蒼耳中甾族化合物研究

★ 張祖良 盛天露 顏蓉 陳鐘文 劉華（.樟樹市人民醫院藥劑科 江西 樟樹 3300；.江西中醫藥大學藥學院 南昌 330004）

蒼耳Xanthium mongolicumKitag.為菊科蒼耳屬一年生草本植物，臨床常用于治療類風濕性關節炎、鼻炎、皰疹和癌癥等［1］。藥典記載蒼耳草味苦、性寒，有小毒，具有散風寒、祛風濕、解毒殺蟲的功效［2］。現代研究表明蒼耳草具有抗菌、抗腫瘤、抗炎、鎮痛及抗氧化等藥理活性［3］。

課題組前期在美國得州大學西南醫學中心發現江西產蒼耳草乙醇提物經大孔樹脂乙醇洗脫部位具有抑制程序性細胞壞死的生理活性［4］，并對其有效部位進行了系統的化學成分分離，經NMR、MS 等波譜技術鑒定其結構。課題組此前已報道分離了14 個化合物［4］，此次又分離得到6 個甾族化合物，分別鑒定為豆甾醇（1）、stigmasta-4,22-dien- 3-one（2）、stigmastan-4-en-3-one（3）、7-oxo-stigmasterol（4）、β-谷甾醇（5）、β-谷甾醇棕櫚酸酯（6），其中化合物2，3，4，6 為首次從蒼耳屬中分離得到。

那么，到底怎樣去理解文化?我曾給文化作了一個定義性的說明:文化是相對穩定的人為的程序和為人的取向的統一。文化的根本在于人為的程序和為人的取向這樣一種關系。為此我先后寫過幾篇文章，對這個觀點加以論證。這也可以看作是一個假說。因為關于文化的定義非常多。任何一個新的文化定義，都可以作為一種假說提出來。我關于文化的定義也可以說是一個假說，問題是需要加以論證。我一直試圖作進一步的論證。前年我出的一本書，題目叫《社會的文化程序》，就是把整個社會看作由文化程序來調控的過程。

1 材料

2695 Alliance Separations Module 型高效液相色譜儀和1525 型制備高效液相色譜儀［Lichrospher C18制備液相色譜柱（30 mm × 250 mm，10 μm）］（美國Waters 公司）；Inova-600 型超導核磁共振波譜儀（美國Varian公司）；AB Triple QUAD 4500質譜儀（美國AB SCIEX 公司）；WFH-203（ZF-1）型三用紫外分析儀（上海精科實業有限公司）；AE100 型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

本系統設計的體溫數據采集節點采用便攜式佩戴，在數據采集的過程中為了避免脈沖干擾。設計了基于SVM的改進型Kalman濾波算法。卡爾曼濾波器主要運用算法估計原理，在和被提取信號有關的量測量之間提取出所需要的信號[12]，以K-1時刻的最優估計x(k-1|k-1)為準，預測K時刻的狀態變量x(k|k-1)，同時又對該狀態進行觀測，得到觀測變量z(k)，再在預測與觀測之間進行分析從而得到K時刻的最優狀態估計x(k|k)。當系統啟動時不存在x(k-1|k-1)等值，對此需要設定初值。如果在程序中設定固定的值，同時如果采集的數據一開始就含有干擾信號，卡爾曼濾波無法進行有效濾波。

水彩作品《紐約北園》（又名《紐約公園》）在1932年的《藝彀》（初集）刊出圖片時為無款（并誤將畫面上下顛倒），可知此款為后補（圖9）。

化合物1：無色針狀晶體（氯仿），ESI-MSm/z：413.1［M+H］+，分子式為C29H48O。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：0.69（3H，s，H-18），0.79（3H，t，J=6.8 Hz，H-29），0.84（3H，d，J=6.4 Hz，H-26），0.85（3H，d，J=6.4 Hz，H-27），1.01（3H，s，H-19），3.51（1H，m，H-3），5.01（1H，dd，J=15.1，8.4 Hz，H-23），5.15（1H，dd，J=8.5，15.1 Hz，H-22），5.33（1H，d，J=5.08 Hz，H-6）。13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：37.43（C-1），29.52（C-2），72.03（C-3），42.53（C-4），140.98（C-5），121.80（C-6），32.09（C-7），32.03（C-8），51.38（C-9），36.78（C-10），21.68（C-11），39.95（C-12），42.46（C-13），57.08（C-14），24.56（C-15），29.09（C-16），56.18（C-17），12.29（C-18），19.58（C-19），40.68（C-20），21.46（C-21），138.83（C-22），129.69（C-23），51.43（C-24），31.87（C-25），21.93（C-26），19.19（C-27），25.58（C-28），12.49（C-29）。結合質譜信息，氫譜、碳譜數據與文獻［5］對比一致，鑒定該化合物為豆甾醇。

2 提取與分離

化合物2：無色針狀晶體（氯仿），ESI-MSm/z：411.6［M+H］+，分子式為C29H46O。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：0.72（3H，s，H-18），0.81（3H，d，J=6.2 Hz，H-27），0.81（3H，t，J=7.4 Hz，H-29），0.84（3H，d，J=6.3 Hz，H-26），1.01（3H，d，J=6.7 Hz，H-21），1.19（3H，s，H-19）為6 個甲基質子信號，13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：35.62（C-1），34.13（C-2），199.82（C-3），123.88（C-4），171.85（C-5），32.92（C-6），32.05（C-7），35.77（C-8），53.82（C-9），38.63（C-10），21.33（C-11），39.85（C-12），42.33（C-13），56.82（C-14），24.26（C-15），28.93（C-16），56.23（C-17），12.32（C-18），17.82（C-19），41.23（C-20），21.32（C-21），138.26（C-22），129.58（C-23），51.68（C-24），32.03（C-25），21.26（C-26），19.06（C-27），25.46（C-28），13.56（C-29）。結合質譜信息，且氫譜、碳譜數據與文獻［6］對比一致，鑒定該化合物為stigmasta-4，22-dien-3-one。

化合物3：無色油狀（氯仿），HR-ESI-MSm/z：413.1778［M+H］+，分子式為C29H48O。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：0.72（3H，s，H-18），0.83（3H，d，J=6.5 Hz，H-27），0.83（3H，d，J=7.6 Hz，H-26），0.86（3H，t，J=7.3 Hz，H-29），0.91（3H，d，J=6.5 Hz，H-21），1.18（3H，s，H-19），5.72（3H，s，H-4）。13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：35.68（C-1），33.87（C-2），199.63（C-3），123.84（C-4），171.88（C-5），32.82（C-6），32.08（C-7），35.63（C-8），53.82（C-9），38.62（C-10），21.11（C-11），39.66（C-12），42.49（C-13），55.84（C-14），24.23（C-15），28.21（C-16），56.20（C-17），11.94（C-18），17.38（C-19），36.13（C-20），18.73（C-21），33.96（C-22），26.06（C-23），45.82（C-24），29.65（C-25），19.82（C-26），19.05（C-27），23.24（C-28），12.09（C-29）。結合質譜信息且氫譜、碳譜數據與文獻［7］對比一致，鑒定該化合物為stigmastan-4-en-3-one。

乙酸乙酯部（E3，59.67 g）使用乙醇溶解后，經硅膠柱以二氯甲烷∶甲醇（150∶1～0∶1）進行梯度洗脫，每個比例沖洗4 個柱體積。運用薄層色譜法對沖洗下的流分進行展開，將具有相同Rf值的流分進行合并，得CA-1～11 組分。CA-1～4 均約為15 mg，CA-5（12 g），CA-6（7 g），CA-7（9 g），CA-8（10 g），CA-9（9 g），CA-10（19 g），CA-11（21 g）。對CA-11、CA-10 分別運用高效液相色譜進行分離，最終得到了化合物4（5.43 mg）和化合物6（4.26 mg）。

化合物4：白色無定型粉末（甲醇），HR-ESIMSm/z：449.3398［M+Na］+，分子式為C29H46O2。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：0.68（3H，s，H-18），0.78-0.87（9H，m，H-26，27，29），1.02（3H，d，J=6.4Hz，H-21），1.20（3H，s，H-19），3.67（1H，m，H-3），5.02（1H，dd，J=14.9，8.5Hz，H-23），5.17（1H，dd，J=15.3，8.5Hz，H-22），5.59（1H，d，J=1.8Hz，H-6）。13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ:202.72（C-7），164.89（C-5），138.24（C-22），129.64（C-23），126.27（C-6），70.69（C-3），54.84（C-17），51.37（C-24），50.18（C-9），50.09（C-14），45.54（C-8），43.13（C-13），41.96（C-4），40.41（C-20），38.73（C-12），38.44（C-10），36.50C-1），31.34（C-16），26.56（C-15），25.52（C-28），21.57（C-21），21.36（C-11），21.21（C-26），19.15（C-27），17.46（C-19），12.40（C-29），12.35（C-18）。結合質譜信息且氫譜、碳譜數據與文獻［8］對比一致，鑒定該化合物為7-oxo-stigmasterol。

蒼耳藥材于2017年7月采于江西南昌，由江西中醫藥大學劉賢旺教授鑒定為菊科蒼耳屬植物蒼耳Xanthium mongolicumKitag.的地上部分，憑證標本保存于江西中醫藥大學標本室（ ZY-20170701）。

3 結構鑒定

2,2-聯苯基-1-苦基肼基（DPPH）和維生素C均購自上海麥克林生化科技有限公司；LH-20 羥丙基葡聚糖凝膠（Sephadex LH-20，瑞典GE Healthcar公司）；柱色譜及薄層色譜用硅膠（200 目，青島海洋化工廠產品）；水楊酸鈉（天津市大茂化學試劑廠）；硫酸亞鐵（西隴化工股份有限公司）；H2O2（西隴化工股份有限公司）；DPPH（東京化成工業株式會社）；半制備HPLC 用甲醇為色譜純（西隴化工股份有限公司）；提取分離用試劑均為分析純；水為娃哈哈純凈水。

自然陰干的10 kg 藥材粉碎后過篩，95%乙醇冷浸提取，每次7 d，提取3 次，合并提取液，減壓回收溶劑后得到提取物總浸膏800 g。總浸膏以適量乙醇溶解，拌樣，裝入已處理好的大孔樹脂柱中，依次以不同濃度乙醇梯度洗脫，得到水洗脫部位（A，200 g）、30%乙醇洗脫部位（B，80 g）、50%乙醇洗脫部位（C，120 g）、70%乙醇洗脫部位（D，60 g）和90%乙醇洗脫部位（E，150 g）。90%乙醇洗脫部位E（150 g）經硅膠柱分別以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇按15 個柱體積順序洗脫，減壓回收溶劑得到石油醚部（E1，0.67g）、二氯甲烷部（E2，47.28 g）、乙酸乙酯部（E3，59.67 g）、甲醇部（E4，20.92 g）。

風險投資在近年“共享經濟”的飛速發展中被人所熟知，是投資中介向特別有潛能的高新技術產業投入風險資本后，實現利益共享、風險共擔的一種投資方式。大學生創業遇到的最大問題就是資金不足。以Dormi為例，在校創業階段，有政府提供的項目資金與學校舉辦相關活動的獎金。在轉型進入更大市場時，依靠前期盈利與創始團隊家庭支持是不夠的，必須尋求社會資金的幫助。對于風險投資公司來說，他們也希望尋找到有發展潛力的中小型項目，通過早期“資本換股權”，從而在未來公司成熟后以更高價格將股權賣出獲得收益[2]。

甲醇部（E4，20.92 g）經硅膠柱，以石油醚∶乙酸乙酯（9∶1～0∶1）梯度洗脫，得到E4-1～11 組分。E4-10 經硅膠柱以石油醚∶丙酮（9∶1～0∶1）洗脫，得到化合物1（256.18 mg）、化合物2（58.23 mg）、化合物3（4.56 mg）和化合物5（3.25 g）。

為落實 《生態文明體制改革總體方案》，探索綠色金融發展有效路徑，2016年8月，中國人民銀行、財政部等七部門印發 《關于構建綠色金融體系的指導意見》，提出支持和鼓勵綠色投融資的一系列激勵措施。2017年6月，國務院常務會議決定在浙江、江西、廣東、貴州、新疆5省（區）選擇部分地方建設綠色金融改革創新試驗區，充分發揮綠色金融在調結構、轉方式、促進生態文明建設、推動經濟可持續發展等方面的積極作用。黨的十九大報告明確指出推進綠色發展，加快建設綠色生產和消費的法制和政策導向，構建市場導向的綠色技術創新體系，發展綠色金融，壯大節能環保產業、清潔生產產業、清潔能源產業發展。

化合物5：白色針狀結晶（氯仿），ESI-MSm/z：415.2［M+H］+，分子式為C29H50O。加入10%硫酸-乙醇溶液，樣品呈紫色斑點。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：0.68（3H，s，H-18），1.03（3H，s，H-19），0.83（3H，d，J=6.9 Hz，H-26），0.82（3H，d，J=6.9 Hz，H-27），0.85（3H，d，J=7.3 Hz，H-29），0.91（3H，d，J=6.5 Hz，H-21），3.49（1H，m，H-3），5.44（1H，dd，J=5.1 Hz，1.6 Hz，H-6）。13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：37.13（C-1），31.57（C-2），71.62（C-3），42.89（C-4），140.21（C-5），122.09（C-6），31.63（C-7），31.62（C-8），50.49（C-9），36.46（C-10），21.48（C-11），39.25（C-12），42.29（C-13），56.86（C-14），24.69（C-15），28.68（C-16），56.65（C-17），12.53（C-18），19.63（C-19），36.32（C-20），18.79（C-21），34.31（C-22），26.45（C-23），45.89（C-24），29.4（C-25），18.79（C-26），19.12（C-27），23.48（C-28），12.03（C-29）。結合質譜信息且氫譜、碳譜數據與文獻［9］對比一致，鑒定該化合物為β-谷甾醇。

化合物6：無色針晶（三氯甲烷），分子式為C45H80O2。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：5.37（1H，d，J=4.6 Hz，H-6），3.54（1H，m，H-24），2.36（2H，t，H-4），2.35（2H，m，H-2'），1.08（3H，s，H-19），0.81-0.92（15H，m，H-12，16，16'，26，27），0.69（3H，s，H-18）13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ:12.00（C-18），12.12（C-29），14.27（C-16'），18.92（C-21），19.17（C-27），19.54（C-19），19.97（C-26），21.23（C-11），22.87（C-15'），23.21（C-28），24.61（C-15），24.88（C-3'），26.32（C-23），28.39（C-16），29.29（C-25，4'，5'，6'），29.51（C-7'），29.62（C-8'），29.83（C-9'），29.85（C-10'-13'），31.79（C-2），32.05（C-14'），32.07（C-8），32.12（C-7），34.09（C-22），34.15（C-2'），36.29（C-20），36.65（C-10），37.39（C-1），39.92（C-12），42.43（C-4），42.47（C-13），45.98（C-24），50.27（C-9），56.19（C-17），56.91（C-14），71.97（C-3），121.87（C-6），140.90（C-5），178.72（C-1'）。結合質譜信息且氫譜、碳譜數據與文獻［10］對比一致，鑒定該化合物為β -谷甾醇棕櫚酸酯。

4 討論

甾族化合物是廣泛存在于生物體組織內的一類重要天然有機化合物，具有多種藥理活性。此次報道的6 個甾醇類化合物，如豆甾醇及其衍生物，能促進產生血纖維蛋白溶酶的激素因子，可作為血纖維溶解觸發素，起到預防血栓癥的作用和治療高血壓、冠心病等心血管疾病。豆甾醇具有抗骨性關節炎［11］、降低膽固醇、抗炎、抗氧化、抗腫瘤［12］等活性，還可與在水中能形成分子膜的脂質、植物生長激素結合，生成植物激素。近年來，經動物實驗表明，豆甾醇可抑制化學致癌劑誘發的大腸癌［13］。血小板活化因子（platelet activating factor，PAF）是一種與炎癥、過敏、哮喘、風濕等有關的脂類介質。尋找抑制劑可能為發現治療以上疾病的新藥提供依據。以PAF 引起的血小板聚集實驗發現化合物stigmastan-4-en-3-one 具有中等強度的抑制PAF 活性，IC50為2.63×10-5mol/L［14］。

本項研究不僅豐富了蒼耳屬植物的化學成分庫，而且這些化合物藥理活性的多樣性表明該類成分值得進一步研究。后期將對分離得到的甾族化合物展開一系列藥理活性篩選，為拓寬蒼耳的藥用價值奠定了一定的物質基礎。