SYN、Tβ4與非小細胞肺癌臨床特征及預后的關系

伍永升，宋利明，王正煜，范志剛

非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer， NSCLC)是原發于支氣管黏膜、腺體及肺泡上皮的一種惡性腫瘤，具有發病率高、病死率高的特點[1]。目前，臨床主要依據患者TNM分期采用合適的診療計劃進行治療，但NSCLC作為一種高度異質性疾病，在療效及預后等方面仍存在明顯的個體差異，僅通過TNM分期作為方案制定的依據難以滿足治療需求。奚劍敏等[2]在NSCLC的研究中提出，突觸素(SYN)的檢測有利于預測NSCLC患者的預后，可作為病情進展評估的重要標志，但仍有部分學者持有不同意見。SYN屬于鈣結合糖蛋白，分布于神經元突觸前囊泡膜，參與鈣調節及囊泡運輸的過程。而胸腺素β4(Tβ4)對細胞運動、增殖分化有一定影響，屬于肌動蛋白的鰲合型分子。馬藝欣等[3]認為，Tβ4高表達與NSCLC預后不良相關，可能參與上皮細胞轉化成間質表型細胞的生物學過程。因此，本研究通過分析SYN、Tβ4在不同組織中的表達情況及作用機制，旨在探索SYN、Tβ4與NSCLC臨床特征及預后的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年2月—2021年2月收治的NSCLC 98例。納入標準：經病理學檢查確診；臨床資料完整；均未接受放化療。排除標準：肝腎功能異常者；合并其他血液、腫瘤疾病；存在自身免疫性疾病。98例中男53例，女45例；年齡40～78(61.42±18.56)歲；疾病類型：腺癌66例，鱗癌32例；分化程度：低分化28例，中分化32例，高分化38例；腫瘤分期：Ⅰ期28例，Ⅱ期34例，Ⅲ期36例；淋巴結轉移情況：轉移39例，無轉移59例。

1.2方法 所有患者在CT下經皮穿刺活檢取材，在腫瘤組織及癌旁組織(距腫瘤組織5 cm)處取材。SYN、Tβ4抗體均購自Abcam公司，通用型SP試劑盒、DAB顯色管及抗原修復液等材料均購自北京中杉金橋生物有限公司。采用免疫組化法檢測SYN、Tβ4表達情況，具體步驟：將手術獲取的組織進行包埋處理，切取厚度為4 μm的石蠟切片，經基礎脫蠟、水化后，加0.3% H2O2內源性過氧化氫酶15 min。經過抗原熱修復后，將SYN、Tβ4抗體放入37 ℃環境中孵育120 min，封閉劑溫育30 min，隨后滴加二抗溫育30 min，將DAB作為顯色劑，用蘇木素染色，隨后進行常規脫水、封片處理。結果評定：選10個高倍視野(×400)進行觀察。SYN、Tβ4顯示淡黃至深棕色則為陽性，最終評分為染色強度×陽性細胞百分比。陽性細胞比例評分為0分：≤10%，1分：11%～25%，2分：26%～50%，3分：51%～75%，4分：≥75%。染色強度：0分：無色，1分：淡黃色，2分：棕色，3分：深棕色。最終評分：0～4分表示陰性，5～12分表示陽性。

1.3觀察指標 ①對比不同組織中SYN、Tβ4的表達情況。②分析SYN、Tβ4表達與臨床特征的關系。③通過電話、復查等方式隨訪1年，根據預后情況分為預后良好組(1年內無復發、轉移、死亡)和預后不良組(1年內死亡、病情進展)，分析患者預后不良的影響因素。

2 結果

2.1SYN、Tβ4表達情況 NSCLC組織中SYN陽性表達率低于癌旁組織，Tβ4陽性表達率高于癌旁組織(P<0.01)。見表1。

2.2SYN、Tβ4表達與臨床特征的關系 NSCLC組織中SYN、Tβ4表達與年齡、性別、病理類型、腫瘤大小、吸煙史、分化程度無關(P>0.05)，與淋巴結轉移及TNM分期有關(P<0.05)。見表2。

2.3影響NSCLC患者預后不良的單因素分析 98例中在1年內無復發、轉移、死亡60例，為預后良好組；1年內死亡、病情進展38例，為預后不良組。經單因素分析，2組年齡、腫瘤大小、分化程度、病理類型比較差異無統計學意義(P>0.05)。2組TNM分期、淋巴結轉移及SYN、Tβ4表達情況比較差異有統計學意義(P<0.05，P<0.01)。見表3。

表3 影響NSCLC患者預后的單因素分析[例(%)]

表1 NSCLC患者不同組織中SYN、Tβ4表達情況[例(%)]

表2 NSCLC患者SYN、Tβ4表達與臨床特征的關系[例(%)]

2.4影響NSCLC患者預后的多因素Logistic回歸分析 將單因素分析差異有統計學意義的指標納入多因素Logistic回歸分析，以預后情況為因變量(預后良好=0，預后不良=1)，自變量賦值：TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期=0，Ⅲ期=1；淋巴結轉移：否=0，是=1；SYN：陽性=0，陰性=1；Tβ4：陰性=0，陽性=1。結果顯示，TNM分期Ⅲ期、淋巴結轉移及SYN陰性表達、Tβ4陽性表達是NSCLC患者預后不良的獨立危險因素(P<0.05，P<0.01)。見表4。

3 討論

NSCLC是臨床常見的肺癌類型，約占肺癌的80%[4-5]。彭博和張臨友[6]報道，多數NSCLC患者預后較差且容易出現復發等情況。隨著研究的深入，探索影響NSCLC預后的分子機制，逐漸發展為臨床研究的熱點。

大量研究證實，Tβ4在膀胱癌、結腸癌及甲狀腺髓樣癌等多種疾病中均出現異常表達的情況，其陽性表達率的上升與腫瘤發生、轉移息息相關[7]。盧晴晴等[8]研究發現，SYN在輔助診斷小細胞肺癌時的敏感度較高，其高表達與患者低生存率存在一定聯系。而在NSCLC中關于SYN的相關研究較少。本研究結果顯示，NSCLC組織中Tβ4陽性表達率高于癌旁組織，SYN陽性表達率低于癌旁組織，與眭玉霞等[9]研究結果基本一致。推測原因在于Tβ4可能通過誘導原肌球蛋白、β-肌動蛋白的表達，間接參與網絡重組過程，其誘導的腫瘤細胞形態學變化與細胞-基質轉化極為相似，從而促進細胞運動與存活，當Tβ4表達上調時，能明顯促進腫瘤細胞的轉移能力[10]。

表4 影響NSCLC患者預后的多因素Logistic回歸分析

在腫瘤細胞進一步發生上皮-間質的轉化過程中，SYN可能發揮明顯的抑制作用。在此過程中相關膠原蛋白、蛋白聚糖等黏性物質被有效降解，促使細胞外基質成分發生改變，顯著降低細胞黏附性，而SYN表達下調時，轉化抑制作用受限，造成腫瘤細胞遷移[11]。GüBELI等[12]在對體外進化肽結合單體肌動蛋白的研究中發現，Tβ4與肌動蛋白同為轉谷氨酰胺酶的內源性底物，在該酶的凋亡程序中具有重要意義。而轉谷氨酰胺酶可通過促進蛋白質間發生共價交聯，使相關蛋白在結構和功能上發生一定改變，能有效調節腫瘤的發生。劉愛鳳等[13]研究發現，SYN在肺淋巴上皮瘤樣癌組織中陰性表達。而本研究發現，NSCLC組織中SYN、Tβ4的表達與淋巴結轉移及TNM分期有關。提示，SYN陰性表達、Tβ4陽性表達與腫瘤細胞發生淋巴結轉移、促進病情發展有關。分析原因在于，Tβ4能明顯加速間充質干細胞的增殖速度，利用其自身的更新和多向分化能力，對腫瘤細胞發生表型轉移具有重要意義，其作用機制可能與白細胞介素-8的依賴性有關[14]。而ZHONG等[15]提出SYN基因在腎上腺皮質瘤中的甲基化程度有所提升。其主要通過化學修飾的方式將蛋白質、核酸等基因組形成甲基化產物，對相關基因表達的調控有一定的作用。在NSCLC組織中SYN甲基化程度升高，導致其陽性表達率下降。此外，本研究多因素Logistic回歸分析顯示，TNM分期、淋巴結轉移及SYN、Tβ4表達情況為NSCLC患者預后不良的獨立危險因素。證實了SYN、Tβ4表達情況可作為NSCLC患者預后評估的有效依據。在以往體外實驗中發現，Tβ4表達下調對抑制腫瘤細胞增殖、侵襲有著重要作用[16]。因此，當Tβ4表達上調、SYN表達下調時，NSCLC患者預后通常不能達到理想狀態，但具體機制仍需進一步研究。

綜上所述，NSCLC組織中SYN、Tβ4表達與淋巴結轉移及TNM分期有關，SYN陰性表達、Tβ4陽性表達是預后不良的獨立危險因素。