惡性瘧原蟲/間日瘧原蟲抗原檢測試劑盒的臨床研究

柯天霖

（廈門國貿健康科技有限公司，福建廈門 361000）

瘧疾（Malaria），是一種由寄生蟲引起的威脅生命的疾病，通過受感染的雌蚊叮咬傳至人類，其病原體為瘧原蟲。臨床表現為間歇性、定時性、發作性的寒戰、高熱和大汗，以及貧血和脾腫大[1]。感染人類的瘧原蟲種類主要有五種，包括：惡性瘧原蟲（Plasmodium Falciparum，Pf）、間日瘧原 蟲（Plasmodium Vivax，Pv）、三日瘧原蟲（Plasmodium Malariae，Pm）、卵形瘧原 蟲（Plasmodium Ovale，Po）以及諾氏瘧原蟲（Plasmodium Knowlesi，Pk）。其中間日瘧分布最廣，遍及熱帶、亞熱帶、溫帶的國家和地區，以中美和東南亞地區為多見；惡性瘧最為嚴重，主要在非洲流行[2]。中國以間日瘧與惡性瘧最為常見，三日瘧少見，卵形瘧和諾氏瘧極少發生。

瘧疾的臨床診斷方法主要有：病原學診斷（如薄厚膜染色鏡檢、熒光染色鏡檢）[3]，病原學診斷作為瘧疾診斷的金標準；分子生物學診斷，主要擴增瘧原蟲特異性片段RNA，其靈敏度高；免疫學診斷，主要檢測瘧原蟲特異性抗原，該方法操作簡單、快捷，不需特殊儀器設備，適合基層醫院早期診斷，對于瘧疾感染的早發現、早治療和及時防控具有重要意義[4]。

英科新創研制的惡性瘧原蟲/間日瘧原蟲抗原檢測試劑盒（膠體金法）采用夾心法原理，檢測全血中惡性瘧原蟲（Pf）特異性的富組氨酸蛋白Ⅱ（Pf HRP-Ⅱ）和間日瘧原蟲（Pv）的特異性瘧原蟲乳酸脫氫酶（Pv LDH），加樣后15~20min即可觀察結果，可用于瘧疾疑似患者的輔助診斷或瘧區病例的篩選檢查。

1 研究目的

對英科新創（廈門）科技股份有限公司的惡性瘧原蟲/間日瘧原蟲抗原檢測試劑盒（膠體金法）進行臨床評估，主要考察該產品與已批準上市對照試劑之間的差異，評價該試劑的應用意義。

2 試驗管理

2.1 試驗監查

由申辦者的監查員，定期檢查試驗進展、試驗記錄與報告的數據準確、完整無誤，保證試驗遵循擬定的臨床試驗方案實施。

2.2 試驗人員培訓

試驗前各試驗單位對所屬參加人員實施培訓，要求熟知方案內容，明確方案要求，熟悉檢測試劑的使用方法，知道如何處理試驗中出現的常見問題。

2.3 試驗過程中的質量控制

嚴格按照產品說明書進行操作；試驗結果2人復核；對結果出現不同的標本留存、登記，并根據方案要求進行復檢；試驗數據輸入后雙人核對確保無誤。統計方法正確。

3 試驗設計

3.1 試驗用試劑

3.1.1 考核試劑

名稱：名稱：惡性瘧原蟲/間日瘧原蟲抗原檢測試劑盒（膠體金法）。

生產廠家：英科新創（廈門）科技股份有限公司。

3.1.2 對照試劑

名稱：惡性瘧原蟲/間日瘧原蟲抗原檢測試劑（膠體金法）。

生產廠家：南通市伊士生物技術有限責任公司。

注冊證號：國食藥監械（準）字2014第3400109號。

3.1.3 第三方方法

薄厚膜染色鏡檢。

3.2 考核用樣本

試驗共考核1 100例全血樣本，并對其中50例樣本分別采集了靜脈全血與指尖血，含有惡性瘧原蟲抗原或間日瘧原蟲抗原陽性樣本數量均具有統計學意義，均為在臨床單位試驗期間收集，置于2~8℃保存，7d之內進行臨床試驗，或之前收集的冷凍樣本，不低于-20℃保存。

3.3 檢測與分析方法

所有檢測試劑的使用，均嚴格按照產品使用說明書要求操作。

對臨床試驗所有標本，平行使用英科新創（廈門）科技股份有限公司的考核試劑與對照試劑進行檢測。考核試劑與對照試劑檢測不符的樣本，可進行復試，復試后仍不一致的樣本則采用第三方試劑進行檢測。統計考核試劑與對照試劑的陽性和陰性符合率，比較考核試劑與國家已批準上市的同品種之間的差異，如表1所示。

表1 惡性瘧原蟲抗原靜脈全血試驗結果統計

4 臨床研究結果綜合分析與評價

4.1 臨床結果綜合分析（靜脈全血樣本1100例）

4.1.1 惡性瘧原蟲抗原項

惡性瘧原蟲抗原靜脈全血的臨床試驗結果統計如表1所示，綜合分析如下。

（1）陽性符合率：322/322=100%

（2）陰性符合率：768/778=98.71%

（4）Pa=（322+768）/1 100=0.9909

（5）Pe=｛（322+0）（322+10）+（768+0）（768+ 10）｝/1 1002=0.5821

（6）Kappa=（Pa-Pe）/（1-Pe）=（0.9909- 0.582 1）/（1-0.582 1）=0.98＞0.75，兩者檢測結果有高度一致性。

5.1.2 間日瘧原蟲抗原項

間日瘧原蟲抗原靜脈全血的臨床試驗結果統計如表2所示，綜合分析如下。

表2 間日瘧原蟲抗原靜脈全血試驗結果統計

（1）陽性符合率：180/180=100%（2）陰性符合率：885/920=96.20%

（3）樣本總符合率：（180+885）/1 100=96.82%（4）Pa=（180+885）/1 100=0.9682

因此，選擇適合香菇優良品種，綜合考慮品種特性、市場需求和當地氣候特點[7]，結合區域氣候、地形、人力等基本情況，加強并提高技術管理形成規范化的模式和技術規程，對于引進菌類品種的栽培成功非常重要。跟進當地氣候變化情況，因地制宜及時進行技術、管理調整，多參考前人成功事例，總結失敗與成功的經驗，是產業落地穩定可持續發展的重要步驟。

（5）Pe=｛（180+0）（180+35）+（885+0）（885+ 35）｝/1 1002=0.7049

（6）Kappa=（Pa-Pe）/（1-Pe）=（0.9682- 0.7049）/（1-0.7049）=0.89＞0.75，兩者檢測結果有高度一致性。

4.1.3 考核與對照不符樣本的第三方試劑確認結果

臨床考核試劑與對照試劑對靜脈全血樣本檢測結果共有45例不相符樣本。其中，有10樣本為考核試劑檢測結果為惡性瘧原蟲抗原陽性、對照試劑檢測結果為陰性，經第三方鏡檢確認結果與考核試劑結果一致，均為惡性瘧原蟲抗原陽性樣本；另外35例樣本考核試劑檢測結果為間日瘧原蟲抗原陽性、對照試劑檢測結果為陰性，經第三方鏡檢確認結果與考核試劑結果一致，均為間日瘧原蟲抗原陽性樣本。

4.2 靜脈全血與指尖血比對試驗結果統計（50例）

4.2.1 惡性瘧原蟲抗原項

惡性瘧原蟲抗原靜脈全血與指尖血的比對試驗結果統計如表3所示。

表3 惡性瘧原蟲抗原靜脈全血與指尖血比對試驗結果統計

4.2.2 間日瘧原蟲抗原項

間日瘧原蟲抗原靜脈全血與指尖血的比對試驗結果統計如表4所示。

表4 間日瘧原蟲抗原靜脈全血與指尖血比對試驗結果統計

結果表明：考核試劑對惡性瘧原蟲抗原或間日瘧原蟲抗原在靜脈全血與指尖血兩種樣本類型檢測結果均一致，不存在差異。

5.3 相關疾病干擾情況統計

本次臨床試驗中有艾滋病（80例）、乙肝（25例）、結核（20例）、肺炎（19例）、登革熱（7例）、新型隱球菌腦膜炎（4例）、恙蟲病（1例）、破傷風（1例）和卵形瘧（1例）等引起相似癥狀疾病的標本對考核試劑檢測結果不產生干擾作用，間日瘧原蟲抗原與惡性瘧原蟲抗原的檢測不產生相互干擾作用。

6 討論與結論

本次試驗共考察臨床樣本1 100例，其中，考核試劑共檢出惡性瘧原蟲抗原陽性樣本322例，間日瘧原蟲抗原陽性樣本180例；與對照試劑檢測結果作對比，考核試劑對惡性瘧原蟲抗原檢測結果的陽性符合率為100%，陰性符合率為98.71%，總體符合率為99.09%，kappa值為0.98；對間日瘧原蟲抗原檢測結果的陽性符合率為100%，陰性符合率為96.2%，總體樣本符合率為96.82%，kappa值為0.89。考核試劑對50例靜脈全血與指尖血樣本比對試驗，檢測結果完全一致。

試驗結果出現45例不符合樣本，即考核試劑檢出10例惡性瘧、35例間日瘧陽性而對照試劑均顯示陰性結果，經鏡檢確認，考核試劑檢出陽性是正確的。經分析，其原因應為考核試劑比對照試劑的樣本裂解液對新鮮樣本紅細胞的裂解更充分，從而確保待測抗原的釋放。試驗中引起相似癥狀疾病的標本對考核試劑檢測結果不產生干擾作用，間日瘧原蟲抗原與惡性瘧原蟲抗原的檢測不產生相互干擾作用。

由英科新創（廈門）科技股份有限公司研制的惡性瘧原蟲/間日瘧原蟲抗原檢測試劑盒（膠體金法）試劑背景干凈，條帶清晰，結果顯示快速、操作簡便等特點，適用于人體靜脈全血或指尖血樣本中惡性瘧原蟲抗原或間日瘧原蟲抗原的檢測。