT3蛋白可能成為眼瞼基底細胞癌病人診斷和治療的臨床指標。然而，基底細胞癌病人的發生率會根據易感的種族和遺傳疾病（例如白化病，戈林綜合征和色皮病）發生變化，發病機制復雜，因此SIRT1和STAT3蛋白參與眼瞼基底細胞癌進程的機制尚待更深入的探索。

（本文圖1見插圖1-6）

圖1 STAT3(A)和SIRT1(B)蛋白在眼瞼基底細胞癌組織及皮膚基底細胞乳頭狀瘤組織中表達（免疫組化法×200倍）